CN103913520A - 一种复方丹参滴丸溶出度的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复方丹参滴丸溶出度测定方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、采用小杯法进行试验使用，然后采用超高效液相色谱测定溶出量，计算各个时间点溶出度。本方法具有很好的专属性、精密度、稳定性和耐用性，线性关系良好，有助于更好地控制复方丹参滴丸的治疗。

Description

一种复方丹参滴丸溶出度的测定方法

技术领域:

本发明属于中药技术领域，特别涉及中药的检测方法，具体涉及一种复方丹参滴丸溶出度的测定方法。

背景技术:

固体制剂口服给药后，药物的吸收取决于药物从制剂中的溶出或释放、药物在生理条件下的溶解以及在胃肠道的渗透。由于药物的溶出和溶解对吸收具有重要影响，因此，体外溶出度试验有可能预测其体内行为。基于上述考虑，建立口服固体制剂体外溶出度试验方法，有下列作用：

（1）评价制剂批间质量的一致性；

（2）指导新制剂的研发；

（3）在产品发生某些变更后（如处方、生产工艺、生产场所变更和生产工艺放大），确认药品质量和疗效的一致性。

在确定溶出度质量标准时，应考虑到药物的溶解性、渗透性、溶出行为及药代动力学特性等因素，以保证药品批间质量的一致性、变更以及工艺放大前后产品质量的一致性。

复方丹参滴丸为天士力公司开发的活血化瘀、理气止痛中药，用于胸中憋闷、心绞痛，其主要成分为丹参、三七、冰片，其药理作用包括1 增加冠脉血流量，2 增加心肌耐缺氧保护缺血心肌，3 抗血小板聚集防止血栓形成，4 改善微循环。

复方丹参滴丸中丹参味苦，性微寒，具有活血化瘀，养血安神，凉血排痈和排毒生肌的功效，是中药活血化瘀的常用药物。丹参药材主含脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸类成分，尚含有黄酮类、三萜类、甾醇等其他成分。二萜类成分中属醌、酮型结构的有丹参酮I、ⅡA、Ⅱ_R、V、Ⅵ，隐丹参酮，异丹参酮I、Ⅱ、II_B，二氢丹参酮I等。水溶性的酚酸类成分有丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸及丹参素与咖啡酸的衍生物或二聚物酯化而成的缩酚酸。

作为一种固体口服制剂，复方丹参滴丸溶出度的测定具有重要意义，但由于中药成分的复杂性，如何准确测定其有效成分的溶出度需要进行多方面的考察，本发明为了更好地考察复方丹参滴丸在体内的溶出、吸收情况，对多种实验方法进行了考察，建立了一种灵敏度高，准确度高，重复性好的溶出度测定方法。

发明内容:

为了了解复方丹参滴丸体外释放的特性，本发明对复方丹参滴丸的溶出度情况进行系统研究寻找一种合适的溶出度测定方法。

复方丹参滴丸主要包括两组活性成分（水溶性丹参酚酸类成分和人参皂苷类成分），根据溶出度测定方法在口服用药后的胃肠道吸收及体内药代动力学基本特征,水溶性丹参酚酸类成分中，丹参素和原儿茶醛能较好的经胃肠道吸收。故确定以丹参素为指标成分，测定复方丹参滴丸的溶出度。

根据本发明的复方丹参滴丸溶出度测定方法，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：取对照品，加0%-100%甲醇-水制成溶液，即为对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取复方丹参滴丸，置量瓶中，加水，超声处理使溶解，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；

（3）取5-15粒复方丹参滴丸，以150-250ml纯化水、pH4.5或pH6.8的缓冲溶液作为溶出介质，采用小杯法进行试验；

（4）采用超高效液相色谱测定溶出量，计算各个时间点溶出度。

根据本发明的实施方式之一，所述步骤（1）对照品溶液的制备为：取丹参素钠，加水制成溶液，即为对照品溶液。

根据本发明的另一实施方式，所述步骤（2）为供试品溶液的制备：取复方丹参滴丸5-15粒，置量瓶中，加水，超声处理使溶解，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

根据本发明的再一实施方式，所述步骤（3）的溶出介质为纯化水。

分别考察了PH4.5、PH6.8的缓冲溶液和纯化水3种不同的溶出介质，3种介质中，丹参素的溶出基本无差异，由于纯化水做介质操作简便，省时易得，故选用纯化水做介质。

