CN109668970B - 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109668970B
CN109668970B CN201710954961.XA CN201710954961A CN109668970B CN 109668970 B CN109668970 B CN 109668970B CN 201710954961 A CN201710954961 A CN 201710954961A CN 109668970 B CN109668970 B CN 109668970B
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
detection method
acid
solution
chinese medicine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710954961.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109668970A (zh
Inventor
王伽伯
肖小河
张海珠
牛明
马永刚
王宏涛
田书彦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201710954961.XA priority Critical patent/CN109668970B/zh
Priority to PCT/CN2018/110123 priority patent/WO2019072247A1/zh
Publication of CN109668970A publication Critical patent/CN109668970A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109668970B publication Critical patent/CN109668970B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes

Landscapes

  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提供一种中药组合物的检测方法，采用超高效液相色谱法对中药组合物中的绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷7种成分进行检测，能更全面的表征中药组合物的质量。

Description

一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药组合物的检测方法，属于中医药领域。
背景技术
中药复方制剂的质量控制手段主要是对制剂中个别原药材的显微鉴别、检查、含量测定等进行定性和定量分析。然而中药复方制剂往往是包括多味药材，有的制剂中甚至包括动物药或矿物药，其所含的化学成分的复杂程度远远超过了单味药材。实际上，越来越多的药学研究者认识到利用显微鉴别、薄层色谱鉴别和单一指标性成分的定量分析远远不能全面有效的反映中药复方制剂质量一致性和有效性。从2015年版《中国药典》一部开始，对于中药复方制剂的质量控制标准已经有了一定的提高。例如，对于同一制剂具有不同质控标准统一了质量控制标准；对于一些无薄层鉴别项(或者薄层鉴别较少、已薄层鉴别项不是针对君药)的中药复方制剂增加了薄层鉴别指标；由原来的单一指标性成分含量测定增加为关联药效的多个指标性成分的含量测定；薄层扫描法用于含量测定的制剂品种有所减少；加强了气相色谱法应用于含挥发性化学成分的中药复方制剂等等；这些质量控制方法的改进无疑体现了中药复方制剂的质量标准和质量控制力在不断的提高。但是中药复方制剂的质量评价与控制问题仍然是困扰中医药发展和国际化的一个瓶颈，开展中药复方制剂新的质量评控模式和方法研究迫在眉睫。
本发明中药组合物汇聚三朝名方，由连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天、薄荷脑、甘草13味中药组方而成，制备工艺比较复杂，入药形式包括水煎液、醇提液和挥发油。在2015版《中国药典》收载的质量标准中仅仅要求对连翘苷进行含量测定，作为一个中药大复方制剂，这显然是不够的。如何能够更好的表征不同批次间中药组合物胶囊质量的差异性、通过多组分化学快速分析来评价中药组合物质量，是目前急需解决的问题。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种中药组合物的检测方法，针对其中的水溶性成分和脂溶性成分，采用超高效液相色谱法(UPLC)定量测定制剂中的主要代表性化学成分，通过多组分化学快速分析来评价制剂的质量。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种中药组合物的检测方法，所述方法包括如下步骤：
步骤a，供试品溶液的制备：取中药组合物胶囊剂内容物，加入有机溶剂提取，即得供试品溶液；
步骤b，对照品溶液的制备：取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷，加入有机溶剂溶解，即得对照品溶液；
步骤c，检测：采用超高效液相色谱法，以甲醇(A)-磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱。
所述步骤C中梯度洗脱程序为：
时间/min A/％
0.00 12～16
8.00 18～20
15.00 22～25
20.00 28～30
25.00 32～35
30.00 38～43
35.00 48～52
40.00 55～60。
优选的，所述梯度洗脱程序为：
Figure BDA0001433748830000021
Figure BDA0001433748830000031
其中，所述磷酸水溶液浓度为0.1％～1％；进一步优选为0.1％～0.5；更进一步优选为0.1％。
在具体实施方式中，步骤a所述有机溶剂选择甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷中的任意一种或几种，优选为60％的甲醇溶液；所述提取方法包括超声提取或回流提取；所述供试品溶液浓度为10～20mg/mL，优选为14mg/mL。
