CN114216995B - 一种中药膏方的指纹图谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药膏方的指纹图谱检测方法,包括步骤有步骤1、供试品溶液的制备;步骤2、混合对照品溶液的制备:步骤3、分别精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图;步骤4,将步骤3中获得的中药膏方指纹图谱导出,确定共有峰;记录共有峰的保留时间、相对峰面积。本发明所提供的中药膏方的指纹图谱,能全面,客观地表征其质量。并且本发明提供的指纹图谱检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药的检测方法,具体涉及一种中药膏方的指纹图谱的检测方法。
背景技术
中药指纹图谱是一种综合的,可量化的鉴定手段,它是建立在中药化学成分系统研究的基础上,主要用于评价中药材以及中药制剂质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系,因此评价其质量应采用与之相适应的,能提供丰富鉴别信息的检测方法,建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量,进而对药品质量进行整体描述和评价。
本发明检测的中药膏方是由炙甘草、淮小麦、大枣、茯苓、肉桂、桂圆肉、阿胶、黄酒制成;是古代脏躁病专方甘麦大枣汤与古代奔豚气病的专方的合方,有定悸、安神、助眠等功效,适用于以精神恍惚异常、躁动不安、疲劳、健忘、心悸、头昏、多汗为特征的疾病。适用人群:焦虑症、抑郁症、神经症、精神分裂症、失眠症、多动症、贫血、低血压、低血糖、心功能不全人群属于虚性者。不适用人群:肾病、高血压、高脂血症、浮肿、出血、发热的人群。
发明内容
发明目的:本发明的目的是解决现有技术的不足,提供一种中药膏方的指纹图谱检测方法,该检测方法可以客观、全面、准确的评价中药膏方的质量,对控制中药膏方的质量和保证临床疗效具有重要意义。
技术方案:为了实现上述目的,本发明采取的技术方案为:
一种中药膏方的指纹图谱检测方法,包括以下步骤:
步骤1、中药膏方供试品溶液的制备:
取不同批次的中药膏方,分别精密称取,置量瓶中,加甲醇,超声提取,定容,过微孔滤膜,得供试品溶液;
步骤2、混合对照品溶液的制备:
精密称定甘草苷、甘草酸铵对照品,置于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成混合对照品溶液;
步骤3、原料药材供试品溶液的制备:
取中药膏方原料药材淮小麦、大枣、茯苓、桂圆肉、阿胶粉末各2g,炙甘草、肉桂粉末各 0.5g,分别精密称取,置量瓶中,加甲醇,超声提取,定容,过微孔滤膜,得各原料药材供试品溶液;
步骤4,分别精密吸取步骤1的中药膏方供试品溶液、步骤3原料药材供试品溶液和步骤2 混合对照品溶液,注入高效液相色谱仪,记录色谱图;
步骤5,将步骤4中获得的中药膏方供试品溶液的指纹图谱导出,确定共有峰;记录各共有峰的保留时间和相对峰面积;并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
作为优选方案,以上所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,步骤1中药膏方供试品溶液制备方法为:取不同批次的中药膏方,精密称定4g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得供试品溶液。
作为优选方案,以上所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,步骤2混合对照品溶液的制备:取甘草苷、甘草酸铵对照品,置于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成浓度分别为 57.49μg/mL的甘草苷、80.64μg/mL的甘草酸铵的混合对照品溶液。
作为优选方案,以上所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,步骤3原料药材供试品溶液的制备:取中药膏方原料药材淮小麦、大枣、茯苓、桂圆肉、阿胶粉末各2g,炙甘草、肉桂粉末各0.5g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得原料药材供试品溶液。
作为优选方案,以上所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,步骤4中,液相色谱条件为:色谱柱:YMC-Pack ODS-A,流动相:乙腈和0.1%磷酸水,紫外检测器,检测波长:254nm,柱温35℃,流速1.0mL/min,进样体积:10μL,梯度洗脱程序如下表:
程序 | 时间/min | 乙腈体积/% | 水/% |
1 | 0.01 | 2 | 98 |
2 | 10.00 | 5 | 95 |
3 | 15.00 | 5 | 95 |
4 | 35.00 | 25 | 75 |
5 | 40.00 | 25 | 75 |
6 | 45.00 | 30 | 70 |
7 | 50.00 | 30 | 70 |
6 | 85.00 | 70 | 30 |
