CN105974025A

CN105974025A - 一种治疗胃病的中药制剂的检测方法

Info

Publication number: CN105974025A
Application number: CN201610402080.2A
Authority: CN
Inventors: 李霞; 方胡彪; 黄志军; 吴木琴; 赵刚; 刘军锋; 熊登科; 任霞; 余丽花; 向阳; 朱立彬
Original assignee: Jianmin Pharmaceutical Groups Corp Ltd
Current assignee: Jianmin Pharmaceutical Groups Corp Ltd
Priority date: 2016-06-08
Filing date: 2016-06-08
Publication date: 2016-09-28

Abstract

本发明涉及一种治疗胃病的中药制剂的检测方法，该中药制剂的检测方法包括：对君药三七进行定性鉴别和含量测定，本发明的检测方法，包括采用薄层色谱法鉴别三七；本发明的检测方法，还包括采用高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量，相比现在的质量控制方法，本发明的质控方法具有准确、重现性好的特点，采用本方法可以更加准确的把握有关药品质量，降低用药风险，提高产品质量。

Description

一种治疗胃病的中药制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗胃病的中药制剂的检测方法，更具体的说是利胃胶囊的检测方法，包括定性鉴别和含量测定，属于中药现代化领域。

背景技术

利胃胶囊由三七、枯矾、煅花蕊石、酒大黄等四味药材经科学搭配组成，具有化瘀祛痰，止血定痛的功效，用于痰阻血瘀、胃腕疼痛及糜烂性、出血性胃炎，其在治疗胃病方面有显著的临床疗效。

发明专利申请CN 1879711A已经公开了一种治疗胃病的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。但是该专利中三七的定性鉴别结果的斑点颜色和分离度不是很理想，我们对三七的定性鉴别方法进行了改进。原专利中三七含量测定采用薄层扫描法对三七的有效成分人参皂苷Rg₁进行了含量测定，该方法存在误差大，重现性不好，准确度不高，产品质量不易控制的缺点。

2015年版《中国药典》及有关三七含量测定的文献中含量的流动相均为乙腈与水的梯度流动相，这种梯度流动相基线极易发生漂移，影响峰面积的积分，含量检测误差较大；分析时间长，单个样品的分析时长需65分钟。

为了有效保护中药制剂的质量与疗效，我们建立了本发明的质量控制方法，包括对君药三七进行定性鉴别和含量测定。具体采用薄层色谱法鉴别三七和采用高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量，与现在的质量控制方法相比较，本发明重现性好、准确度高，同时有效的缩短了样品分析时间，采用本方法可以更加准确的把握有关药品质量，降低用药风险，提高产品质量。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗胃病的中药制剂的质量控制方法，对其处方的君药三七进行定性鉴别和含量测定。本发明技术方案方法简便可行、准确度好、重复性好，并可以作为本发明中药制剂质量控制方法，能有效的保证药品质量的稳定性和疗效。

本发明内容中所述的中药制剂，均指利胃胶囊，其具体的处方配比组成为：三七1900g、枯矾1600g、煅花蕊石800g、酒大黄700g。

该制剂具体的制备方法为，以上四味，均单独粉碎成细粉，以净粉按比例投料，混匀，即得。三七为方中君药，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁均为有效成分，本发明的检测方法包括对君药三七的鉴别方法，所述方法采用薄层色谱法鉴别，参照物选用三七对照药材、人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品。

本发明的检测方法还包括三七中的三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量测定方法，所述的检测方法，具体包括：

①照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版第四部通则0512)测定；

②对照品溶液的制备精密称取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品适量，加有机溶剂制成溶液，即得；

③供试品溶液的制备精密称取本品适量，用有机溶剂超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。

本发明的检测方法还包括三七中的人参皂苷Rb₁的含量测定方法，所述的检测方法，具体包括：

①照高效液相色谱法 (《中国药典》2015年版第四部通则0512)测定；

②对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb₁对照品适量，加有机溶剂制成溶液，即得；

本发明的检测方法，其中各种数据均为实验获得，在实际操作过程会产生误差，该误差在±20％内均可接受，因此本发明的方法中的数值为在本发明记载的数值基础上±20％以内。

任何人在±20％以内使用本发明的数值均落在本发明的范围内。

所述的检测方法，其中三七的鉴别方法采用薄层色谱法鉴别，参照物选用三七对照药材、人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品，鉴别处方中的三七，具体步骤如下：

取本品1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取三七对照药材0.4g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版第四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水(20：40：10：20)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，均显相同的荧光斑点。

