CN103230448A - 一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法，所述复方配方颗粒由质量比为1～3：0.5～2：0.5～2：0.5～2.5：0.5～2.5的黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄制得；将黄连、黄岑、芍药煎煮、过滤并留取滤液；加入阿胶和鸡子黄；浓缩成清膏、干燥制成颗粒，既得。其检测方法：通过薄层色谱法鉴定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒；通过农药残留量测定法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的有机氯农药残留含量；通过炽灼残渣检查法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的重金属含量；通过热浸法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒的浸出物含量；通过高效液相色谱法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中物质的含量。

Description

一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种中药及其制备方法和检测方法，尤其涉及一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法。 

背景技术

黄连阿胶汤，方出自《伤寒论.辨少阴病脉证并治篇》，有黄连、黄芩、阿胶、芍药、鸡子黄5味药物组成。原治“少阴病得之二三日以上，心中烦，不得卧”之证候。临床上通过加减化裁，常用于治疗心律失常、肺结核、支气管扩张以及子宫出血等病而见阴虚火旺之侯者。 

方解：黄连味苦入心，性凉解热，故重用之以解心中发烦，辅以黄芩，恐心中之热扰及于肺也，又肺为肾之源，清肺亦所以清肾也。芍药味兼苦酸，其苦也善降，其酸也善收，能收降浮越之阳，使之下归其宅，而性凉又能滋阴，兼能利便，故善滋补肾阴，更能引肾中外感之热自小便出也。阿胶其性善滋阴，又能潜伏，能直入肾中以宜肾水，鸡子黄中含有副肾髓质之分泌素，推以同气相求之理，更能直入肾中以益肾水，肾水充足，自能胜热逐邪以上镇心火之妄动，而心中发烦自愈矣。 

中药配方颗粒是在中医药理论指导下，以规范炮制加工的中药饮片为原料，采用提取、低温浓缩、瞬间干燥等工艺技术而制成的颗粒剂。单味的配方颗粒最早出现在日本，20世纪80年代发展加快，约2/3的日本医生在临床中应有配方颗粒剂，在开发研究领域取得了瞩目的成就，其中研究的复方配方颗粒约有200种，单味中药浓缩颗粒200余中。我国于90年代初开始研制配方颗粒，以成功研制出400余种单味的中药配方颗粒，复方的配方颗粒剂未见报告。因此复方配方颗粒的研究和开发具有很大的必要性和广泛的前景。 

中医用药讲究整体，辩证施制。根据不同的病因，病机而灵活运用，配方颗粒正适应这一需要，即保留了原中药饮片的特征，又可随证加减。同时中药配方颗粒精选道地药材，遵循炮制规范，采用先进设备、多成分提取工艺，低温浓缩，喷雾干燥，减少了中药加热时间，避免了汤剂煎煮过程中的有效成分的挥发、破坏和变质已经先煎、后下、包煎和煎煮容器 不规范导致临床疗效的减弱。同时中药配方颗粒采用铝箔袋包装，剂量准确，避免传统中药饮片贮藏中常见的走油、变色、虫蛀、霉变等难题，有利于药物储存和患者携带使用，省去了煎煮的麻烦，即使出差、旅游，也不会中断治疗。配方颗粒的生产过程中实施GMP监控，每个品种自原料、中间体、半成品、成品的各个环节分别建立了各自的生产和质量管理文件，确保产品质量的稳定。 

尽管单味的中药配方颗粒具有很多优点，但在临床药效中也存在许多的不足，中药的临床运用体现了辩证统一的观点，各药物经适当配伍后，既能增强原来药物疗效，又能调和药物偏性，体现了“药有个性之特长，方有合群之妙用”。传统汤剂中的药物通过共同煎煮能相互促进，相互制约，增加疗效，缓和药性。而单味的中药配方颗粒，直接冲服，对它的药效具有一定的影响。同时由于患者受到传统思想的束缚，汤剂的应有在人们的脑中已根深蒂固，因此需要加大配方颗粒的宣传突破这种格局。 

发明内容

因此，本发明的目的是针对现有技术中单味饮片配方颗粒服用时简单相加的不足，提供一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法。 

除非特别指明，本文中的“本品”均指“黄连阿胶汤复方配方颗粒”。 

除非特别指明，本文中的“六六六”均指“六氯环己烷”。 

除非特别指明，本文中的“滴滴涕”均指“双对氯苯基三氯乙烷”。 

除非特别说明，本文中所涉及到的薄层色谱法、高效液相色谱法以及醇溶性浸出物测定法项下的热浸法均是根据中国药典2010年版中所记载的试验方法进行的。 

除非特别指明，本文所用饮片炮制同《中国药典》2010年版一部各饮片。 

除非特别指明，本文中的“盐酸”均为质量分数37.5%的盐酸。 

一方面，本发明提供一种黄连阿胶汤复方配方颗粒，所述复方配方颗粒包括质量比为1～3：0.5～2：0.5～2：0.5～2.5：0.5～2.5的黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料；黄连、黄岑、芍药煎煮后的滤液与阿胶、鸡子黄搅拌，浓缩得到清膏，将清膏干燥后制成颗粒，既得； 

优选地，所述黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料的质量比为2：1：1：1.5：1.5。 

另一方面，本发明提供一种黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，所述方法包括以下步骤： 

1）取质量比为1～3：0.5～2：0.5～2：0.5～2.5：0.5～2.5的黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料；优选地，所述黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料的质量比为2：1：1：1.5：1.5； 

2）将黄连、黄岑、芍药三味药加水煎煮、过滤并留取滤液； 

3）将烊化后的阿胶加入滤液，并加入鸡子黄搅拌均匀； 

4）将所述滤液浓缩为清膏； 

5）将所述清膏干燥，得到干浸膏粉； 

6）将所述干浸膏粉加入药学上可接受的载体或赋形剂制成颗粒，既得。 

其中，步骤2）中所述煎煮分两次进行； 

优选地，第一次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的6～10倍，煎煮时间为1～2小时；第二次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的6～10倍，煎煮时间为1～2小时；合并两次煎煮的滤液； 

更优选地，第一次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的10倍，煎煮时间为1小时；第二次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的8倍，煎煮时间为1小时；合并两次煎煮的滤液。 

步骤4）中，所述滤液浓缩为60℃时，相对密度1.05～1.15的清膏；优选地，所述滤液浓缩为为60℃时，相对密度1.14的清膏。 

步骤5）中所述干燥为喷雾干燥；优选地，所述喷雾干燥的进风温度为180℃，出风温度为90℃，泵转速1.5%。 

所述步骤6）中使用干法制粒机制粒；所述药学上可接受的载体或赋形剂为淀粉。 

所述步骤6）制成颗粒后进行分装；优选地，分装为每袋21g。 

再一方面，本发明还提供一种黄连阿胶汤复方配方颗粒的检测方法，所述方法包括以下步骤： 

a)：定性检测黄连成分：所述定性检测是通过薄层色谱法进行的；其中，供试品为黄连阿胶汤复方配方颗粒，对照药材为黄连，对照品为盐酸小檗碱； 

b)：定性检测芍药成分：所述定性检测是通过薄层色谱法进行的；其中，供试品为黄连阿胶汤复方配方颗粒，；对照品为芍药苷； 

c）：通过炽灼残渣检查法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的重金属含量； 

d）：通过农药残留量测定法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的有机氯农药残留含量； 

e）：通过醇溶性浸出物热浸测定法检测浸出物含量； 

f）：通过高效液相色谱法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中物质的 含量。 

步骤a）中， 

所述供试品和对照药材分别加甲醇用超声处理、过滤，得到供试品溶液和对照药材溶液；所述对照品为盐酸小檗碱，将其溶于甲醇，得到对照品溶液；以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺为展开剂； 

步骤b）中， 

所述供试品加甲醇、用超声处理、过滤后得到的溶液蒸干，使用正丁醇提取；用氨液洗涤后蒸干，残渣溶于乙醇，制得供试品溶液；取芍药苷对照品溶于乙醇制得对照品溶液；以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂；以质量与体积比5%的香草醛硫酸溶液为显色剂； 

