CN103645251B - 一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法，该方法色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；流动相A为0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1%～5%甲酸溶液或0.02%～5%磷酸溶液；B为乙腈或甲醇；梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波长为190～410nm，柱温25～55℃。该方法精密度较高，稳定性、重复性良好，能更全面、有效的控制制剂的质量。

Description

一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，具体地说，本发明涉及一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法。

背景技术

复方阿胶浆是一种补气养血的中成药，在我国以应用多年。该制剂由下述原料药制成，阿胶5份、红参6份、熟地8份、党参12份、山楂5份，将上述各组分制成本发明药物的制备方法如下：

①按照上述用量称取原料中药材；

②上述原料中药材加适量水提取、浓缩、过滤，备用；

③阿胶加适量水溶化，加入步骤②的药液中，充分混匀，备用。

④在步骤③中加入适量的白糖，加热使溶解，混匀，既得口服液。

步骤③所得混合溶液，加入药学上可接受的辅料和/或赋形剂，采用现代工艺还可制成临床可接受的任何剂型，如片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂等。

目前，对该制剂的检测，一般仅以Rg1、Re、Rb1、总氮为检测指标，但是它根本不能全面反应产品的质量，仅以此来控制中药复方制剂的质量不是十分合理；如果用别的指标进行控制，一是含量成分较低，二是目前没有现成的检测方法和检测条件，比较难于建立合适的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法及其检测指标。

该复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：精密称取待测复方阿胶制剂，加水溶解，加0.5～3倍量乙酸乙酯、0.5～3倍量正丁醇提取，取上清液，虑过，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作为参照物溶液；

（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；流动相A为0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1%～5%甲酸溶液或0.02%～5%磷酸溶液；B为乙腈或甲醇；

梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波长为190～410nm，柱温25～55℃；

（4）标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以红参、党参、熟地黄、山楂一种或几种成分为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其他共有色谱峰的相对保留时间，其相对标准偏差不得超过±20%；

（5）以（1）～（3）所述方法检测待测复方阿胶制剂，制备待测样品的指纹图谱；

（6）将待测复方阿胶制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或全部：

Ⅰ.计算待测复方阿胶制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.8～1.00；

Ⅱ.待测复方阿胶制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的15%；

Ⅲ.除参照物色谱峰之外的其他共有峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±20%。

优选的，该复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：精密称取待测复方阿胶制剂，加水溶解，加四倍量配比为2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为参照物溶液；

（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；流动相为A为0.03mol/L磷酸二氢钾溶液；B为乙腈；梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，流动相B比例为0，从10分钟至33分钟，流动相B的比例由0至12%，从33分钟至51分钟，流动相B的比例由12%升至16%，从51分钟至68分钟，流动相B的比例由16%升至30%，从68分钟至80分钟，流动相B的比例由30%升至50%，流速为1.0ml/min、检测波长为203±1nm，柱温,35℃；

（4）标准指纹图谱的制定：精密吸取参照物溶液与供试品溶液各15μl，分别注入液相色谱仪，依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定指纹图谱，共有峰8～25个，以确定的参照物色谱峰保留时间为基准，计算其他共有色谱峰的相对保留时间，其相对标准偏差不得超过±10%；

（5）以（1）～（3）所述方法作为待测复方阿胶制剂中红参、党参、熟地黄、山楂中一种或几种成分为主的指纹图谱测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

（6）将待测复方阿胶制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或全部：

Ⅰ.计算待测复方阿胶制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.9～1.00；

Ⅱ.待测复方阿胶制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10%；

Ⅲ.除参照物色谱峰之外的其他共有峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10%。

该复方阿胶制剂可以为口服液、片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂等。

有益效果

该检测方法包括该组方制剂中红参、党参、熟地黄、山楂的指纹图谱测试方法及其主要代表成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸的含量测定方法，通过指纹图谱得到量化参数，方法精密度较高，稳定性、重复性良好，能更全面、有效的控制制剂的质量。本发明的测定方法与现有方法相比较，检测更加准确，操作更加简便，有效的缩短了检测时间。