所述的检测方法，其中三七中的三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，以外标两点法对数方程计算含量，具体步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版第四部通则0512)测定；

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(21:79)为流动相；检测波长均为203nm。理论板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R₁40μg的溶液，人参皂苷Rg₁80μg的混合对照品溶液，即得；

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。

所述的检测方法，其中三七中人参皂苷Rb₁含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，以外标两点法对数方程计算含量，具体步骤如下：

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(32:68)为流动相；检测波长均为203nm；

对照品溶液的制备取人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb₁100μg的溶液，即得；

方法学研究表明，本发明采用高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量，具有较好的专属性、重现性、稳定性和精密度。

本发明检测方法简便、快捷、准确、灵敏度高、稳定性好，采用本方法可以更加准确的把握有关药品质量，降低用药风险，提高产品质量。

附图说明

图1为实施例的三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品高效液相色谱图。

图2为实施例的三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的供试品高效液相色谱图。

图3为实施例的三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的阴性液样品高效液相色谱图。

图4为实施例的人参皂苷Rb₁对照品高效液相色谱图。

图5为实施例的人参皂苷Rb₁的供试品高效液相色谱图。

图6为实施例的人参皂苷Rb₁的阴性液样品高效液相色谱图。

具体实施方式

仪器：DIONEX型高效液相色谱仪，四元梯度泵，柱温箱，自动进样器，UVD170U、Chromeleon化学工作站，色谱柱(SinoChrom ODS-BP 5μm)。

试药：利胃胶囊(规格：0.5g/粒，健民药业集团股份有限公司生产，批号：140701,140702,140703)人参皂苷Rb₁对照品(批号：110704-201223)、三七皂苷R₁对照品(批号：110745-200516)、人参皂苷Rg₁对照品(批号：110703-201128)、三七对照药材(批号：120941-201108)、甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。上述对照品及对照药材均购于中国药品生物制品检定所。

实施例1本发明中药制剂的薄层鉴别

三七的鉴别方法为：取本品少量，加甲醇超声处理，离心，取上清液作为供试品溶液。另取三七对照药材少量，加甲醇超声处理，离心，取上清液作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版第四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液微量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

实施例2本发明中药制剂三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁含量测定方法

样品制备方法确定：

提取方法的选择试验考察了超声提取30min，回流提取30min，冷浸12h等方法，结果表明，超声处理的结果与加热回流提取结果相差不大，考察了超声提取0.5、1、1.5、2h对三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁含量的影响，结果确定采用超声处理0.5h作为本文的提取方法。

提取溶剂的选择试验考察了用甲醇、50％甲醇、乙醇、50％乙醇溶液作为提取溶剂超声提取0.5h，按照正文含量测定向下方法进行测定，结果表明甲醇为提取溶剂时，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的峰与其他物质的峰分离较好，峰形较好，最终确定甲醇作为提取溶剂。

色谱方法的确定：

流动相的选择 2015年版《中国药典》及有关三七含量测定的文献中含量的流动相均为乙腈与水的梯度流动相，洗脱梯度：19％A(0-12分钟)，19％→81％(12-60分钟)，81％→19％(60-65分钟)。这种梯度流动相基线极易发生漂移，影响峰面积的积分，含量误差较大；分析时间长，一针样品的分析时长约65分钟。而在本文中，通过乙腈-水(21:79)检测三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量，等度流动相，色谱峰更漂亮，峰面积积分误差小，分析时长约33分钟，大大节省了分析时间。

检测波长的选择通对三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁混合对照品溶液进行紫外扫描，在203±1nm处有最大吸收，与《中国药典》2015年版三七含量测定项下的检测波长一致，故选择203nm作为检测波长。

三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的含量测定方法。

色谱条件色谱柱：Sinochrom ODS BP(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(21:79)；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃，进样量：10μl。理论板数按三七皂苷Rg1峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R₁40μg的溶液，人参皂苷Rg₁80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性样品溶液的制备按处方比例称取除三七以外的其余药材，按制备工艺制成缺三七药材的阴性对照样品。

专属性试验配制缺三七的阴性样品，按供试品溶液制备方法配制阴性样品，照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液注入液相色谱仪中测定。结果表明，阴性样品无干扰。

线性关系的考察精密称取三七皂苷R₁2.36mg与人参皂苷Rg₁10.22mg，同置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，其浓度分别为：三七皂苷R₁0.0944mg/ml、人参皂苷Rg₁0.4088mg/ml。精密吸取上述对照品母液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，按照上述色谱条件测定，以峰面积(Y)对进样量(X：μg)进行线性回归，得回归方程为：

