CN104391048A - 一种用液相色谱测定阿卡波糖溶出曲线的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用高效液相色谱法测定阿卡波糖口崩片在不同溶出介质中溶出曲线的方法，该方法以苯基磺酸基键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相，可以定量测定阿卡波糖口崩片在不同溶出介质中的溶出浓度，进而绘制出溶出曲线。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法测定阿卡波糖口崩片溶出曲线的方法。
背景技术
阿卡波糖是一种新型口服降糖药。在肠道内竞争性抑制葡萄糖甙水解酶。减少多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相应减缓，因此具有降低饭后血糖水平的作用。一般单用，或与其它口服降血糖药、或胰岛素合用，配合餐饮，治疗胰岛素依赖型或非依赖型糖尿病。阿卡波糖化学名为O-4,6-双脱氧-4[[(1S,4R,5S,6S)4,5,6-三羟基-3-(羟基甲基)-2-环己烯]氨基] -(-D-吡喃葡糖基(1→4)-O-)-D-吡喃葡糖基(1→4)-D-吡喃葡萄糖，分子式C25H43NO18。阿卡波糖结构式为：
。
发明内容
本发明的目的在于提供一种阿卡波糖口崩片溶出曲线的测定方法，保证阿卡波糖口崩片在不同溶出介质中的浓度均可定量测定。
本发明所述的用高效液相色谱测定阿卡波糖口崩片溶出曲线的方法，是采用以苯基磺酸基键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。
上述所说的色谱柱以苯基磺酸基键合硅胶为填料，选自Phenomenex SCX或Waters SCX。
上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选乙腈。
上述所说的方法中，缓冲盐选自磷酸盐、醋酸盐、甲酸盐、柠檬酸盐等，优选磷酸盐。
其中缓冲盐溶液的pH为3.0~4.0，缓冲盐溶液pH优选3.8。
本发明所述的测定方法，可按照以下方法实现：
1） 取不同溶出介质中，阿卡波糖口崩片的溶出样品，样品浓度约为0.01mg/mL~0.1mg/mL；
2）设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，优选1.0mL/min；检测波长为205～280nm，检测波长优选210nm；柱温箱温度为15～40℃，优选35℃；
3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成阿卡波糖口崩片溶出浓度的测定。
其中，高效液相色谱仪的型号无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：
LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp ；
本发明采用的SCX（Phenomenex，250×4.6mm，5μm）色谱柱，能够有效测定阿卡波糖口崩片在不同溶出介质中的溶出浓度。本发明解决了阿卡波糖在不同溶出介质中的溶出浓度不能用同一种方法检出的问题，从而节省了分析时间，保证了不同溶出介质中阿卡波糖的浓度均可被检出。（结果见附图1～7）。
附图说明
图1为实施例1中pH 1.2的溶出介质的HPLC图；
图2为实施例1中pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的HPLC图；
图3为实施例2中pH 1.2的溶出介质的HPLC图；
图4为实施例2中pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的HPLC图；
图5为实施例3中pH 1.2的溶出介质的HPLC图；
图6为实施例3中pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的HPLC图；
图7为实施例3中pH 4.5的溶出介质的HPLC图；
图8为实施例3中pH 4.5的溶出介质中阿卡波糖的HPLC图；
图9为实施例3中pH 6.8的溶出介质的HPLC图；
图10为实施例3中pH 6.8的溶出介质中阿卡波糖的HPLC图。
具体实施方式：
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实验的范围。
溶出介质的配制：
1. 溶出介质1（pH 1.2）：称取2.0g NaCl，加入7mL HCl，用1000mL水溶解，摇匀。
2. 溶出介质2（pH 4.5）：称取6.8g KH2PO4，用1000mL水溶解，摇匀。
3. 溶出介质3（pH 6.8）：称取1.7g KH2PO4及1.7g无水Na2HPO4，用1000mL水溶解，摇匀。
实施例1
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：氨基柱（Merck，250×4.6mm，5μm）；
流动相：KH2PO4（20mM，pH 3.0）-乙腈（25:75）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
柱温：35℃
进样体积：20μL。
实验步骤：
取pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖口崩片的溶出样品，样品浓度约为0.01mg/mL~0.1mg/mL。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2，图1为pH 1.2的溶出介质的色谱图；图2为pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的色谱图，其保留时间为3.399min，溶出介质的色谱峰干扰阿卡波糖的检测。
实施例2
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：阳离子交换柱（Phenomenex SCX，250×4.6mm，5μm）；
流动相：二水合柠檬酸三钠（50mM，pH 5.8）-乙腈（35:65）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
柱温：35℃
进样体积：20μL。
实验步骤：
取pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖口崩片的溶出样品，样品浓度约为0.01mg/mL~0.1mg/mL。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3为pH 1.2的溶出介质的色谱图；图4为pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的色谱图，其保留时间为9.009min，溶出介质的色谱峰干扰阿卡波糖的检测。
实施例3
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：阳离子交换柱（Phenomenex SCX，250×4.6mm，5μm）；
流动相：KH2PO4（20mM，pH 3.8）-乙腈（70:30）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
柱温：35℃
进样体积：20μL。
实验步骤：
分别取pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8的溶出介质中阿卡波糖口崩片的溶出样品，样品浓度约为0.01mg/mL~0.1mg/mL。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5~10，图5为pH 1.2的溶出介质的色谱图，图6为pH 1.2的溶出介质中阿卡波糖的色谱图，其保留时间为10.080min；图7为pH 4.5的溶出介质的色谱图，图8为pH 4.5的溶出介质中阿卡波糖的色谱图，其保留时间为8.301min；图9为pH 6.8的溶出介质的色谱图，图10为pH 6.8的溶出介质中阿卡波糖的色谱图，其保留时间为8.309min。由此可以看出，在该色谱条件下，不同溶出介质中阿卡波糖的色谱峰均有保留，其分离度和峰纯度均满足要求。
Claims (10)
1.一种用高效液相色谱法测定阿卡波糖口崩片在不同溶出介质中溶出曲线的方法，其特征在于：以苯基磺酸基键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。
2.根据权利要求1所述的测定方法，色谱柱选自品牌为Phenomenex或Waters SCX的色谱柱。
3.根据权利要求1所述的测定方法，所说的有机相选自以下化合物中的一种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇。
4.根据权利要求3所述的测定方法，所说的有机相为甲醇或乙腈。
5.根据权利要求1所述的测定方法，所说的缓冲盐溶液可选择磷酸盐、醋酸盐、甲酸盐、柠檬酸盐。
6.根据权利要求5所述的测定方法，所说的缓冲盐溶液的pH为3.0~4.0。
7.根据权利要求6所述的检测方法，所述的缓冲盐溶液的pH为3.8。
8.根据权利要求5所述的测定方法，所说的缓冲盐优选磷酸盐。
9.根据权利要求1所述的测定方法，包括以下几个步骤：
1）取阿卡波糖口崩片样品，分别用几种溶出介质溶解样品，配制成每1mL介质中含阿卡波糖0.01~0.5mg的样品溶液;
2）设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为205～280nm;
3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成阿卡波糖口崩片溶出浓度测定。
10.根据权利要求8所述的分析方法，步骤2）所说的流动相流速优选1.0mL/min，检测波长为210nm。
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Denomination of invention: A method for determining the dissolution curve of acarbose using liquid chromatography Granted publication date: 20200707 Pledgee: Sanya Rural Commercial Bank Co.,Ltd. Pledgor: AVENTIS PHARMA (HAINAN) Co.,Ltd. Registration number: Y2024980014810 |