特别优选的，所述纯化水的体积为250ml。

分别考察了150ml、200ml、250ml 纯化水的溶出结果，在三种不同溶质体积下，丹参素溶出曲线基本一致，但考虑溶质量越小，则受体积影响越大，越易造成六个杯的不平行，故在线性允许范围内，优选溶出介质为250ml。

根据本发明实施方式之一，所述步骤（3）的溶出介质的温度为36-38℃。

根据本发明另一实施方式，所述步骤（3）的小杯法的搅拌桨转速为50-150转/min。

优选的，所述步骤（3）的小杯法的搅拌桨转速为100转/min。

考察了搅拌桨的速度分别为50、75、100、150转/min时的测定结果。转速过快，易造成水动力学紊乱而致使6个溶出杯平行性差，且不宜区分不同制剂的溶出行为；而取样时间一般设置在溶出曲线的拐点附近或略靠后，50转/min时溶出拐点出现在45min，75转/min时溶出拐点出现在30min，100转/min时溶出拐点出现在15min，故为体现产品快速释放的特点，优选转速为100转/min，取样时间设在20min。

根据本发明的再一实施方式，所述步骤（4）的超高效液相色谱测定所用色谱条件如下：采用C18色谱柱，流动相A相为磷酸溶液-乙腈、流动性B相为磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为280nm，柱温40℃。

优选的，所述流动相A相为含0.02%磷酸的80%乙腈，所述流动相B相为0.02%的磷酸水溶液，所述梯度洗脱的梯度为：

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

根据本发明，在20min时，复方丹参滴丸中丹参素的溶出度不低于80%。

本发明的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

丹参素钠对照品：  中国药品生物制品检定所 批号：110855-200809

复方丹参滴丸：    天士力制药集团股份有限公司

（批号：111208 、 120104、 120105 、120109 ）

乙       腈：    德国默克  批号：1599630131

超  纯  水 ：    公司自制

磷酸 ：天津市风船化学试剂科技有限公司（分析纯） 批号：20110901

1.2 仪器

智能药物溶出仪：天大天发公司   型号： ZRS-8G  仪器编号：QC-M-026

超高效液相色谱仪：美国Waters 公司   型号：H-class 仪器编号：QC-M-259

色谱柱：Waters Aqucity UPLC^TM HSS T3（2.1×100mm，1.8μm），SN：01173935115593

1.3 色谱条件

Waters Aqucity UPLC^TM HSS T3（2.1×100mm，1.8μm）色谱柱，以含0.02%（ml/ml）磷酸的80%乙腈为流动相A，以0.02%（ml/ml）的磷酸水溶液为流动相B，按以下进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟。

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸10粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取10粒复方丹参滴丸，以250ml纯化水作为溶出介质，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。典型溶出样品色谱图见图1。

溶出介质的选择

考察了PH4.5、PH6.8的缓冲溶液和纯化水3种不同的溶出介质， 如表1所示，三种介质中，丹参素的溶出基本无差异，见图2，考虑纯化水做介质操作简便，省时易得，故选用纯化水做介质。

表1 不同溶出介质对丹参素溶出测定的影响

溶出介质体积的选择

考察了150ml、200ml、250ml 纯化水的溶出结果，见表2，如图3，在三种不同溶质体积下，丹参素溶出曲线基本一致，表明介质的多少对溶出影响不大，但考虑溶质量越小，则受体积影响越大，越易造成六个杯的不平行，故在线性允许范围内，确定溶出介质为250ml。

表2不同溶出介质体积对丹参素溶出测定的影响

搅拌速度的选择

调整搅拌桨的速度分别为50、75、100、150转/min，测定结果如表3所示，溶出曲线图见图4。转速过快，易造成水动力学紊乱而致使6个溶出杯平行性差，且不宜区分不同制剂的溶出行为；而取样时间一般设置在溶出曲线的拐点附近或略靠后，50转/min时溶出拐点出现在45min，75转/min时溶出拐点出现在30min，100转/min时溶出拐点出现在15min，故为体现产品快速释放的特点，确定转速为100转/min，取样时间设在20min。

