CN107764907A - 测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法 - Google Patents
测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出了一种测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，该方法包括：通过手性液相色谱分析方法对所述奥格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述奥格列汀对映异构体的含量，其中，所述手性液相色谱分析方法采用的色谱柱为CHIRALPAK OJ‑H手性色谱柱或CHIRALPAK AS‑H手性色谱柱，流动相采用正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液。利用根据本发明实施例的测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，可简便、准确、灵敏地测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量，从而有效控制奥格列汀原料药的质量。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体地，本发明涉及测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法。
背景技术
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。
奥格列汀作为超长效二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂，是一种控制血糖、控制糖尿病的畅销药。其作用机制是通过抑制体内DPP-4酶对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的降解作用，延长GLP-1的作用时间，从而提高血液中内源性GLP-1和GIP的浓度，并最终改善血糖控制。
然而，奥格列汀具有手性中心，奥格列汀原料药中奥格列汀的对映异构体为杂质成分，会影响奥格列汀产品的质量和奥格列汀的疗效。如何准确测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量，进而有效控制奥格列汀产品的质量，成为拭待解决的关键问题。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出了一种简便、准确、灵敏地检测奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括以下步骤：通过手性液相色谱分析方法对所述奥格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述奥格列汀对映异构体的含量，其中，所述手性液相色谱分析方法采用的色谱柱为CHIRALPAKOJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，流动相采用正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液。利用根据本发明实施例的测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，可简便、准确、灵敏地测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量，从而有效控制奥格列汀原料药的质量。
根据本发明的实施例，上述测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述色谱柱是CHIRALPAK AS-H手性色谱柱。发明人在色谱柱筛选实验中发现，采用CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，奥格列汀及奥格列汀对映异构体的对应峰分离度更好，色谱峰形更好。
根据本发明的实施例，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)。发明人通过正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比优化实验发现，正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比在(50：950：1)～(600：400：1)，奥格列汀和奥格列汀对映异构体对应峰分离度高，至少在4以上。
根据本发明的实施例，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为400：600：1、600：400：1、200：800：1或50：950：1。更进一步地，发明人在正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比优化实验中发现，正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比在400：600：1、600：400：1、200：800：1或50：950：1，奥格列汀和奥格列汀对映异构体对应峰分离度高，基线完全分离。
根据本发明的实施例，所述流动相的流速为0.2ml/min～0.8ml/min。发明人通过实验发现，正庚烷、乙醇和二乙胺所组成流动相的流速为0.2ml/min～0.8ml/min，奥格列汀和奥格列汀对映异构体对应峰分离度更高，色谱峰形好。
根据本发明的实施例，所述手性液相色谱分析方法采用下列条件：色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，检测器为UV检测器，检测波长为220nm～280nm，柱温为20℃～40℃，流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)，流速为0.2～0.8ml/min。根据本发明的实施例，在上述手性液相色谱分析条件下，可以将奥格列汀与其对映异构体进行有效分离，奥格列汀与其对映异构体的对应峰分离度高，在上述手性液相色谱分析条件下，能够简单、快速、准确地检测出奥格列汀对映异构体的含量。
根据本发明的实施例，所述手性液相色谱分析方法采用下列条件：所述色谱柱为CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，所述检测器为UV检测器，所述检测波长为230nm，所述柱温为35℃，所述流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为400：600：1、600：400：1、200：800：1或50：950：1，所述流速为0.2～0.8ml/min。发明人通过手性色谱分析条件的筛选实验发现：在上述色谱条件下，奥格列汀与其对映异构体的对应峰分离度更高，至少4以上，基线完全分离，在上述手性液相色谱分析条件下，能够简单、快速、准确地检测出奥格列汀对映异构体的含量。
根据本发明的实施例，在所述手性液相色谱分析方法中，所述奥格列汀原料药是以供试溶液的形式提供的，其中，所述供试溶液为奥格列汀原料药的乙醇溶液或奥格列汀原料药的乙醇、正庚烷溶液，并且基于每毫升所述供试溶液，奥格列汀原料药的含量为0.5～2mg。根据本发明的实施例，奥格列汀原料药在上述溶液形式下提供，溶解度较好，对奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的检测的灵敏度进一步提高。
