CN104062375A - 一种同时检测药品及其对映异构体杂质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及化学分析技术领域，更具体的涉及一种同时检测药品及其对映异构体杂质的方法。其特征是本发明的方法包括：将待测样品与有机胺和酰氯进行衍生化反应，反应生成物再以手性色谱柱采用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，计算即得。本发明的方法稳定可行、简便快速。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析技术领域，更具体的涉及一种同时检测药品及其对映异构体杂质的方法。
背景技术
式(Ⅰ)化合物，英文名S-Xemilofiban，是一种非肽类的血小板糖蛋白(GP)IIb/IIIa受体的可逆性拮抗剂，该受体是与血小板聚集过程有关的主要血小板表面受体。S-Xemilofiban阻止纤维蛋白原与糖蛋白IIb/IIIa结合，因而阻断血小板的交联及血小板的聚集。
S-Xemilofiban具有手性中心，其对映异构体R-Xemilofiban结构式为式(Ⅱ)，在合成S-Xemilofiban的过程中可能存在副产物R-Xemilofiban，即其对应异构体杂质。对映异构体杂质限度的控制是化合物特别是药物质量控制的重要部分，对保证临床使用安全有效有重要意义。
尚未见文献报道式(Ⅰ)、式(Ⅱ)化合物的高效液相色谱分析方法报道。
发明内容
本发明公开了一种稳定可行、简便快速、高效灵敏的S-Xemilofiban及其杂质R-Xemilofiban的高效液相分析检测方法。
含有式(Ⅰ)的化合物、其水合物、其药学上可接受的盐、含有式(I)的化合物的药物制剂、含有式(I)的化合物药学上可接受盐的药物制剂、含有式(I)的化合物水合物的药物制剂都可以采用本发明方法进行分析检测。
式(Ⅰ)化合物其水合物包括其一水合物；其盐包括磷酸盐、硫酸盐、盐酸盐，优选盐酸盐。式(Ⅰ)化合物盐酸盐及其对映异构体结构如下：
本发明的具体方案如下：
将待测样品与有机胺和酰氯进行衍生化反应，反应生成物再以手性色谱柱采用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，计算即得化合物(I)和杂质(II)或其药学上可接受的盐的含量。计算方法可用常规的峰面积归一法或外标法。
其中衍生化反应中化合物(I)与酰氯的重量比优选1：0.5～3。
衍生化反应优选在二氯甲烷作为反应溶剂的条件下进行。
其中有机胺优选三乙胺；酰氯优选对硝基苯甲酰氯。
更优选的衍生化反应的方法包括：按10mg待检样品计，将样品溶解在8ml二氯甲烷中，加入三乙胺0.4～0.6ml和对硝基苯甲酰氯10～20mg，室温下反应1～4h，加二乙胺0.1～0.3ml，放置10min以上，在60～80℃水浴中将溶剂蒸干，残渣用无水乙醇溶解作为高效液相色谱的供试液。
优选的高效液相色谱分离条件是：色谱柱是填料为直链淀粉-三[3,5二甲基氨基甲酸酯]衍生物，柱长250mm×内径4.6mm×4-6μm；流动相为正己烷和异丙醇的混合液，其中正己烷体积含量为60％以上；流速为0.8～1.2ml/min；柱温为25～35℃；进样量是10～30μl。在该色谱条件性下，S-Xemilofiban可与其杂质R-Xemilofiban得到分离，其各自含量可以采用面积归一法计算，也可以采用外标法进行量化。归一法计算公式为各异构体峰面积占两个异构体峰面积之和的比例；外标法则需要采用已知浓度的各自异构体对照品进行比对计算。
色谱柱优选大赛璐AD-H型号手性色谱柱(直链淀粉-三[3,5二甲基氨基甲酸酯]衍生物为填充剂)。
高效液相色谱更优选的条件是：色谱柱的填料粒径为5μm，所述的流动相比例为正己烷：异丙醇＝70：30，所述流速为1ml/min；柱温为30℃；进样量是20μl。
紫外检测中的检测波长优选是323nm。
以有机胺采用三乙胺为例本发明衍生化机理如下：
本发明的有益效果在于：适用于式(Ⅰ)化合物、其盐及其组合物，能有效分离检测其对映异构体杂质，本方法运行时间短、基线稳定、准确度、精密度良好且重复实验的变异系数小，对实验的要求较为宽松、操作简单、检测成品低、易于实施。