三七皂苷R₁：Y＝3.8301X+0.01118,r＝0.99992。

表1R₁线性关系考察结果

结果表明三七皂苷R₁在0.0472～0.944μg范围内有良好的线性关系。

人参皂苷Rg₁：Y＝4.1398X+0.04588,r＝0.99992。

表2Rg₁线性关系考察结果

结果表明人参皂苷Rg₁在0.2044～4.088μg范围内有良好的线性关系。

精密度实验：

(1)中间精密度实验精密吸取上述供试品溶液，在上述色谱条件下在三台不同仪器上同时检测，计算含量。结果三七皂苷R₁与人参皂苷Rg₁含量之和RSD为2.94％，表明精密度良好。结果见表3。

表3中间精密度考察结果

(2)重复性试验取同一批次(批号：140701)的样品0.5g，精密称定，平行6份，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样10μl，测得三七皂苷R₁平均含量为2.991mg/g，RSD为1.36％,人参皂苷Rg₁平均含量为14.073mg/g，RSD为1.56％,为结果表明此法重现性良好。

供试品溶液的稳定性实验取上述供试品溶液，于0、2、4、6、8、10、24h测定三七皂苷R₁与人参皂苷Rg1的峰面积，结果三七皂苷R₁RSD为1.27％，新橙皮苷RSD为1.02％，可见供试品溶液在24h内稳定。

准确度试验精密称取三七皂苷R₁对照品5.57mg、人参皂苷Rg1对照品28.92mg，置500ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用；取制备的已知含量的利胃胶囊(三七皂苷R₁含量2.991mg/g，人参皂苷Rg₁含量14.073mg/g)，研细，取约0.25g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶中，精密加入配制的对照品溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟后，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得到准确度测定用样品溶液；按样品含量测定方法进行测定，计算准确度，见表4。结果平均回收率为：三七皂苷R₁98.69％(RSD＝1.02％)，人参皂苷Rg₁98.21％(RSD＝0.92％)。

表4三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁加样回收实验结果

实施例3本发明中药制剂三七中人参皂苷Rb₁的含量测定方法

供试品溶液的制备条件的选择

样品制备方法确定：

提取方法的选择试验考察了超声提取30min，回流提取30min，冷浸12h等方法，结果表明，超声处理的结果与加热回流提取结果相差不大，考察了超声提取0.5、1、1.5、2h对人参皂苷Rb₁含量的影响，结果确定采用超声处理0.5h作为本文的提取方法。

提取溶剂的选择试验考察了用甲醇、50％甲醇、乙醇、50％乙醇溶液作为提取溶剂超声提取0.5h，按照正文含量测定向下方法进行测定，结果表明甲醇为提取溶剂时，人参皂苷Rb₁的峰与其他物质的峰分离较好，峰形较好，最终确定甲醇作为提取溶剂。

色谱方法的确定：

流动相的选择 2015年版《中国药典》及有关三七含量测定的文献中含量的流动相均为乙腈与水的梯度流动相，洗脱梯度：19％A(0-12分钟)，19％→81％(12-60分钟)，81％→19％(60-65分钟)。这种梯度流动相基线极易发生漂移，影响峰面积的积分，含量误差较大；分析时间长，一针样品的分析时长约65分钟。而在本文中，通过乙腈-水(32:68)检测人参皂苷Rb₁的含量，等度流动相，色谱峰更漂亮，峰面积积分误差小，分析时长约12分钟，大大节省了分析时间。

检测波长的选择通过对人参皂苷Rb₁对照品溶液进行紫外扫描，在203±1nm处有最大吸收，与《中国药典》2015年版三七含量测定项下的检测波长一致，故选择203nm作为检测波长。

人参皂苷Rb₁的含量测定方法：

色谱条件色谱柱：Sinochrom ODS BP(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃，进样量：10μl。

对照品溶液的制备取人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb₁100μg的溶液，即得。

阴性对照样品的制备按处方比例称取除三七以外的其余药材，按制备工艺制成缺三七药材的阴性对照样品。

线性关系的考察精密称取人参皂苷Rb₁8.73mg，加甲醇制成含人参皂苷Rb₁0.3492mg/ml对照品储备液，精密吸取上述对照品母液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、10ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得人参皂苷Rb₁浓度分别为17.46、34.92、69.84、104.80、139.70、349.20μg/ml的对照品溶液，取上述溶液10μl，进样分析，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，进行计算，得回归方程：Y＝3.8570X-0.0108,r＝0.99999。