根据本发明的实施例，所述奥格列汀原料药的含量为1mg。根据本发明的实施例，奥格列汀原料药的浓度为1mg/ml，能够克服UV仪器之间灵敏度的差别而导致的潜在的灵敏度不足的问题，对奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的检测的灵敏度进一步显著提高。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：
仪器与色谱条件：
色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，检测器为UV检测器，检测波长为230nm，注温为35℃，流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)，流速为0.2～0.8ml/min，
配制供试样品溶液：
量取所述奥格列汀原料药，加入乙醇或乙醇、正庚烷溶解，并定量稀释成每1ml中含1mg奥格列汀原料药的溶液，作为所述供试样品溶液；以及
注入色谱仪，进样量为5微升，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到所述供试样品溶液中奥格列汀对映异构体的含量。
利用根据本发明实施例的测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，可以将奥格列汀与其对映异构体进行有效分离，分离度达到至少4以上，完全基线分离，且峰形好。利用本发明实施例的方法能简单、快速、准确地分离检测出奥格列汀原料药中的奥格列汀对映异构体及其含量，从而可以准确有效控制奥格列汀原料药的质量。
在本发明的第三方面，本发明提出了手性色谱柱在分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体中的用途，其中，在分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体中，所述手性色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，流动相采用正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液。根据本发明的具体实施例，发明人发现，采用以CHIRALPAKOJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱为分析柱，流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液的手性液相色谱分析，奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体和奥格列汀的对应峰分离度高，峰形好，能够高效地对奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体进行分离。
根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
在分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体中采用下列条件：
色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，检测器为UV检测器，检测波长为220nm～280nm，柱温为20℃～40℃，流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)，流速为0.2～0.8ml/min。发明人通过实验发现，在上述色谱条件下，奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体和奥格列汀的对应峰分离度更高，至少在4以上，峰形好，能够更加有效地分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体。
另外，需要说明的是，本申请所述的“根据所述色谱图计算得到所述供试样品溶液中奥格列汀对映异构体的含量”的方式不受特别限制，根据本发明的实施例，定量计算方式可以采用面积归一化法，API主成分自身对照法或异构体的杂质外标法的至少之一，如果是采用面积归一化法，那么奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的浓度与所对应的峰面积呈线性对应关系，如果是采用API主成分自身对照法或异构体的杂质外标法，那么就不需要满足上述的线性对应关系。定量计算方式的选择不受特别限制，本领域技术人员可以根据样品或实验室的要求，自行选择，所选定量计算方式只要能够真实反应出奥格列汀原料中奥格列汀对映异构体的含量即可。
附图说明
图1是根据本发明实施例1的色谱柱筛选实验的色谱图；
图2是根据本发明实施例1的流动相比例筛选实验的色谱图；
图3是根据本发明实施例1的流动相比例筛选实验的色谱图；
图4是根据本发明实施例1的流动相比例筛选实验的色谱图；
图5是根据本发明实施例1的流动相流速筛选实验的色谱图；
图6是根据本发明实施例1的流动相流速筛选实验的色谱图；
图7是根据本发明实施例2的奥格列汀原料药的色谱图；以及
图8是根据本发明实施例2的空白试剂溶液的色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在本实施例中，发明人详细介绍了方法开发过程中色谱柱和流动相的筛选过程。
一、色谱柱筛选
1.1仪器与条件
Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；
紫外检测波长：230nm；
流动相：正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)(20：80)为流动相；
柱温：35℃；
进样体积：5微升；
流速：0.4ml/min。
1.2样品溶液：
供试品溶液：取奥格列汀(Omarigliptin)与其对映异构体的混合物约10mg，置10ml量瓶中，加乙醇溶解稀释至刻度，摇匀。
1.3操作
1)在1.1的色谱条件下，以CHIRALPAK AD-H手性色谱柱(250mm*4.6mm)为分析柱分析供试品溶液，未发现奥格列汀对映异构体色谱峰；延长分析时间后有色谱峰出现，但Omarigliptin与其对映异构体色谱峰没有分离趋势。
2)在1.1的色谱条件下，以CHIRALPAK AS-H或CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱(250mm*4.6mm)为分析柱分析供试品溶液，Omarigliptin与其对映异构体色谱峰都有较好的分离。但采用AS-H柱，目标物保留时间更短，色谱峰形更好，具体如图1所示。
综上，选择CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱对Omarigliptin与其对映异构体色谱峰有较好的分离效果，优选CHIRALPAK AS-H手性色谱柱。
二、流动相比例调整
在色谱柱优化过程中，发明人发现奥格列汀与其对映异构体的极性较小，保留较强，流动相的比例对其保留会有一定影响，因此需要进一步优化流动相相比例，以获得目标物较好的分离效果和色谱峰形。
2.1仪器与条件
Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；
紫外检测波长：230nm；
流动相：正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)
流速：0.4ml/min
柱温：35℃；
进样体积：5微升。
2.2样品溶液：
供试品溶液：取奥格列汀与其对映异构体的混合物约10mg，置10ml量瓶中，加乙醇溶解稀释至刻度，摇匀。
2.3操作
1)在2.1的色谱条件下，采用CHIRALPAK AS-H色谱柱，以正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)＝60：40为流动相分析供试品溶液，目标物有较好的分离，奥格列汀的保留时间为29.30分钟；其对映异构体的保留时间为17.09分钟。结果如图2所示。