表3不同搅拌速度对丹参素溶出测定的影响

溶出度方法学验证

采用250ml纯化水为溶出介质，温度37℃，转速100转/min，分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

专属性试验

阴性样品溶液制备

按处方配比，分别称取除丹参外的其他药材，按复方丹参滴丸工艺方法制得缺丹参阴性样品，取缺丹参阴性滴丸10丸溶解于250ml纯化水中，即得。

100%标准处方制备

取丹参素钠16.46mg至100ml容量瓶中，加75%甲醇溶液，溶解并定容至刻度，精密吸取5ml至100ml容量瓶中，加75%甲醇溶液定容至刻度，作为100%标准处方（丹参素浓度为0.007407mg/ml）。

专属性试验

精密吸取阴性样品溶液与100%标准处方溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，进行对比：100C（Ap/As）（V/L），干扰应不超过2%（参照USP<1092> THE DISSOLUTION PROCEDURE: DEVELOPMENT AND VALIDATION）。

C是100%标准处方浓度（mg/ml）；Ap和As分别是阴性样品和100%标准处方峰面积；V是介质体积（ml）；L为实际含量（mg）。

结论：阴性样品对溶出度测定无干扰。见图5。

丹参素阴性干扰：100×0.007407×(0/30094)×(250/0.2067)=0

线性和范围

精密称取丹参素钠对照品16.07mg，置50ml容量瓶中，加纯化水溶解定容，制成每1ml约0.3214mg的溶液，精密量取上述溶液液2ml置10ml量瓶中，定容；依次逐级稀释，制得浓度为0.00010284mg/ml、0.00051424mg/ml、0.0025712mg/ml、0.012856 mg/ml、0.06428 mg/ml的系列对照溶液。分别吸取上述溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪，以丹参素钠浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程Y=3×10⁶X-35.17  r²=1.0000，表明丹参素钠线性关系良好，线性范围为0.00010284~0.3214mg/ml。结果见表4，线性图6。

表4丹参素标准曲线

准确度试验

精密称取丹参素钠16.07mg至50ml容量瓶中，加纯化水溶解并定容至刻度，精密吸取0.6ml至25ml容量瓶中，加入适量辅料，用纯化水定容至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，滤液即为准确性试验溶液，平行6份；另精密称取丹参素钠对照品适量，用75%甲醇溶解并配制成相应浓度的对照品溶液；精密吸取上述两种溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪，按外标法计算出丹参素的回收率。丹参素的平均回收率为99.20%，RSD为1.18%，表明准确性试验符合规定。结果见表5。

表5丹参素准确度试验结果

精密度试验

重复性试验

取同一溶出度测定样品（20分钟取样），连续进样6次，样品中丹参素峰面积RSD为0.34%，表明重复性试验符合规定。结果见表6。

表6丹参素重复性试验

中间精密度试验

因实验室现仅有一台溶出仪配备有小溶出杯，故暂仅对人员因素进行考察。

取相同批号样品（111208），由3名分析人员分别在不同时间进行测定，计算各时间点溶出度的RSD，第一个时间点RSD应不超过20%，其他时间点，RSD应不超过10%。结果见表7，图7，由结果表明中间精密度试验符合规定。

表7丹参素中间精密度试验

耐用性试验

在溶出度的测定过程中，溶出介质的体积、搅拌速度、温度均有可能对实验结果造成影响，因此需对上述参数进行评估。

溶出介质体积的影响

分别量取245ml、250ml、255ml 纯化水进行测定，计算各时间点溶出度的RSD，第一个时间点RSD应不超过20%，其他时间点，RSD应不超过10%。结果见表8，图8，由结果表明不同溶出介质体积对溶出度测定没有影响。

表8不同溶出介质体积对丹参素溶出测定的影响

搅拌速度的影响

调整搅拌桨的速度分别为95、100、105转进行测定，计算各时间点溶出度的RSD，第一个时间点RSD应不超过20%，其他时间点，RSD应不超过10%。结果见表9，图9，由结果表明不同搅拌速度对溶出度测定没有影响。

表9不同搅拌速度对丹参素溶出测定的影响

温度的影响

调整水浴温度分别为36、37、38℃进行测定，计算各时间点溶出度的RSD，第一个时间点RSD应不超过20%，其他时间点，RSD应不超过10%。结果见表10，见图10，由结果表明不同温度对溶出度测定没有影响。