表5Rb1线性关系考察结果

结果表明人参皂苷Rb1在0.1746～3.492μg范围内有良好的线性关系。

精密度实验：

(1)中间精密度实验精密吸取上述供试品溶液，在上述色谱条件下在三台不同仪器上同时检测，计算含量。结果人参皂苷Rb₁含量RSD为2.94％，表明精密度良好，结果见表6。

表6中间精密度考察结果

(2)重复性试验取同一批次(批号：140701)的样品0.5g，精密称定，平行6份，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样10μl，测得人参皂苷Rb₁的平均含量为9.233mg/g，RSD为1.01％，结果表明此法重复性良好。

稳定性试验取重复性试验中的1份供试品溶液，于0、2、4、6、8、10、24h测定人参皂苷Rb1的峰面积，结果供试品溶液在24h内峰面积基本不变，人参皂苷Rb1RSD为0.99％，可见供试品溶液在24h内稳定。

加样回收率试验称取已知含量的同一批号(140701)的利胃胶囊样品0.25g，精密称定6份，分别加入人参皂苷Rb₁对照品1.676mg，按正文含量测定项下方法制备，按上述色谱条件进样分析，计算回收率，结果见表7。

表7三七皂苷Rb₁加样回收实验结果

实施例4本发明中药制剂三七中三种含量的限度确定

样品测定取利胃胶囊样品3批，以上述方法制备对照品溶液和供试品溶液，分别以本文相对应的色谱条件和2015年版《中国药典》中三七的含测条件测定，以外标法计算三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁的含量，结果见表8、表9。

表8利胃胶囊三七中3种皂苷含量

表9利胃胶囊三七中3种皂苷含量(药典方法)

从以上结果可以看出：改变色谱条件，对利胃胶囊中三七3种皂苷的含量结果无影响。

含量限度的确定对利胃胶囊五批中试样品进行测定，结果见表10。

表10三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁含量测定结果表(n＝5)

据上述测定结果，仍订本品每粒含三七以人参皂苷Rg₁(C₄₂H₇₂O₁₄)计，不得少于4.0mg，和原专利(公开号CN 1879711A)中标准含量限度保持一致。

这5批中试样品中人参皂苷Rg₁的实际平均含量为6.82mg/粒，即：人参皂苷Rg₁平均含量的58.65％为4.0mg/粒，以此类推得出三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁含量限度。即：三七皂苷R₁≥0.79mg/粒；人参皂苷Rg₁≥4.0mg/粒；人参皂苷Rb₁≥2.18mg/粒。

Claims

1.一种治疗胃病的中药制剂的检测方法，该中药制剂是由三七190g、枯矾160g、煅花蕊石80g、酒大黄70g的原料药制备而成，其特征在于，所述的检测方法是采用薄层色谱法对该中药制剂中的三七进行定性鉴别和采用高效液相色谱法对该中药制剂的活性成分三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁进行含量测定。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于三七的定性鉴定方法为：取本品少量，有机溶剂萃取后离心，上清液作为供试品溶液。

3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于三七的鉴定方法为：取本品少量，加甲醇超声处理，离心，取上清液作为供试品溶液，另取三七对照药材少量，加甲醇超声处理，离心，取上清液作为对照药材溶液;再取人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2015年版第四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液微量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

4.如权利要求3所述的测定方法，其特征在于三七的鉴定方法为：取本品1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取三七对照药材0.4g，同法制成对照药材溶液，再取人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2015年版第四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水（20：40：10：20）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，均显相同的荧光斑点。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的含量测定方法：

①照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版第四部通则0512）测定；

6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的含量测定方法：

②对照品溶液的制备精密称取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备精密称取本品适量，用甲醇超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

7.如权利要求6所述的测定方法，其特征在于三七中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁的含量测定方法：

②色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（21:79）为流动相；检测波长均为203nm，理论板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

③对照品溶液的制备取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R₁40μg的溶液，人参皂苷Rg₁80μg的混合对照品溶液，即得；

④供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

⑤测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，本品每粒含三七以人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）计，不得少于4.0mg；含三七以三七皂苷R₁(C₄₇H₈₀O₁₈)计，不得少于0.79mg。

8.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于三七中人参皂苷Rb₁的含量测定方法：

9.如权利要求8所述的测定方法，其特征在于三七中人参皂苷Rb₁的含量测定方法：

②对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb₁对照品适量，加甲醇制成对照品溶液，即得；

10.如权利要求9所述的测定方法，其特征在于三七中人参皂苷Rb₁的含量测定方法：

②色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（32:68）为流动相；检测波长均为203nm；

③对照品溶液的制备取人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb₁100μg的溶液，即得；

⑤测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，本品每粒含三七以人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)计，不得少于2.18mg。