2)在2.1的色谱条件下，采用CHIRALPAK AS-H色谱柱，以正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)＝40：60为流动相分析供试品溶液，目标物有较好的分离，奥格列汀的保留时间为16.23分钟；其对映异构体的保留时间为11.51分钟。结果如图3所示。
3)在2.1的色谱条件下，CHIRALPAK OJ-H以正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)＝5：95为流动相分析供试品溶液，目标物有较好分离，色谱峰形有改善，色谱图如图4所示，其中，图4中保留时间为35.26分钟的色谱峰为奥格列汀的色谱峰；29.96分钟的色谱峰为对映异构体的色谱峰。
三、流速的调整
在色谱柱优化过程中，发明人发现流速的变化会影响奥格列汀与其对映异构体的保留，故进一步考察了流速的范围，以获得目标物较好的分离效果和色谱峰形。
3.1仪器与条件
Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；
紫外检测波长：230nm；
流动相：正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)
柱温：35℃；
进样体积：5微升；
色谱柱：CHIRALPAK AS-H
3.2样品溶液：
供试品溶液：取奥格列汀与其对映异构体的混合物约10mg，置10ml量瓶中，加乙醇溶解稀释至刻度，摇匀。
3.3操作
1)在3.1的色谱条件下，流速为0.2ml/min，以正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)＝20：80为流动相分析供试品溶液，目标物有较好的分离，奥格列汀的保留时间为27.03分钟；其对映异构体的保留时间为20.90分钟。结果如图5所示。
2)3.1的色谱条件下，流速为0.8ml/min，以正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)＝60：40为流动相分析供试品溶液，目标物有较好的分离，奥格列汀的保留时间为14.46分钟；其对映异构体的保留时间为8.47分钟。结果如图6所示。
实施例2
在本实施例中，发明人利用筛选和优化出的手性色谱分析条件，分别对空白溶液和奥格列汀原料药A进行检测，检测过程和结果如下所述：
色谱条件：
Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；以CHIRALPAK AS-H手性色谱柱(250mm*4.6mm)为分析柱；紫外检测波长：230nm；流动相：正庚烷：乙醇溶液(含0.1％二乙胺)(20：80)为流动相；柱温：35℃；流速为0.4ml/min；进样体积为5微升。
实验步骤：
取Omarigliptin原料药A约10mg，置10ml量瓶中，加乙醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液A。
分别取试剂空白溶液和供试品溶A，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图7、图8所示。图7和图8结果表明，本发明检测奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的方法专属性强。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
通过手性液相色谱分析方法对所述奥格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及
基于所述色谱图，确定所述奥格列汀对映异构体的含量，
其中，所述手性液相色谱分析方法采用的色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，
流动相采用正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为CHIRALPAK AS-H手性色谱柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为600：400：1、400：600：1、200：800：1或50：950：1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.2ml/min～0.8ml/min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述手性液相色谱分析方法采用下列条件：
色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，
检测器为UV检测器，
检测波长为220nm～280nm，
柱温为20℃～40℃，
流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)，
流速为0.2～0.8ml/min。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述手性液相色谱分析方法采用下列条件：
所述色谱柱为CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，
所述检测器为UV检测器，
所述检测波长为230nm，
所述柱温为35℃，
所述流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为600：400：1、400：600：1、200：800：1或50：950：1，
所述流速为0.2～0.8ml/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述手性液相色谱分析方法中，所述奥格列汀原料药是以供试溶液的形式提供的，其中，所述供试溶液为奥格列汀原料药的乙醇溶液或奥格列汀原料药的乙醇、正庚烷溶液，并且基于每毫升所述供试溶液，奥格列汀原料药的含量为0.5～2mg，
优选地，所述奥格列汀原料药的含量为1mg。
9.一种测定奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体的含量的方法，其特征在于，该方法包括：
仪器与色谱条件
色谱柱为CHIRALPAK OJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，检测器为UV检测器，检测波长为230nm，注温为35℃，流动相为正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，所述正庚烷、乙醇和二乙胺的体积比为(50：950：1)～(600：400：1)，流速为0.2～0.8ml/min，
配制供试样品溶液
量取所述奥格列汀原料药，加入乙醇或乙醇、正庚烷溶解，并定量稀释成每1ml中含1mg奥格列汀原料药的溶液，作为所述供试样品溶液；以及
注入色谱仪，进样量为5微升，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到所述供试样品溶液中奥格列汀对映异构体的含量。
10.手性色谱柱在分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体中的用途，
其中，在分离奥格列汀原料药中奥格列汀对映异构体中，所述手性色谱柱为CHIRALPAKOJ-H手性色谱柱或CHIRALPAK AS-H手性色谱柱，
流动相采用正庚烷、乙醇和二乙胺的混合溶液。
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