CN103185750B

CN103185750B - 一种氯吡格雷拆分试剂的质量控制方法

Info

Publication number: CN103185750B
Application number: CN201110460736.3A
Authority: CN
Inventors: 谭端明; 汤妍怡
Original assignee: Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd; Huizhou Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd; Huizhou Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2011-12-31
Filing date: 2011-12-31
Publication date: 2015-09-23
Anticipated expiration: 2031-12-31
Also published as: CN103185750A

Abstract

本发明提供一种氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的质量控制方法，其特征在于：采用C18色谱柱高效液相色谱法对樟脑磺酸或樟脑磺酸盐进行分离，然后通过紫外检测器进行定量检测；所述C18色谱柱高效液相色谱法的流动相为乙腈-磷酸盐水溶液，流动相pH值为2.0～6.0，所述检测器的检测波长为200～210nm。本发明方法具有更宽的线性范围，更高的灵敏度，准确度好，重复性强，检测成本低且操作简便，可适用于低浓度樟脑磺酸及其盐的准确定量。

Description

一种氯吡格雷拆分试剂的质量控制方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，特别涉及一种氯吡格雷拆分试剂(樟脑磺酸或樟脑磺酸盐)的质量控制方法。

背景技术

樟脑磺酸(Camphorsulphonic acid，CAS号3144-16-9)，分子式为C₁₀H₁₆O₄S，是一种樟脑的磺酸衍生物，可由樟脑为原料经磺化制得。樟脑磺酸具有手性碳，其光学异构体是一种重要的手性拆分剂，可应用于血小板聚集抑制剂氯吡格雷的拆分。例如，美国专利US4847265报道利用左旋樟脑磺酸拆分外消旋氯吡格雷，得到左旋樟脑磺酸与S-氯吡格雷成盐结晶。另外，樟脑磺酸还可作为手性离子对试剂，用于手性药物的分离分析。樟脑磺酸光学异构体结构式为：

S-(+)-樟脑磺酸 R-(-)-樟脑磺酸氯吡格雷

樟脑磺酸及其盐的生产、产品质量控制及其他相关检测中，对于樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的定量分析及采用阳离子交换树脂法、紫外分光光度法、旋光度法和高效液相色谱法，现有技术的方法存在误差大、检测灵敏度低、检测成本高、可重复性差、检测试剂要求苛刻等不足。

《卫生部药品标准》WS1-118(B)-89记载了一种采用阳离子交换树脂法测定樟脑磺酸钠注射液含量的方法。该方法实际上测定的是钠离子的含量，检测结果容易受到其他阳离子的干扰，灵敏度也不高。

《中国兽药杂志》1992年02期和《黑龙江医药》1995年03期分别报道用紫外分光光度法测定樟脑磺酸钠的含量。该方法灵敏度低，且检测结果容易受到其他具有紫外吸收物质的干扰。

《黑龙江医药》2001年01期报道了用旋光度法对樟脑磺酸钠注射液进行含量测定。该方法同样存在灵敏度低的不足，检测结果也容易受到其他具有旋光性物质的干扰。

Journal of Chromatography A 1990年511卷报道了用反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定樟脑磺酸及其盐的方法。该法采用C18色谱柱，流动相甲醇-水溶液中添加2-苯乙胺的高氯酸盐，检测波长为260nm。该方法解决了杂质干扰的问题，在信噪比4∶1、进样体积10μl时，检测限约为0.2μg。线性范围的进样浓度约为0.23～3.5mg/mL(1～15mM)，灵敏度明显提高。但是，2-苯乙胺高氯酸盐溶液的稳定性不高，不能长时间保存，一般需要新鲜配制。

《中国现代应用药学》2009年第09期报道用氨基色谱柱的HPLC测定樟脑磺酸钠注射液。该法采用氨基键合硅胶固定相，流动相乙腈-水溶液中添加离子对试剂辛烷磺酸。该方法获得了更宽的检测线性范围，为0.04006～6.04800mg/mL，进样浓度约为0.04～6.0mg/mL。但是与C18固定相相比，氨基键合硅胶使用寿命较短，辛烷磺酸钠价格较高，使得检测成本偏高。

为了解决上述技术问题，本发明的发明人通过大量实验研究，通过摸索和调整高效液相色谱测定的条件，克服了现有技术存在的问题，并由此完成了本发明。

发明内容

本发明的目的在于克服了现有技术的缺点，提供了一种氯吡格雷拆分试剂(樟脑磺酸或樟脑磺酸盐)的质量控制方法。其相对于现有技术具有灵敏度高、线性范围宽、可重复性好、检测成本低等有益效果。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的质量控制方法：采用C18色谱柱高效液相色谱法对樟脑磺酸或樟脑磺酸盐进行分离，然后通过紫外检测器进行定量检测；所述C18色谱柱高效液相色谱法的流动相为乙腈-磷酸盐水溶液为流动相，流动相pH值为2.0～6.0，所述检测器的检测波长为200～210nm。

所述的C18色谱柱是指以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，简称ODS柱。常用的常规分析型C18色谱柱为内径4.6mm，填充高度250mm，粒径5μm，孔径超高效液相色谱(UPLC)柱内径通常2.1mm，填充高度100mm，粒径1.7μm。柱温选择室温，即可达到满意的分离和检测效果。也可以根据需要考虑升高或者降低柱温，以达到进一步调节分离效果和峰形的目的。

所述流动相pH值以不超出色谱填料的允许范围为准，流动相pH值的变动对樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的分离效果和出峰时间影响不大，流动相在pH值2.0～6.0范围内樟脑磺酸能呈现较良好的峰型。流动相pH值过高时，可使用磷酸或者磷酸二氢盐进行调节。

本发明可以采用等度洗脱法，也可以采用梯度洗脱法。所述乙腈-磷酸盐水溶液的体积比为20～25∶80～75，优选22∶78。过低和过高的乙腈浓度均会影响分离效果。流动相的配制方法应按照常规的技术规范进行，以保证适当的操作浓度精度，并符合色谱仪器的使用要求。临用前将流动相通过0.45μm的溶剂微孔过滤膜，然后超声脱气5～10min。

所述磷酸盐水溶液浓度在0.05～0.15mol/L范围内，磷酸盐水溶液浓度范围优选0.09～0.15mol/L。磷酸盐水溶液浓度如果小于0.05mol/L，容易导致谱峰变宽和拖尾；磷酸盐水溶液浓度大于0.15mol/L时，可能会损坏色谱仪器。

所述磷酸盐可以选择磷酸钠盐、钾盐或铵盐等中的一种或两种以上的混合。其中磷酸钠盐可为磷酸氢钠、磷酸二氢钠等，磷酸钾盐可为磷酸氢钾、磷酸二氢钾等，磷酸铵盐可为磷酸氢铵、磷酸二氢铵等。

流速的选择可根据具体的色谱柱规格设备性能进行调节。在常规的HPLC分析中，流速为0.5～2.0mL/min，优选0.8～1.0mL/min。在UPLC分析中，可使用更低的流速，如0.1～1.0mL/min，但实际上线速度更高。

检测器的工作波长选择200～210nm，优选201～205nm，更优选204nm。低于200nm的波长导致流动相的背景吸收增强，降低了樟脑磺酸色谱峰的信号。210nm以上的波长则导致樟脑磺酸的吸收明显减弱，使得检测灵敏度降低。

采用外标法对樟脑磺酸进行定量。对照品为含量已知的樟脑磺酸盐。待测样品和对照品均须制备成稀溶液的状态进样，进样量以不超过测定的线性范围为准，进样浓度应控制在0.005～2.0mg/mL。优选0.1～1.0mg/mL，其中更优选0.5mg/mL。检测结果以峰面积对浓度绘制标准工作曲线，在同一色谱条件下测定样品峰面积，通过标准工作曲线的回归方程计算出样品的含量。根据实验，由于回归方程的斜率远大于y轴的截距，可视为标准工作曲线通过原点，也可使用单点校正法测定樟脑磺酸的含量，使检测更简便。

本方法实际检测的是樟脑磺酸根离子的信号，可以用于所有含有樟脑磺酸根离子的樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的检测，所述的樟脑磺酸或樟脑磺酸盐可以为左旋樟脑磺酸及其盐、右旋樟脑磺酸及其盐、外消旋樟脑磺酸及其盐，所述的盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、氨基酸盐、有机铵盐等。实验结果显示，左旋樟脑磺酸及其盐、右旋樟脑磺酸及其盐、外消旋樟脑磺酸及其盐的出峰时间和等摩尔浓度的响应值相同，进样溶液的pH值对色谱分离和响应结果无影响。

本发明的色谱条件可以有效区分乙酸和樟脑磺酸的出峰。乙酸的相对调整保留时间大约是樟脑磺酸的0.5。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：

本方法比现有C18反相高效液相色谱法获得更高的灵敏度和更宽的线性范围：在相同的信噪比4∶1、进样体积10μl时，检测限约为0.004μg，灵敏度提高了50倍，线性范围的进样浓度约为0.005～2.0mg/mL，且使用的磷酸缓冲盐比2-苯乙胺的高氯酸盐更经济、易得，并且溶液稳定性高，更适合长期保存。

本方法比现有氨基柱高效液相色谱法获得的线性范围从150倍提高到400倍，且使用的磷酸缓冲盐比辛烷磺酸钠更经济、易得。

本方法操作简便，线性范围宽，准确度高，重复性好，检测成本低且操作简便，对更低浓度的供试液也可准确定量测量，检测限达到浓度0.2μg/mL(按进样体积20μl计算，绝对量为0.004μg)，可适用于低浓度樟脑磺酸及其盐的准确定量。

附图说明

图1：实施例1樟脑磺酸的HPLC色谱图

图2：樟脑磺酸线性范围回归曲线

图3：樟脑磺酸检测限实验结果

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

实施例1

色谱条件为：

样品溶液的配制：精密称量固体样品0.05g，置于100mL容量瓶中，加水溶解并用水、乙腈或者流动相稀释至刻度，摇匀，所得样品溶液浓度为0.5mg/mL。平行制备2份。

对照品溶液的配制：分别精密称量不同质量的樟脑磺酸钠对照品，分别置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。平行制备2份。

测定方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录得到如图1所示色谱图。每份溶液重复2次，采用外标法以峰面积计算供试品中樟脑磺酸的含量。

从图1可以看出检测的樟脑磺酸样品中含有乙酸杂质，推测樟脑磺酸样品的制备工艺中，使用乙酸作为结晶溶剂，使樟脑磺酸样品中含有少量的乙酸残留。本发明的色谱条件可以有效区分乙酸和樟脑磺酸的出峰。乙酸的相对调整保留时间大约是樟脑磺酸的0.5，樟脑磺酸峰与杂质峰达到基线分离。实验中发现，使用本实施例的其他色谱条件，而流动相采用添加了离子对试剂辛烷磺酸钠的乙腈-水溶液，乙酸和樟脑磺酸几乎同时出峰，不能有效分离。

实施例2

按照实施例1的方法配制4.994mg/mL样品溶液。将样品溶液按不同的比例加水稀释制成浓度为2，1，0.5，0.1，0.05，0.01，0.005mg/mL的溶液，采用与实施例1相同的色谱条件由低浓度到高浓度依次进行测定，每个浓度均重复测定6次，得到如表1所示数据。以樟脑磺酸的浓度(C)为横坐标，以樟脑磺酸的峰面积的平均值(A)为纵坐标绘制得到如图2所示标准曲线。结果表明，樟脑磺酸在浓度为0.005～2.0mg/mL范围内线性关系良好。回归方程为：y＝205234x+1915.4，r＝0.9998。

表1樟脑磺酸线性范围实验数据

实施例3

按照实施例1的方法配制0.5mg/mL样品溶液。采用与实施例1相同的色谱条件重复测定6次，得到如表2所示实验数据。由结果可知，主峰保留时间的RSD值为0.04％，峰面积的RSD值为0.19％，表明精密度好。

表2樟脑磺酸精密度实验数据

编号	1	2	3	4	5	6	RSD(％)
								A	104866.5	105091.2	104639.6	104745.9	104542.2	104907.8	0.19

实施例4

精密称量樟脑磺酸对照品适量，用水稀释，分别添加到待测样品的溶液中，采用与实施例1相同的色谱条件进样测定添加前后的色谱信号，得到如表3所示实验结果，计算得到回收率在100％～101％之间，RSD值为0.24％，结果表明回收率高。

表3樟脑磺酸回收率实验结果

实施例5

按照实施例1的方法配制样品溶液，用水按照一定比例稀释样品溶液，采用与实施例1相同的检测色谱信号。当樟脑磺酸的浓度为0.20μg/mL时，樟脑磺酸主峰信噪比约为4∶1，即大约0.2μg/mL为樟脑磺酸的检测限。实验结果见图3。

本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：采用C18色谱柱高效液相色谱法对樟脑磺酸或樟脑磺酸盐进行分离，然后通过紫外检测器进行定量检测；所述C18色谱柱高效液相色谱法的流动相为乙腈-磷酸盐水溶液，流动相pH值为2.0～6.0，所述检测器的检测波长为200～210nm，所述乙腈-磷酸盐水溶液的体积比为22：78。

2.根据权利要求1所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述磷酸盐为磷酸的钠盐、钾盐或铵盐中的一种或两种以上的混合。

3.根据权利要求1所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述磷酸盐为磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸氢铵、磷酸二氢铵中的一种或两种以上的混合。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述磷酸盐水溶液的浓度为0.05～0.15mol/L。

5.根据权利要求1～3任意一项所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述磷酸盐水溶液的浓度为0.09～0.15mol/L。

6.根据权利要求1～3任意一项所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述检测器的工作波长为201～205nm。

7.根据权利要求4所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述检测器的工作波长为201～205nm。

8.根据权利要求5所述的氯吡格雷拆分试剂樟脑磺酸或樟脑磺酸盐的测定方法，其特征在于：所述检测器的工作波长为201～205nm。