作为优选方案,以上所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,指纹谱图中共有峰16个,其中 8号峰为甘草苷,15号峰为甘草酸铵;其中炙甘草含有峰为8、9、10、12、13、14、15、16号峰;淮小麦包含有1、2、3、7号峰;肉桂含2、3、11号峰;阿胶含有6号峰;大枣含有4、5 号峰;茯苓含有1、2号峰;桂圆肉含有1、2、4、7号峰。
本发明所述的中药膏方,它是通过以下方法制备得到的:取炙甘草30g、淮小麦180g、大枣150g、茯苓120g、桂圆肉75g、肉桂15g,加10倍量的水,先浸泡2小时,然后煎煮提取3 次,每次1小时,合并三次煎煮液,浓缩,加入阿胶黄酒溶液进一步浓缩到密度60℃为1.15-1.20 之间,灌装,既得;所述的阿胶黄酒溶液是由阿胶75g,加黄酒150ml炖化得到。
有益效果:
1、本发明根据中药膏方中所含的活性成分的结构性质特点,通过大量实验筛选出最佳的流动相组成,梯度洗脱程序、流速,检测波长、色谱柱,柱温等分析条件,经多次实验验证表明,本发明提供的中药膏方指纹图谱检测方法,可以全面、客观、准确的检测和评价中药膏方的质量,为保证临床中药膏方疗效具有重要意义。
2、本发明提供的中药膏方指纹图谱的检测方法,具有方法简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点。
附图说明
图1为中药膏方的对照指纹图谱。
图2为原药材淮小麦的色谱图。
图3为原药材肉桂的色谱图。
图4为原药材阿胶的色谱图。
图5为原药材大枣的色谱图。
图6为原药材茯苓的色谱图。
图7为原药材桂圆肉的色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明,应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围,在阅读了本发明之后,本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
本发明下例实施例所用的材料为:
1.1仪器
日本岛津公司全波段扫描(200-800nm)高液相色谱系统,包括全自动在线脱气系统,全自动进样系统Prominence SIL-20A。
1.2药品与试剂
10批次中药膏方的样品来自南京中山制药有限公司(通过以下方法制备得到的:取炙甘草 30g、淮小麦180g、大枣150g、茯苓120g、桂圆肉75g、肉桂15g,加10倍量的水,先浸泡2 小时,然后煎煮提取3次,每次1小时,合并三次煎煮液,浓缩,加入阿胶黄酒溶液进一步浓缩到密度60℃为1.15-1.20之间,灌装,既得;所述的阿胶黄酒溶液是由阿胶75g,加黄酒150ml 炖化得到)。甘草苷和甘草酸铵对照品购自中国药品生物制品检定所;磷酸(分析纯);乙腈(色谱纯);水(超纯水)。
实施例1
一种中药膏方的指纹图谱检测方法,包括以下步骤:
步骤1、中药膏方供试品溶液的制备:
取10批次的中药膏方,各精密称定4g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得供试品溶液。
步骤2、混合对照品溶液的制备:
精密取甘草苷、甘草酸铵对照品,置于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成浓度分别为57.49μg/mL的甘草苷、80.64μg/mL的甘草酸铵的混合对照品溶液。
步骤3、原料药材供试品溶液的制备:
取中药膏方原料药材淮小麦、大枣、茯苓、桂圆肉、阿胶粉末各2g,炙甘草、肉桂粉末各0.5g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得原料药材供试品溶液。
步骤4,分别精密吸取步骤1的中药膏方供试品溶液、步骤3原料药材供试品溶液和步骤2 混合对照品溶液,注入高效液相色谱仪,记录色谱图;如图1~图6。
液相色谱条件为:色谱柱:YMC-Pack ODS-A,流动相:乙腈和0.1%磷酸水,紫外检测器,检测波长:254nm,柱温35℃,流速1.0mL/min,进样体积:10μL,梯度洗脱程序如下表:
程序 | 时间/min | 乙腈体积/% | 水/% |
1 | 0.01 | 2 | 98 |
2 | 10.00 | 5 | 95 |
3 | 15.00 | 5 | 95 |
4 | 35.00 | 25 | 75 |
5 | 40.00 | 25 | 75 |
6 | 45.00 | 30 | 70 |
7 | 50.00 | 30 | 70 |
6 | 85.00 | 70 | 30 |
步骤5,将步骤4中获得的中药膏方供试品溶液的指纹图谱导出,确定共有峰如图1;记录各共有峰的保留时间和相对峰面积;并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
指纹谱图中共有峰16个,其中8号峰为甘草苷,15号峰为甘草酸铵;其中炙甘草含有峰为8、9、10、12、13、14、15、16号峰;淮小麦包含有1、2、3、7号峰;肉桂含2、3、11号峰;阿胶含有6号峰;大枣含有4、5号峰;茯苓含有1、2号峰;桂圆肉含有1、2、4、7号峰。
同时分析计算10批中药膏方的共有色谱峰之间的相似性,说明该方法建立的指纹图谱能够很好的检测中药膏方的质量,结果如表1。
表1各批次样品与共有模式间的相似度
实施例2指纹图谱检测的方法学研究:
1、方法学考察
1.1精密度考察