表10不同温度对丹参素溶出测定的影响

脱气的影响

采用抽滤法对纯化水进行脱气，与不脱气纯化水分别进行考察，计算各时间点溶出度的RSD，第一个时间点RSD应不超过20%，其他时间点，RSD应不超过10%。结果见表11，见图11，由结果表明溶出介质纯化水是否脱气对溶出度测定没有影响，但为减少气泡对结果的影响，要求对溶出介质纯化水进行抽滤脱气。

表11 脱气对丹参素溶出测定的影响

稳定性试验

对照品溶液稳定性试验

取丹参素钠对照品适量，加水溶液制成对照品溶液（丹参素浓度为0.14814mg/ml），分别于0、2、4、6、8、12、24小时进样，测定丹参素峰面积RSD为0.23%，表明丹参素对照品溶液在24小时内稳定。结果见表12。

表12丹参素对照品溶液稳定性试验

样品溶液稳定性试验

取同一溶出度测定样品溶液（20nim）分别于0、2、4、6、8、12、24小时进样，测定丹参素峰面积RSD为0.49%，表明样品溶液在24小时内稳定。结果见表13。

表13样品溶液稳定性试验

溶出度限度的制定

分析4批复方丹参滴丸溶出度测定情况，发现溶出拐点均出现在15min左右，且溶出拐点前，素丸的溶出速度较包衣丸稍快，这与产品的剂型特点相吻合。为体现产品快速释放的特点，取样时间设在20min；同时4批样品在20min时，溶出度均在90%以上，考虑产品可能存在的溶出差异，暂定溶出限度（Q）为80%。

为考察暂定限度的合理性，于留样中分别选取20080710、090116、100616、111010进行溶出度考察，结果见表13。按Q=80%判断，均符合要求。

表13复方丹参滴丸留样20min溶出度测定结果

本发明的优点和效果。

本发明具有很好的线性、重复性、重现性和回收率，有助于更加全面控制复方丹参滴丸的质量。

附图说明:

图1典型溶出样品色谱图(20min取样)。

图2不同溶出介质对丹参素溶出测定的影响。

图3不同溶出介质体积对丹参素溶出测定的影响。

图4不同溶出介质体积对丹参素溶出测定的影响。

图5（1）阴性样品测定图。

图5（2）100%标准处方样品测定图。

图6丹参素钠标准曲线图。

图7不同人员溶出度测定比较图。

图8溶质体积耐用性试验比较图。

图9搅拌速度耐用性试验比较图。

图10水浴温度耐用性试验比较图。

图11溶出介质纯化水是否脱气影响试验比较图。

图12 批号为111208（包衣丸）与2011K19（素丸）溶出度测定比较图。

图13批号为120104（包衣丸）与2011L14（素丸）溶出度测定比较图。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1.

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

丹参素钠对照品：  中国药品生物制品检定所 批号：110855-200809

复方丹参滴丸：    天士力制药集团股份有限公司

（批号：111208 、 120104、 120105 、120109 ）

乙       腈：    德国默克  批号：1599630131

超  纯  水 ：    公司自制

磷酸 ：天津市风船化学试剂科技有限公司（分析纯） 批号：20110901

1.2 仪器

智能药物溶出仪：天大天发公司   型号： ZRS-8G  仪器编号：QC-M-026

超高效液相色谱仪：美国Waters 公司   型号：H-class 仪器编号：QC-M-259

色谱柱：Waters Aqucity UPLC^TM HSS T3（2.1×100mm，1.8μm），SN：01173935115593

1.3 色谱条件

Waters Aqucity UPLC^TM HSS T3（2.1×100mm，1.8μm）色谱柱，以含0.02%（ml/ml）磷酸的80%乙腈为流动相A，以0.02%（ml/ml）的磷酸水溶液为流动相B，按以下进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟。

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸10粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取10粒复方丹参滴丸，以250ml纯化水作为溶出介质，温度37℃，转速100转/min，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

取上述4批复方丹参滴丸各6份，测定各时间点的溶出度，结果见表14、15，图12、13。

表14 批号为111208（包衣丸）与2011K19（素丸）溶出度测定结果

表15批号为120104（包衣丸）与2011L14（素丸）溶出度测定结果

实施例2.

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

同实施例1.