附图说明
图1是实施例1对映异构体定位溶液，保留时间为25.725min的峰为R-Xemilofiban衍生物。
图2是实施例1系统适用性溶液，保留时间为23.164min、26.512min的峰分别为S-Xemilofiban衍生物和R-Xemilofiban衍生物。
图3是实施例1原料供试品溶液，保留时间为22.763min、25.771min的峰分别为S-Xemilofiban衍生物和R-Xemilofiban衍生物。
图4是实施例3空白辅料溶液，辅料在S-Xemilofiban衍生物和R-Xemilofiban衍生物处无峰。
图5是实施例3制剂供试品溶液，保留时间为22.347min、25.360min的峰分别为S-Xemilofiban衍生物和R-Xemilofiban衍生物。
具体实施方式
实施例1
(a)柱前衍生：
取10mg S-Xemilofiban盐酸盐溶解在8ml二氯甲烷中，与三乙胺0.5ml和对硝基苯甲酰氯15mg，室温下反应60min，加二乙胺0.2ml，放置20min，在60℃水浴中将溶剂蒸干，残渣用无水乙醇溶解并定容至20ml(浓度约0.5mg/ml)，作为原料供试品溶液。取R-Xemilofiban盐酸盐对照品适量依法配制得浓度约为10μg/ml的溶液作为对映异构体定位溶液。另取S-Xemilofiban盐酸盐对照品和R-Xemilofiban盐酸盐对照品依法配制成浓度分别为0.5mg/ml和2.5μg/ml的溶液作为系统适用性溶液。
b)HPLC分析和紫外检测：
色谱条件为：色谱柱：大赛璐AD-H型号手性色谱柱(直链淀粉-三[3,5二甲基氨基甲酸酯]衍生物为填充剂)，柱长250mm×内径4.6mm×5μm；流动相为：正己烷：异丙醇＝70：30；流速：1.0ml/min；紫外检测波长：323nm；柱温：30℃；进样量：20μl。
取对映异构体定位溶液、系统适用性溶液、原料供试品溶液注入液相色谱仪，分别得到如附图1～3所示的色谱图。附图1中保留时间为25.725min的峰为R-Xemilofiban衍生物，系统适用性溶液、原料供试品溶液中色谱参数摘要如下。
| 名称 | 保留时间 | 面积 | 面积％ | 分离度 | |
| 系统适用 | S-Xemilofiban衍生物 | 23.164 | 6637491 | 99.57 | -- |
| 性溶液 | R-Xemilofiban衍生物 | 26.512 | 28578 | 0.43 | 2.445 |
| 原料供试 | S-Xemilofiban衍生物 | 22.763 | 6187826 | 99.89 | -- |
| 品溶液 | R-Xemilofiban衍生物 | 25.771 | 7114 | 0.11 | 2.712 |
实施例2
实施例1方法学验证结果
1、检测限与定量限
按信噪比3：1作为检测限，按信噪比10：1作为最低定量限。
| 组份 | 最低定量限浓度(μg/ml) | 最低检测限浓度(μg/ml) |
| S-Xemilofiban衍生物 | 0.0503 | 0.0201 |
| R-Xemilofiban衍生物 | 0.0513 | 0.0205 |
2、线性和范围
照实施例1色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，由溶液浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程
3、准确度
称取9份S-Xemilofiban约10.0mg，按衍生化方法配制成供试品溶液，分别依次加入0.25％、0.5％、0.75％的R-Xemilofiban溶液；每个浓度配制3份，测定峰面积，计算平均回收率及RSD，由表可以看出，该衍生化方法及色谱条件准确度良好。
回收率％＝(测得量-含有量)/理论加入量*100％
4、重复性
照实施例1色谱条件，测定样品，表可以看出重复性RSD较小，表明该方法重复性好。
| 编号 | R-Xemilofiban含量(％) |
| 1 | 0.10 |