取中药膏方供试品,按照上述实施例1的供试品制备方法,制备得到供试品溶液,连续进样6次,每次进样量10μL,按上述实施例1色谱条件检测,测定其HPLC色谱图,对色谱图中 16个共有指纹峰进行考察,结果表明,共有指纹峰的保留时间RSD均小于0.5%,共有峰峰面积RSD均小于1.9%,说明仪器精密度较好。
1.2稳定性考察
取中药膏方供试品,按照上述实施例1的供试品制备方法,制备得到供试品溶液,按上述实施例1中的色谱条件分别于0,2,4,8,12,24h进样,记录色谱图,对色谱图中16个共有指纹峰进行考察,结果表明,共有指纹峰的保留时间RSD均小于1.8%,共有峰峰面积RSD均小于2.1%,说明供试品溶液在24h内稳定性较好。
1.3重复性考察
取中药膏方5份,按照上述实施例1供试品制备方法制备供试品溶液,分别测定,记录色谱图,对色谱图中16个共有指纹峰进行考察,结果表明,共有指纹峰的保留时间RSD均小于1.54%,共有峰峰面积RSD均小于2.7%,说明该方法重复性良好。
以上实验结果表明,本发明提供的中药膏方指纹图谱检测方法,稳定性好,精密度高,重复性好,能全面客观评价中药膏方的质量,为保证临床疗效具有重要的意义。
以上实施例仅为本发明的示例性实施例,不用于限制本发明,本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内,对本发明做出各种修改或等同替换,这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种中药膏方的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、中药膏方供试品溶液的制备:
取不同批次的中药膏方,分别精密称取,置量瓶中,加甲醇,超声提取,定容,过微孔滤膜,得供试品溶液;
步骤2、混合对照品溶液的制备:
精密称定甘草苷、甘草酸铵对照品,置于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成混合对照品溶液;
步骤3、原料药材供试品溶液的制备:
取中药膏方原料药材淮小麦、大枣、茯苓、桂圆肉、阿胶粉末各2g,炙甘草、肉桂粉末各0.5g,分别精密称取,置量瓶中,加甲醇,超声提取,定容,过微孔滤膜,得各原料药材供试品溶液;
步骤4,分别精密吸取步骤1的中药膏方供试品溶液、步骤3原料药材供试品溶液和步骤2混合对照品溶液,注入高效液相色谱仪,记录色谱图;
步骤5,将步骤4中获得的中药膏方供试品溶液的指纹图谱导出,确定共有峰;记录各共有峰的保留时间和相对峰面积;并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分;
所述的步骤4中,液相色谱条件为:色谱柱:YMC-Pack ODS-A,流动相:
乙腈和0.1%磷酸水,紫外检测器,检测波长:254nm,柱温35℃,流速
1.0mL/min,进样体积:10μL,梯度洗脱程序如下表:
;
所述的中药膏方是通过以下方法制备得到的:取炙甘草30g、淮小麦180g、大枣150g、茯苓120g、桂圆肉75g、肉桂15g,加10倍量的水,先浸泡2小时,然后煎煮3次,合并三次煎煮液,浓缩,加入阿胶黄酒溶液进一步浓缩到密度60℃为1.15-1.20之间,灌装,既得;所述的阿胶黄酒溶液是由阿胶75g,加黄酒150ml炖化得到。
2.根据权利要求1所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,其特征在于,步骤1中药膏方供试品溶液制备方法为:取不同批次的中药膏方,精密称定4g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,其特征在于,步骤2混合对照品溶液的制备:取精甘草苷、甘草酸铵对照品,置于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成浓度分别为57.49μg/mL的甘草苷、80.64μg/mL的甘草酸铵的混合对照品溶液。
4.根据权利要求1所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,其特征在于,步骤3原料药材供试品溶液的制备:取中药膏方原料药材淮小麦、大枣、茯苓、桂圆肉、阿胶粉末各2g,炙甘草、肉桂粉末各0.5g,置25mL量瓶中,加甲醇,超声提取30min,定容至25mL,过0.45μm微孔滤膜,得原料药材供试品溶液。
5.根据权利要求1所述的中药膏方的指纹图谱检测方法,其特征在于,指纹谱图中共有峰16个,其中8号峰为甘草苷,15号峰为甘草酸铵;其中炙甘草含有峰为8、9、10、12、13、14、15、16号峰;淮小麦包含有1、2、3、7号峰;肉桂含2、3、11号峰;阿胶含有6号峰;大枣含有4、5号峰;茯苓含有1、2号峰;桂圆肉含有1、2、4、7号峰。
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忘忧安神方标准煎液HPLC指纹图谱建立及4种成分含量测定;汪莉 等;《中国现代中药》;第23卷(第3期);536-541 * |
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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