步骤c）中，测得的重金属含量≤25ppm； 

步骤d)中，所述有机氯农药为六六六、滴滴涕和五氯硝基苯，所述六六六的含量≤0.20ppm；所述滴滴涕的含量≤0.20ppm，所述五氯硝基苯的含量≤0.10ppm; 

步骤e）中浸出物的含量≥35.7%； 

所述步骤f）包括以下步骤： 

1）进行色谱条件与系统适应性试验，其中以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比30∶70的乙腈和0.033mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为265nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000； 

2）制备待测样品溶液，通过高效液相色谱法测定，所述待测样品溶液包括对照品溶液和供试品溶液； 

3）测定，既得结果。 

优选地，步骤a）中，所述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液通过以下步骤制得：取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；取黄连对照药材0.25g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml甲醇含0.5mg盐酸小檗碱的溶液，作为对照品溶液； 

所述环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺的体积比为3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1； 

步骤b）中，所述供试品溶液和对照药材溶液通过以下步骤制得：取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液并将滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并滤液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml乙醇含1mg芍药苷的溶液，作为对照品溶液； 

所述三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液中三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和浓氨试液的体积比为8：1：4：1； 

步骤f）中，所述对照品溶液通过包括以下步骤的方法制备：精密称取盐酸小檗碱对照品1.003mg置20ml容量瓶中，加入体积比为1∶100的盐酸：甲醇溶液定容至刻度作为对照品溶液； 

更优选地，每1ml的盐酸：甲醇溶液含盐酸小檗碱对照品50.15μg； 

步骤f）中，所述供试品溶液通过包括以下步骤的方法制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取续滤液2ml至10ml容量瓶中，用体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液定容至刻度，摇匀，滤过，即得； 

更优选地，超声处理为功率240W，频率45kHz。 

本品按干燥品计算，每袋含以盐酸小檗碱C₂₀H₁₈CLNO₄2H₂O)计，不得少于8.57mg。 

本发明是在中医理论的基础上，选取《伤寒论.辨少阴病脉证并治篇》经典药方：黄连阿胶汤，运用现代提取技术，低温浓缩，喷雾干燥制得复方配方颗粒，工艺稳定可行。既便于临床的使用，具有单味配方颗粒的优点，同时也克服了单味配方颗粒上的药效上的缺陷，充分发挥传统配伍的优势，有广泛的市场前景。 

与现有技术相比，本发明具有以下优点： 

(1)黄连阿胶汤复方按传统方法合煎，充分发挥中药配伍的优势，体现了中医药整体观念，确保其达到减毒增效的目的，克服了目前单味配方颗粒服用时各药味简单相加带来的不足； 

(2)提供了了黄连阿胶汤复方配方颗粒完善的检测方法，可以有效地控制该配方颗粒的质量，以更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，在产品生产过程中，能有效的控制产品的质量，从而确保黄连阿胶汤复方配方颗粒的临床疗效和安全性。 

(3)黄连阿胶汤复方配方颗粒便于药物储存和患者携带使用，患者在使用上省去了煎煮的麻烦；配方颗粒制备简单，符合传统中药用药特点，质量准定可控，携带使用方便，符合现代人们对药物“三小”、“三效”和“五方便”的要求。 

(4)对促进传统中医药现代化有较大意义。 

该发明具有广泛的应用前景。 

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中： 

图1为本发明的黄连阿胶汤复方配方颗粒的黄连鉴别的薄层层析色谱图；图中，1为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），2为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），3为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），4为阴性供试品溶液，5为黄连对照药材溶液，6为盐酸小檗碱对照品溶液；薄层层析时的温度为25℃。 

图2为本发明的黄连阿胶汤复方配方颗粒的芍药鉴别的薄层层析色谱图；图中，1为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），2为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），3为黄连阿胶汤复方配方颗粒供试品溶液（批号：20110920），4为芍药苷对照品溶液，5为芍药苷对照品溶液，6为阴性供试品溶液，7为阴性供试品溶液；薄层层析时的温度为25℃。 

图3为本发明的黄连阿胶汤复方配方颗粒的专属性试验结果，其中，图4a为空白溶剂（本发明为体积比1：100的盐酸甲醇混合溶液）的高效液相色谱图；图4b为黄连阴性样品溶液的高效液相色谱图；图4c为盐酸小檗碱对照品溶液的高效液相色谱图；图4d为本品溶液的高效液相色谱图。 

图4为本发明的黄连阿胶汤复方配方颗粒中的盐酸小檗碱浓度与峰面积的线性关系图。 

具体实施方式

实施例1黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备

按处方比例称取黄连62g、黄芩31g、芍药31g、阿胶46.5g、鸡子黄31g，黄连、黄芩、芍药三味药加水煎煮二次，每次1小时，加水量分别为10倍、8倍量，滤过，合并两次滤液，取阿胶烊化后加入滤液，同时加入鸡子黄搅拌混匀，浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，干燥，加辅料制成63g，即得。 

实施例2黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备

按处方比例称取黄连62g、黄芩31g、芍药31g、阿胶46.5g、鸡子黄 31g，黄连、黄芩、芍药三味药加水煎煮二次，每次2小时，加水量分别为6倍、10倍量，滤过，合并两次滤液，取阿胶烊化后加入滤液，同时加入鸡子黄搅拌混匀，浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，干燥，加辅料制成63g，即得。 

实施例3黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备

按处方比例称取黄连62g、黄芩31g、芍药31g、阿胶46.5g、鸡子黄31g，黄连、黄芩、芍药三味药加水煎煮二次，每次1小时，加水量分别为10倍、6倍量，滤过，合并两次滤液，取阿胶烊化后加入滤液，同时加入鸡子黄搅拌混匀，浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，干燥，加辅料制成63g，即得。 

实施例4黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备

按处方比例称取黄连62g、黄芩31g、芍药31g、阿胶31g、鸡子黄15g，黄连、黄芩、芍药三味药加水煎煮二次，每次1小时，加水量分别为10倍、8倍量，滤过，合并两次滤液，取阿胶烊化后加入滤液，同时加入鸡子黄搅拌混匀，浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，干燥，加辅料制成61g，即得。 

实施例5黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备

按处方比例称取黄连46.5g、黄芩31g、芍药31g、阿胶38.8g、鸡子黄45g，黄连、黄芩、芍药三味药加水煎煮二次，每次1小时，加水量分别为10倍、8倍量，滤过，合并两次滤液，取阿胶烊化后加入滤液，同时加入鸡子黄搅拌混匀，浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，干燥，加辅料制成64g，即得。 

实施例6薄层色谱法鉴定实施例1制得的黄连阿胶汤复方配方颗粒

(1)黄连鉴别 

参考中国药典2010版黄连的鉴别项下制定，对一批提取物进行鉴别，结果薄层色谱斑点清晰，重现性较好 

1、试药与试剂 

黄连对照药材：批号120913-200407，购于中国药品生物制品检定所； 

盐酸小檗碱：批号为110713-200208，购于中国药品生物制品检定所； 

供试品：批号20110920由康美药物研究院自制； 

阴性对照：制造缺黄连的黄连阿胶汤对照样品，由康美药物研究院自制。 

薄层板：硅胶G板（青岛）。 

试剂均为分析纯 

2、实验记录 

供试品溶液的制备：取本品5g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过， 取滤液作为供试品溶液。 

对照药材溶液的制备：黄连对照药材0.25g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。 

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。 

阴性供试品的制备：取缺黄连的黄连阿胶汤对照品5g，同供试品溶液的制备制成阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G板，自制； 

点样量：各5μl； 

点样方式：点状点样； 

展开剂：环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3:3.5:1:1.5:0.5:1）为展开剂，置用浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干； 

检视：置紫外光灯（365nm）下检视。 

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见相对应斑点，显示该方法可靠可行。结果见图1。 

(2)芍药鉴别 

参考中国药典2010版逍遥颗粒的芍药鉴别项下制定，对一批提取物进行鉴别，结果薄层色谱斑点清晰，重现性较好。 

1.1试药与试剂 

供试品：批号20110920；由康美药物研究院自制； 

芍药苷对照品：批号：110736-201035；购于国家药品标准物质； 

阴性对照：制造缺黄连的黄连阿胶汤对照样品；由康美药物研究院自制； 

薄层板：硅胶G板（自制）； 

所用试剂均为分析纯。 

1.2实验记录 

供试品溶液的制备：取本品5g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过并留取滤液，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并滤液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。 