1.2 仪器

同实施例1.

1.3 色谱条件

Thermo Hypersil  GOLD aQ(100mm×2.1mm，1.9μm)色谱柱，以含0.01%（ml/ml）磷酸的80%乙腈为流动相A，以0.01%（ml/ml）的磷酸水溶液为流动相B，按以下进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为256nm；柱温40℃；记录时间为10分钟。

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸5粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取5粒复方丹参滴丸，以250mlPH为6.8的磷酸缓冲液作为溶出介质，温度36℃，转速75转/min，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

实施例3.

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

同实施例1.

1.2 仪器

同实施例1.

1.3 色谱条件

Agilent SB- C₁₈  RRHD(100mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱，以含0.05%（ml/ml）磷酸的60%乙腈为流动相A，以0.05%（ml/ml）的磷酸水溶液为流动相B，按以下进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟。

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加100%甲醇制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸15粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取15粒复方丹参滴丸，以250mlPH为4.5的磷酸缓冲液作为溶出介质，温度38℃，转速150转/min，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

实施例4.

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

同实施例1.

1.2 仪器

同实施例1.

1.3 色谱条件

Waters Aqucity UPLC^TM HSS T3（2.1×100mm，1.8μm）色谱柱，以含0.03%（ml/ml）磷酸的80%乙腈为流动相A，以0.03%（ml/ml）的磷酸水溶液为流动相B，按以下进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟。

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸10粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取10粒复方丹参滴丸，以150ml纯化水作为溶出介质，温度38℃，转速100转/min，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

实施例5.

1.0 实验材料

1.1 试剂与试药

同实施例1.

1.2 仪器

同实施例1.

1.3 色谱条件

同实施例1

2 溶出度的测定

2.1对照品溶液制备

取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含64μg的溶液（相当于每1ml含丹参素57.6μg），即得。

2.2 供试品溶液制备

取复方丹参滴丸10粒，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理（功率120W，频率40kHz）15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 溶出度的测定

取10粒复方丹参滴丸，以200ml纯化水作为溶出介质，温度37℃，转速100转/min，采用小杯法进行试验，测定复方丹参滴丸的溶出度。

2.4 溶出度的计算

分别在5、10、15、20、30、45、60分钟吸取溶液2ml（手动补液），立即经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液2μl注入超高效液相色谱仪（H-class）测定，算出每10丸样品丹参素的溶出量，与样品的实际含量比较，计算各个时间点溶出度。

Claims (10)

1.一种复方丹参滴丸溶出度测定方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：取对照品，加0%-100%甲醇-水制成溶液，即为对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取复方丹参滴丸，置量瓶中，加水，超声处理使溶解，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；

（3）取5-15粒复方丹参滴丸，以150-250ml纯化水、pH1.2、pH4.5或pH6.8的缓冲溶液作为溶出介质，采用小杯法进行试验；

（4）采用超高效液相色谱测定溶出量，计算各个时间点溶出度。

2.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（1）对照品溶液的制备为：取丹参素钠，加水制成溶液，即为对照品溶液。

3.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（2）为供试品溶液的制备：取复方丹参滴丸5-15粒，置量瓶中，加水，超声处理使溶解，加水至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

4.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（3）的溶出介质为纯化水。

5.根据权利要求4的测定方法，其中，所述纯化水的体积为250ml。

6.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（3）的溶出介质的温度为36-38℃。

7.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（3）的小杯法的搅拌桨转速为50-150转/min。

8.根据权利要求1的测定方法，其中，所述步骤（4）的超高效液相色谱测定所用色谱条件如下：采用C18色谱柱，流动相A相为磷酸溶液-乙腈、流动性B相为磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为280nm，柱温40℃。

9.根据权利要求8的测定方法，其中，所述流动相A相为含0.02%磷酸的80%乙腈，所述流动相B相为0.02%的磷酸水溶液，所述梯度洗脱的梯度为：

0-1.6分钟，9%→22%A相；

1.6-1.8分钟，22%→26%A相；

1.8-8.0分钟，26%→39%A相；

8.0-8.4分钟，39%→9%A相；

8.4-10.0分钟，9%A相。

10.根据权利要求1-9任一项所述的测定方法，其中，在20min时，复方丹参滴丸中丹参素的溶出度不低于80%。