| 2 | 0.11 |
| 3 | 0.11 |
| 4 | 0.10 |
| 5 | 0.10 |
| 6 | 0.14 |
| 7 | 0.15 |
| 8 | 0.10 |
| 9 | 0.12 |
| 10 | 0.10 |
| 11 | 0.09 |
| 12 | 0.10 |
| 13 | 0.09 |
| 14 | 0.11 |
| 15 | 0.10 |
| 16 | 0.11 |
| 17 | 0.10 |
| RSD％ | 14.5 |
5、耐用性
(a)柱前衍生：
同实施例1。
(b)HPLC分析和紫外检测：
色谱条件为：色谱柱：大赛璐AD-H型号手性色谱柱(直链淀粉-三[3,5二甲基氨基甲酸酯]衍生物为填充剂)，柱长250mm×内径4.6mm×5μm；流动相为：正己烷：异丙醇＝68～72：32～28；流速：0.8～1.2ml/min；紫外检测波长：323nm；柱温：25～30℃；进样量：20μl。
取待测溶液注入液相色谱仪，按照峰面积归一化法计算R-Xemilofiban含量。
结果表明本方法耐用。
实施例3
S-Xemilofiban盐酸盐组合物的分离
(a)柱前衍生：
取注射用S-Xemilofiban盐酸盐(含有辅料甘露醇等)10mg(以S-Xemilofiban盐酸盐计)溶解在10ml无水乙醇中，离心，取上清液蒸干。残渣用8ml二氯甲烷溶解，加三乙胺0.5ml和对硝基苯甲酰氯15mg，室温下反应60min，加二乙胺0.2ml，放置20min，在60℃水浴中将溶剂蒸干，残渣用无水乙醇溶解并定容至20ml制剂供试品溶液。另取处方量空白辅料依法配制作为空白辅料溶液。
b)HPLC分析和紫外检测：
同实施例1。
结果见附图4和5.
图4和图5显示：空白辅料溶液在S-Xemilofiban衍生物及R-Xemilofiban衍生物处不出峰，不干扰分离检测。制剂供试品溶液中保留时间为22.347min、25.360min的峰分别为S-Xemilofiban衍生物和R-Xemilofiban衍生物，两者分离度为2.824。
Claims (10)
1.一种同时检测化合物(I)及其对映异构体杂质(Ⅱ)或其药学上可接受的盐的方法，包括：
将待测样品与有机胺和酰氯进行衍生化反应，反应生成物再以手性色谱柱采用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，计算即得化合物(I)和杂质(II)或其药学上可接受的盐的含量。
2.权利要求1的方法，其中衍生化反应中化合物(I)与酰氯的重量比为1：0.5～3。
3.权利要求1的方法，其中衍生化反应是在二氯甲烷作为反应溶剂的条件下进行。
4.权利要求1的方法，其中有机胺是三乙胺；酰氯是对硝基苯甲酰氯。
5.权利要求1的方法，其中衍生化反应方法包括：按10mg待检样品计，将样品溶解在8ml二氯甲烷中，加入三乙胺0.4～0.6ml和对硝基苯甲酰氯10～20mg，室温下反应1～4h，加二乙胺0.1～0.3ml，放置10min以上，在60～80℃水浴中将溶剂蒸干，残渣用无水乙醇溶解作为高效液相色谱的供试液。
6.权利要求1的方法，其中高效液相色谱分析条件是：色谱柱是填料为直链淀粉-三[3,5二甲基氨基甲酸酯]衍生物，柱长250mm×内径4.6mm×4-6μm；流动相为正己烷和异丙醇的混合液，其中正己烷体积含量为60％以上；流速为0.8～1.2ml/min；柱温为25～35℃；进样量是10～30μl。
7.权利要求6的方法，其中色谱柱的填料粒径为5μm，所述的流动相比例为正己烷：异丙醇＝70：30，所述流速为1ml/min；柱温为30℃；进样量是20μl。
8.权利要求1的方法，其中紫外检测的波长是323nm。
9.权利要求1的方法，其中待测样品是化合物(I)及其对映异构体杂质(Ⅱ)、其药学上可接受的盐、含化合物(I)及其对映异构体杂质(Ⅱ)的药物组合物或含化合物(I)及其对映异构体杂质(Ⅱ)药学上可接受盐的药物组合物。
10.权利要求9的方法，其中药学上可接受的盐是盐酸盐。
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