附图说明

图1，0.03mol/L磷酸二氢钾溶液作流动相的液相色谱图

图2，复方阿胶制剂在203nm下的液相色谱图

图3，复方阿胶制剂160分钟色谱图

图4，复方阿胶制剂标准指纹图谱

具体实施方式

实施例1：复方阿胶制剂指纹图谱

（1）实验仪器、试剂及样品

对照品：人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花

糖苷、绿原酸（中国药品生物制品检定研究院）

仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪

（2）色谱系统及实应性试验

①流动相的选择

该复方阿胶制剂的主药成分是红参、党参、山楂、熟地黄和阿胶的水提取物，成分复杂，有必要应用梯度分离方法使主要成分在尽可能短的洗脱时间内得到较好的分离，采用乙腈为流动相，是为了减少梯度洗脱过程中的基线漂移，有考虑到流动相中适量添加盐可以改善分离效果，所以又考察了0.025%磷酸盐溶液、0.033%磷酸盐溶液、0.5%甲酸溶液以及0.03mol/L磷酸二氢钾溶液作为流动相。结果，应用0.03mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相色谱峰分离度较好，确定应用0.03mol/磷酸二氢钾溶液为流动相。0.03mol/L磷酸二氢钾溶液作流动相的液相色谱图见图1.

②波长选择

该复方阿胶制剂中含有皂苷、黄酮、有机酸等有紫外吸收的成分，所以供选择了203nm、215nm、254那么、280nm及350nm进行对比试验，结果在350nm和280nm处吸收很弱，峰数较少；254nm和215nm处基线较平稳，峰的数目也较多，但峰高比例差异较大；203nm下的色谱峰响应值和各峰峰高比例也较合适，所有确定203nm为检测波长。复方阿胶制剂在203nm下的液相色谱图见图2

③梯度时间的设定

考虑到该复方阿胶制剂成分复杂，不同成分极性差异较大，设定乙腈的起始浓度为0,0～80分钟进行梯度洗脱，是为了此段色谱峰尽可能的有效分离，在此条件下可使大部分色谱峰达到较好的分离，保留时间适中，且在80分钟后无其他色谱峰。具体情况见图3

④仪器及积分参数

仪器参数：Agilent1100型高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。柱温35℃，流速1.0ml/min。积分参数：最小峰面积为参照物（S）峰峰面积的10%，最小峰高为S峰峰高的10%。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰（单峰面积占总峰面积小于1%）的计算，同时保证与参照物的相关性。

⑤供试品溶液的制备

供试品溶液的制备：取待测复方制剂，加四倍量乙酸乙酯：正丁醇（2:1）提取，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）虑过，取续滤液作为供试品溶液。⑥参照物溶液的制备

人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为参照物溶液。

⑦指纹图谱及技术参数

根据16批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度在0.90～1.00之间。复方阿胶制剂标准指纹图谱见图4。

Claims (3)

1.一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称取待测复方阿胶制剂，加水溶解，加0.5～3倍量乙酸乙酯、0.5～3倍量正丁醇提取，取上清液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；流动相A为0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～1mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液；B为乙腈或甲醇；

梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波长为190～410nm，柱温25～55℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以红参、党参、熟地黄、山楂一种或几种成分为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其他共有色谱峰的相对保留时间，其相对标准偏差不得超过±20％；

(5)以(1)～(3)所述方法检测待测复方阿胶制剂，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测复方阿胶制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比：

Ⅰ.计算待测复方阿胶制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度；

Ⅱ.考察待测复方阿胶制剂指纹图谱中的非共有峰面积；

Ⅲ.考察与标准指纹图谱相比，除参照物色谱峰之外的其他共有峰与参照物色谱峰的相对保留时间。

2.如权利要求1所述的复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称取待测复方阿胶制剂，加水溶解，加四倍量配比为2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；流动相为A为0.03mol/L磷酸二氢钾溶液；B为乙腈；梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，流动相B比例为0，从10分钟至33分钟，流动相B的比例由0至12％，从33分钟至51分钟，流动相B的比例由12％升至16％，从51分钟至68分钟，流动相B的比例由16％升至30％，从68分钟至80分钟，流动相B的比例由30％升至50％，流速为1.0ml/min、检测波长为203±1nm，柱温,35℃；

(4)标准指纹图谱的制定：精密吸取参照物溶液与供试品溶液各15μl，分别注入液相色谱仪，依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定指纹图谱，共有峰8～25个，以确定的参照物色谱峰保留时间为基准，计算其他共有色谱峰的相对保留时间，其相对标准偏差不得超过±10％；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测复方阿胶制剂中红参、党参、熟地黄、山楂中一种或几种成分为主的指纹图谱测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测复方阿胶制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比：

Ⅰ.计算待测复方阿胶制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度；

Ⅱ.考察待测复方阿胶制剂指纹图谱中的非共有峰面积；

Ⅲ.考察与标准指纹图谱相比，除参照物色谱峰之外的其他共有峰与参照物色谱峰的相对保留时间。

3.根据权利要求1或2所述的鉴定方法，其特征在于，所述的复方阿胶制剂为口服液、片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂。