CN104535673B - 一种用hplc分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法，所述方法的特征是所采用的手性分析色谱柱是以多糖类衍生物固定相并以共价键键合的方式固定到色谱柱填料硅胶颗粒表面的，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行洗脱。本发明所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙対映异构体的方法能够简单、快速、准确地分离检测瑞舒伐他汀钙对映异构体杂质。

Description

一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法

技术领域

本发明属于医药化工领域，更具体地涉及一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法。

背景技术

瑞舒伐他汀钙，化学名为双[(E)-7-[4-(4-氟基苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]-嘧啶-5-基](3R，5S)-3，5-二羟基庚-6-烯酸]钙盐，其结构式如下：

瑞舒伐他汀钙是一种选择性HMG-CoA还原酶抑制剂，具有调节血脂的作用。由阿斯利康公司开发研制，瑞舒伐他汀片已在美国、日本、欧洲、中国等多个国家和地区上市，商品名“CRESTOR”。

瑞舒伐他汀钙具有2个手性中心，为了控制药物的质量，需要控制瑞舒伐他汀钙的対映异构体的含量。因此，建立可靠的瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法是非常必要的。

其中，瑞舒伐他汀钙对映异构体化学名为双[(E)-7-[4-(4-氟基苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]-嘧啶-5-基](3S，5R)-3，5-二羟基庚-6-烯酸]钙盐(2:1)，结构式如下：

现有技术中，Rosuvastatincalcium(2631)(Pharmeuropaarchives,Volume25-2013,Pharmeuropa25.03,147-153)公开了采用液相色谱法测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法，所述方法采用OJ-RH手性色谱柱，以乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液的混合溶液作为流动相，其中乙腈和0.1％三氟乙酸水溶液的体积比是约25:75，并采用242nm和254nm双波长同时进行检测。

在中国专利CN101532990B中公开了另外一种采用液相色谱法测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法，所述方法的特征是：(1)选取了OD-RH手性色谱柱；(2)以乙腈与水相的混合溶剂作为流动相，流动相中乙腈与水相的比为30～50：70～50；(3)流动相中水相为磷酸盐缓冲液，其pH范围为2.5～4.0；(4)取瑞舒伐他汀钙适量，用乙腈与水的比为1∶1的溶液溶解，配制成每1ml约含瑞舒伐他汀钙1mg的样品溶液，流速为1ml/min，检测波长242nm，柱温25℃，取样品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，完成瑞舒伐他汀钙的光学异构体的测定。

发明内容

发明概述

在以上所述的现有技术中，所公开的分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法均是采用反相手性色谱柱进行的，其中所述的两个测定方法，在同时测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体时，分离度比较差。

本发明人经过长期的实验，最终发现采用多糖类衍生物为固定相的手性色谱柱(其中多糖类衍生物是以共价键键合到色谱柱填料硅胶颗粒表面的)，并采用适当的有机溶剂进行洗脱，可以有效的分离瑞舒伐他汀钙的对映异构体。

本发明提供另外一种分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，所述方法能够简单、快速、准确地分离检测瑞舒伐他汀钙的对映异构体杂质。

术语定义

术语“峰纯度”是指HPLC检测中，用于判断某一色谱峰是否只是由一个物质引起的考察参数，一般认为峰纯度在0.990～1.000之间即认为所考察的某一色谱峰纯净，该色谱峰是某单一物质的色谱峰。

术语“对称性”是指在HPLC检测中，用于考察峰型对称性的参数，体现色谱柱效能；在液相色谱法中，当对称性在0.8～1.2之间认为峰型较好。

术语“R”在HPLC检测中是指分离度，用于考察色谱峰之间分离情况的参数；通常两个峰型峰高相当的色谱峰，其分离度大于等于1.5则认为两峰的分离达到99％以上；R值越大分离情况越好。

术语“约”在本发明中是指在所述数值的±10％以内。

发明详述

本发明提供一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其特征是采用多糖类衍生物为固定相的手性色谱柱(其中多糖类衍生物是以共价键键合到色谱柱填料硅胶颗粒表面的)，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱。

优选的是在流动相中加入一定量的酸类溶剂，进而获得更好的峰型。其中所述的酸性溶剂在流动相中所占的百分含量是约0.03～4.0％，体积比。在一些实施例中，本发明所述的方法添加的酸类溶剂可以选自甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种；在一些实施例中，本发明所述的方法添加的酸类溶剂可以是三氟乙酸。

其中本发明所述的多糖类衍生物为固定相的手性柱可以是选自CHIRALPAKIA色谱柱、CHIRALPAKIB色谱柱、CHIRALPAKIC色谱柱、CHIRALPAKIE色谱柱或CHIRALPAKIF色谱柱中的一种。

在一些实施例中，本发明所述的方法采用CHIRALPAKIC色谱柱作为手性分析柱，其中CHIRALPAKIC色谱柱的规格是任选的。

所述的烷烃可以是正己烷、正庚烷或其混合物。在一些实施例中，所述的烷烃是正己烷。

所述的低级醇可以是选自乙醇、丙醇、异丙醇或丁醇中的一种或几种。在一些实施例中，所述的低级醇是异丙醇或乙醇与异丙醇的混合物。

在一些实施例中，所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其中所述的流动相是烷烃-低级醇-酸类溶剂的混合溶液，其中烷烃-低级醇的体积比是约900:100～550:450，其中酸类溶剂在流动相的含量是约0.03～4.0％(体积比)。

在一些实施例中，所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其中所述的流动相是正己烷-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液，其中正己烷-异丙醇的体积比是约900:100～550:450，其中三氟乙酸在流动相的含量是约0.03％～4.0％(体积比)。

在一些实施例中，所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其特征是采用CHIRALPAKIC色谱柱作为手性分析柱，并采用正己烷和异丙醇的混合溶液作为流动相，其中正己烷-异丙醇的体积比是约900:100～550:450，其中流动相中还加入了占流动相约0.03％～4.0％三氟乙酸(体积比)，然后等度进行洗脱。在一些实施例中，CHIRALPAKIC色谱柱是CHIRALPAKIC，4.6×250mm，5μm；并采用正己烷-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液作为流动相，其中正己烷-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约750:250:1。

在一些实施例中，所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其特征是：

色谱柱：CHIRALPAKIC，4.6×250mm，5μm；

流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液作为流动相，其中正己烷-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约750:250:1；

检测器：紫外检测器，检测波长是约220nm～280nm；

流动相：0.3～2.0ml/min；

柱温：20℃～40℃。

在一些实施例中，所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，其特征是：

色谱柱：CHIRALPAKIC，4.6×250mm，5μm；

流动相：正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液作为流动相，其中正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约800:40:160:1；

检测器：紫外检测器，检测波长是约220nm～280nm；

流动相：0.3～2.0ml/min；

柱温：20℃～40℃。

本发明所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的対映异构体的方法，其中的供试品溶液可以是用稀释剂将供试品配成约0.5～5.0mg/ml的溶液；其中的稀释剂可以是二氯甲烷-乙醇-三氟乙酸混合溶液。在一些实施例中，二氯甲烷-乙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约800:200:0.1。

本发明所述的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，可以简单、快速、准确地分离检测瑞舒伐他汀钙的对映异构体杂质，其中瑞舒伐他汀钙的对映异构体的分离度(R)达到4以上。

附图说明

图1示实施例1空白溶液色谱图

图2示实施例1系统适用性溶液色谱图

图3示实施例1原料药供试品溶液色谱图

图4示实施例1片剂供试品溶液色谱图

图5示实施例2原料药供试品溶液色谱图

图6示实施例3对比实施例的原料药供试品溶液242nm检测波长的图谱

图7示实施例3对比实施例的原料药供试品溶液254nm检测波长的图谱

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。

本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。

本发明所使用的分析试剂及溶液符合中国药典2010版附录的要求，除另有说明外。

实施例1

色谱条件：

美国Agilent1260型高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：大赛璐IC，4.6x250mm，5μm；

检测器：紫外检测波长是约245nm；

流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液作为流动相，其中正己烷-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约750:250:1；

流速：1.0mL/min；

柱温：35℃；

进样体积：10μL；

运行时间：50min。

实验步骤：

稀释剂/空白溶液：二氯甲烷：乙醇：三氟乙酸＝800:200:0.1(体积比)；

系统适用性溶液：取瑞舒伐他汀钙对映异构体系统适用性对照品约15mg，精密称定至10mL棕色量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

原料药供试品溶液：取瑞舒伐他汀钙供试品约75mg，精密称定至50mL棕色容量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为原料药供试品溶液。

片剂供试品溶液：取瑞舒伐他汀钙片剂适量，约相当于瑞舒伐他汀钙38mg，置25ml棕色容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为片剂供试品溶液。

按照中国药典2010版第二部附录ⅤD高效液相色谱法，取空白溶液、系统适用性溶液、原料供试品溶液和片剂供试品溶液，在所述色谱条件下进样检测，并记录色谱图，结果见图1、图2、图3和图4。检测结果见表1。

表1

实施例2

色谱条件：

美国Agilent1260型高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：大赛璐IC，4.6x250mm，5μm；

检测器：紫外检测波长是约245nm；

流动相：正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液作为流动相，其中正己烷-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约800:40:160:1；

流速：1.0mL/min；

柱温：40℃；

进样体积：10μL；

运行时间：50min。

实验步骤：

稀释剂/空白溶液：二氯甲烷：乙醇：三氟乙酸＝800:200:0.1(体积比)；

原料药供试品溶液：取瑞舒伐他汀钙供试品约75mg，精密称定至50mL棕色容量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为原料药供试品溶液。

按照中国药典2010版第二部附录ⅤD高效液相色谱法，取原料供试品溶液，在所述色谱条件下进样检测，并记录色谱图，结果见图5。检测结果见表2。

表2

实施例3(对比实施例)

按照Rosuvastatincalcium(2631)(Pharmeuropaarchives,Volume25-2013,Pharmeuropa25.03,147-153)公开了采用液相色谱法测定瑞舒伐他汀钙対映异构体的方法，测定原料药瑞舒伐他汀钙供试品溶液(配制方法如实施例1)。记录色谱图，如图6。检测结果如表3。

表3

综上实施例所述，

通过实施例1，本发明提供的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，在测定原料瑞舒伐他汀钙供试品溶液或片剂瑞舒伐他汀钙供试品溶液中不存在空白干扰；分离度(R)在4以上；峰型对称性好，灵敏度高。

通过实施例2，本发明提供的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法，在本发明范围内适当改变流动相组成，可以有效测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体。

通过实施例1或2与实施例3的对比可知，本发明提供的用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙的对映异构体的方法在分离度方面可以获得更好的效果，为准确测定瑞舒伐他汀钙对映异构体提供前提。

本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。

Claims (2)

1.一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法，其特征是采用多糖类衍生物为固定相的手性色谱柱，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱，其中所述的多糖类衍生物固定相是以共价键键合到色谱柱填料硅胶颗粒表面的，其中，

色谱柱是CHIRALPAKIC，4.6×250mm，5μm；

所述流动相是正己烷-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液，其中正己烷-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约750：250：1；

检测器是紫外检测器，检测波长是约245nm；

流动相流速是1.0ml/min；

柱温是20℃～40℃。

2.一种用HPLC分离测定瑞舒伐他汀钙对映异构体的方法，其特征是采用多糖类衍生物为固定相的手性色谱柱，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱，其中所述的多糖类衍生物固定相是以共价键键合到色谱柱填料硅胶颗粒表面的，其中，

色谱柱是CHIRALPAKIC，4.6×250mm，5μm；

流动相是正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸的混合溶液，其中正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸混合溶液的体积比是约800：40：160：1；

检测器是紫外检测器，检测波长是约245nm；

流动相流速是1.0ml/min；

柱温是20℃～40℃。