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 

阴性供试品的制备：取缺芍药黄连阿胶汤对照品5g，同供试品溶液的制备制成阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G板，自制； 

点样量：各5μl； 

点样方式：点状点样； 

展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8:1:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干； 

显色检视：5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点清晰。自然光下检视。 

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见相对应斑点，显示该方法可靠可行。 

结果见图2 

实施例7测定实施例1制得的黄连阿胶汤复方配方颗粒的重金属含量

参照《中国药典》2010年版一部黄连上清丸【检查】项下，检查重金属的方法制定，对本品(批号：20110920)进行了检查，结果符合规定。 

实施例8测定实施例1制得的黄连阿胶汤复方配方颗粒的有机氯农药残留含量

参照《中国药典》2010年版一部附录ⅨQ有机氯类农药残留测定法及《中国药典》2010年版一部甘草【检查】项下，检查有机氯农药残留量的方法制定，对本品(批号：20110920)进行了检查，结果符合规定。 

实施例9测定实施例1制得的黄连阿胶汤复方配方颗粒的其他

参照《中国药典》2010年版一部附录ⅠC颗粒剂项下规定，对本品样品(批号：20110920)的【粒度】、【水分】、【溶化性】、【装量差异】、【微生物限度】进行了检查，结果上述各项均符合规定。 

实施例10测定实施例2制得的黄连阿胶汤复方配方颗粒的浸出物

平行取本品(批号：20110920)颗粒3份，每份约2.00g，精密称定，精密加乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(中国药典2010年版一部附录ⅩA)测定，测得浸出物的质量为0.6888-0.6946，质量比为35.7%-35.9%，即不少于35.7%，符合规定。 

实施例11黄连阿胶汤复方配方颗粒的检测方法

（1）黄连的检测方法 

本方法参考《中国药典》2010年版一部万应胶囊【含量测定】项下方法，进行方法的优化，建立高效液相色谱法测定本品中盐酸小檗碱含量的方法，并进行方法学验证，证明此方法可有效测定本方中盐酸小檗碱含量，具体说 明如下： 

1．仪器与试药 

1.1仪器：高效液相色谱仪：waters e2695，Chemstation化学工作站；色谱柱：Ecosil HPLC COLUM C18(4.6×250mm，5μm)；电子分析天平：FA2104、XP6；超声清洗仪：(KQ-300VDB)。 

1.2试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 

1.3试药：黄连阿胶汤配方颗粒(批号：20110920)； 

盐酸小檗碱(中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208)。 

2．色谱条件及系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30：70的乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。 

3．溶液的制备 

3.1对照品溶液的制备： 

精密称取盐酸小檗碱对照品1.003mg置20ml容量瓶中，加入体积比为1：100的盐酸：甲醇溶液定容至刻度作为对照品溶液（盐酸为浓盐酸，质量分数为40%），即每1ml含盐酸小檗碱对照品50.15μg。 

3.2供试品溶液的制备： 

取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸：甲醇溶液20ml（盐酸为浓盐酸，质量分数为40%），，密塞，称定重量，功率240W，频率45kHz超声处理30分钟，放冷，用体积比为1：100的盐酸：甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取续滤液2ml至10ml容量瓶中，用体积比为1：100的盐酸：甲醇溶液定容至刻度，摇匀，滤过，即得。 

4方法学验证 

4.1准确度试验 

取批号20110920的供试品6份，每份0.5g，实际取样按干燥品计算，盐酸小檗碱含量的质量百分比为4.02%，精密称定，置具赛锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸(37.5%)：甲醇溶液20ml（盐酸为浓盐酸，质量分数为37.5%），，密塞，称定重量，摇匀，滤过，精密移取滤液2.0ml到10ml容量瓶中，加入重新配置的0.4692mg/ml的对照溶液2ml，定量至10ml刻度线，既得。吸取10ul，进样10ul；，具体见表1； 

表1精密度测定 

4.2精密度试验 

4.2.1重复性试验 

取同批次（20110920）的黄连阿胶汤颗粒，按上述3.2供试品溶液的制备制备供试品溶液6份，分别测定盐酸小檗碱含量的质量百分含量，结果见表2。 

表2重复性试验结果(n=6) 

由上表可知本法重复性良好，符合含量测定的要求。 

4.2.2精密度试验 

精密称取盐酸小檗碱对照品1.114mg，到25ml容量瓶中，用体积比为1：100的盐酸：甲醇溶液定容置刻度，摇匀，滤过，取续滤液，重复进配好的对照品溶液6次，既得，见表3。 

表3精密度试验结果 

由上表可知本法精密度良好，符合含量测定的要求。 

4.3专属性试验 

按处方量称取本品粉未0.5064g，黄连阴性样品0.5068g，分别置具塞锥形瓶中，精密加入体积比1∶100的盐酸：甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，功率240W，频率45kHz超声处理30分钟，放冷，滤过，精密移取续滤液2ml至10ml容量瓶中，用体积比1∶100的盐酸：甲醇溶液定容至刻度，摇匀，滤过，即得样品溶液和黄连阴性样品溶液。 

取空白溶剂(即体积比1∶100的盐酸：甲醇溶液)、样品溶液及黄连阴性样品溶液按含量测定项下方法测定。 

从图谱可知，样品图谱在与盐酸小檗碱对照品图谱相同保留时间处有相应色谱峰，而空白溶剂及黄连阴性样品色谱图中无相应的色谱图，表明，在此含量测定下，阴性样品及空白溶剂皆不干扰样品中盐酸小檗碱的含量测定，方法专属性良好。色谱图见图3a-3d： 

4.4线性关系 

精密吸取上述盐酸小檗碱对照品溶液2、5、10、15、20μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值对黄连小檗碱浓度进行回归处理，回归方程为Y=6E+06X-19050，r=1，结果见图4。 

4.4稳定性试验 

取同一黄连阿胶汤配方颗粒(批号：20110920)供试液，按上述色谱条件，分别于0、3、6、9、12小时进样，测定盐酸小檗碱峰面积。结果见表4，结果表明盐酸小檗碱在12小时内稳定。 

表4稳定性试验结果 

5．样品含量测定 

取黄连阿胶汤配方颗粒，按拟定含量测定方法测定，测得小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄)含量见表5。 

表5样品含量测定结果 

6．含量限度的确定 

含量限度按测定结果的80%计算，因为每袋装21g，因此暂定含量限度为每袋含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄)计，不得少于85.7mg。 

Claims (10)

1.一种黄连阿胶汤复方配方颗粒，所述复方配方颗粒包括质量比为1～3：0.5～2：0.5～2：0.5～2.5：0.5～2.5的黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料；黄连、黄岑、芍药煎煮后的滤液与阿胶、鸡子黄搅拌，浓缩得到清膏，将清膏干燥后制成颗粒，既得；优选地，所述黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料的质量比为2：1：1：1.5：1.5。 

2.一种黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，所述方法包括以下步骤： 

1）取质量比为1～3：0.5～2：0.5～2：0.5～2.5：0.5～2.5的黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料；优选地，所述黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄五味原料的质量比为2：1：1：1.5：1.5； 

2）将黄连、黄岑、芍药三味原料加水煎煮、过滤并留取滤液； 

3）将烊化后的阿胶加入滤液，并加入鸡子黄搅拌均匀； 

4）将所述滤液浓缩为清膏； 

5）将所述清膏干燥，得到干浸膏粉； 

6）将所述干浸膏粉加入药学上可接受的载体或赋形剂制成颗粒，既得。 

3.根据权利要求2所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述煎煮分两次进行； 

优选地，第一次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的6～10倍，煎煮时间为1～2小时；第二次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的6～10倍，煎煮时间为1～2小时；合并两次煎煮的滤液； 

更优选地，第一次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的10倍，煎煮时间为1小时；第二次煎煮加水量为步骤2）三味药总重量的8倍，煎煮时间为1小时；合并两次煎煮的滤液。 

4.根据权利要求2所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，其特征在于，步骤4）中，所述滤液浓缩为60℃时，相对密度1.05～1.15的清膏；优选地，所述滤液浓缩为为60℃时，相对密度1.14的清膏。 

5.根据权利要求2所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，其特征在于，步骤5）中所述干燥为喷雾干燥；优选地，所述喷雾干燥的进风温度为180℃，出风温度为90℃，泵转速1.5%。 

6.根据权利要求2所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤6）中使用干法制粒机制粒；所述药学上可接受的载体或赋形剂为淀粉。 

7.根据权利要求2所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤6）制成颗粒后进行分装；优选地，分装为每袋21g。 

8.一种黄连阿胶汤复方配方颗粒的检测方法，所述方法包括以下步骤： 

a)：定性检测黄连成分：所述定性检测是通过薄层色谱法进行的；其中，供试品为黄连阿胶汤复方配方颗粒，对照药材为黄连，对照品为盐酸小檗碱； 

b)：定性检测芍药成分：所述定性检测是通过薄层色谱法进行的；其中，供试品为黄连阿胶汤复方配方颗粒，；对照品为芍药苷； 

c）：通过炽灼残渣检查法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的重金属含量； 

d）：通过农药残留量测定法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中的有机氯农药残留含量； 

e）：通过醇溶性浸出物热浸测定法检测浸出物含量； 

f）：通过高效液相色谱法测定所述黄连阿胶汤复方配方颗粒中物质的含量。 

9.根据权利要求8所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的检测方法，其特征在于， 

步骤a）中， 

所述供试品和对照药材分别加甲醇用超声处理、过滤，得到供试品溶液和对照药材溶液；所述对照品为盐酸小檗碱，将其溶于甲醇，得到对照品溶液；以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺为展开剂； 

步骤b）中， 

所述供试品加甲醇、用超声处理、过滤后得到的溶液蒸干，使用正丁醇提取；用氨液洗涤后蒸干，残渣溶于乙醇，制得供试品溶液；取芍药苷对照品溶于乙醇制得对照品溶液；以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂；以质量体积比5%的香草醛硫酸溶液为显色剂； 

步骤c）中，测得的重金属含量≤25ppm； 

步骤d)中，所述有机氯农药为六六六、滴滴涕和五氯硝基苯，所述六六六的含量≤0.20ppm；所述滴滴涕的含量≤0.20ppm，所述五氯硝基苯的含量≤0.10ppm; 

步骤e）中浸出物的含量≥35.7%； 

所述步骤f）包括以下步骤： 

1）进行色谱条件与系统适应性试验，其中以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比30∶70的乙腈和0.033mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为265nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000； 

2）制备待测样品溶液，通过高效液相色谱法测定，所述待测样品溶 液包括对照品溶液和供试品溶液； 

3）测定，既得结果。 

10.根据权利要求8或9所述的黄连阿胶汤复方配方颗粒的检测方法，其特征在于， 

步骤a）中，所述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液通过以下步骤制得：取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；取黄连对照药材0.25g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml甲醇含0.5mg盐酸小檗碱的溶液，作为对照品溶液；所述环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺的体积比为3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1； 

步骤b）中，所述供试品溶液和对照药材溶液通过以下步骤制得：取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液并将滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并滤液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml乙醇含1mg芍药苷的溶液，作为对照品溶液；所述三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液中三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和浓氨试液的体积比为8：1：4：1； 

步骤f）中，所述对照品溶液通过包括以下步骤的方法制备：精密称取盐酸小檗碱对照品1.003mg置20ml容量瓶中，加入体积比为1∶100的盐酸：甲醇溶液定容至刻度作为对照品溶液；优选地，每1ml的盐酸：甲醇溶液含盐酸小檗碱对照品50.15μg； 

步骤f）中，所述供试品溶液通过包括以下步骤的方法制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取续滤液2ml至10ml容量瓶中，用体积比1∶100的盐酸-甲醇混合溶液定容至刻度，摇匀，滤过，即得；优选地，超声处理为功率240W，频率45kHz。 

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