在具体实施方式中，步骤b所述有机溶剂选择甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷中的任意一种或几种，优选为甲醇溶液。所述对照品溶液中绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷的浓度分别为55～65μg/mL、70～80μg/mL、65～72μg/mL、120～130μg/mL、60～70μg/mL、75～85μg/mL、48～58μg/mL；优选的，所述对照品溶液中绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷的浓度分别为60μg/mL、75μg/mL、68μg/mL、125μg/mL、64μg/mL、80μg/mL、53μg/mL。
在具体实施方式中，所述检测波长为200～250nm，优选为210nm；进样量为1.0～2.0μL；流速为0.10～0.50mL/min；柱温为20～40℃。
本发明所述中药组合物的原料组成为：连翘200～300重量份、金银花200～300重量份、炙麻黄50～100重量份、炒苦杏仁50～100重量份、石膏200～300重量份、板蓝根200～300重量份、绵马贯众200～300重量份、鱼腥草200～300重量份、广藿香50～100重量份、大黄20～70重量份、红景天50～100重量份、薄荷脑5～10重量份、甘草50～100重量份。
优选的，所述中药组合物的原料组成为：连翘255重量份、金银花255重量份、炙麻黄85重量份、炒苦杏仁85重量份、石膏255重量份、板蓝根255重量份、绵马贯众255重量份、鱼腥草255重量份、广藿香85重量份、大黄51重量份、红景天85重量份、薄荷脑7.5重量份、甘草85重量份。
所述中药组合物胶囊剂的制备方法：以上十三味，广藿香加水蒸馏提取物挥发油，收集挥发油，水提取液滤过，备用；连翘、炙麻黄、鱼腥草、大黄用70％乙醇提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液滤过，合并，回收乙醇，备用；金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天加水煎煮至沸，加入炒苦杏仁，煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入广藿香提油后备用的水溶液，浓缩至相对浓度为1.10～1.15(60℃)，加乙醇使含醇量达70％，在4℃冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，与上述连翘等四味的备用醇提取液合并，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，喷雾干燥，与适量淀粉混匀，制成颗粒，干燥，过筛，筛出适量细粉，将薄荷脑、广藿香挥发油用适量乙醇溶解，喷入细粉中，混匀，与上述颗粒混匀，密闭30分钟，装入胶囊，制成1000粒，即得。
本发明流动相中所述百分比为体积百分比，所述磷酸水溶液百分比为体积百分比。
本发明待测成分结构式如表1所示：
表1待测成分结构式
Figure BDA0001433748830000041
Figure BDA0001433748830000051
附图说明
图1为供试品溶液按色谱条件①的UPLC色谱图；
图2为供试品溶液按色谱条件②的UPLC色谱图；
图3为供试品溶液按色谱条件③的UPLC色谱图；
图4为供试品溶液按色谱条件④的UPLC色谱图；
图5为混合对照品溶液按色谱条件④的UPLC色谱图；
图1-5中，1号峰为绿原酸；2号峰为咖啡酸；3号峰为连翘酯苷A；4号峰为异绿原酸B；5号峰为芦丁；6号峰为异绿原酸C；7号峰为连翘苷。
具体实施方式
实施例1
组方：连翘255g、金银花255g、炙麻黄85g、炒苦杏仁85g、石膏255g、板蓝根255g、绵马贯众255g、鱼腥草255g、广藿香85g、大黄51g、红景天85g、薄荷脑7.5g、甘草85g；
制备方法：以上十三味，广藿香加水蒸馏提取物挥发油，收集挥发油，水提取液滤过，备用；连翘、炙麻黄、鱼腥草、大黄用70％乙醇提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液滤过，合并，回收乙醇，备用；金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天加水煎煮至沸，加入炒苦杏仁，煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入广藿香提油后备用的水溶液，浓缩至相对浓度为1.10～1.15(60℃)，加乙醇使含醇量达70％，在4℃冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，与上述连翘等四味的备用醇提取液合并，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，喷雾干燥，与适量淀粉混匀，制成颗粒，干燥，过筛，筛出适量细粉，将薄荷脑、广藿香挥发油用适量乙醇溶解，喷入细粉中，混匀，与上述颗粒混匀，密闭30分钟，装入胶囊，制成1000粒，即得。
检测方法：
1实验材料
1.1实验仪器
Acquity超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；超声仪(南京新辰生物科技有限公司)；Milli-Q超纯水制备系统(美国Synergy公司)；微量移液器(德国Eppendorf公司)。
1.2药物与试剂
中药组合物胶囊40个批次(编号S01-S40)由石家庄以岭药业提供；中药组合物胶囊内容物分别于高温(60℃)、高湿(RH95％)、光照(4500lx)条件下放置20d的样品A1、A2、A3(编号S41-S43)；
绿原酸(批号151217，供含量测定用以99.68％计)、咖啡酸(批号151103，供含量测定用以99.40％计)、异绿原酸B(批号15060708，供含量测定用以98.82％计)、异绿原酸C(批号151028，供含量测定用以98.70％计)、连翘苷(批号15102801，供含量测定用以98.54％计)、连翘酯苷A(批号16082602，供含量测定用以99.17％计)、芦丁(批号151023，供含量测定用以98.94％计)由成都普菲德生物科技有限公司提供；色谱级甲醇、乙腈，色谱级磷酸(85％w/w)购于美国Thermo公司。
2实验方法
2.1色谱条件考察
①色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：5～10％A；8.01–15.00分钟：10～20％A；15.01–20.00分钟：20～25％A；20.01–25.00分钟：25～28％A；25.01–30.00分钟：28～30％A；30.01–35.00分钟：30～45％A；35.01–40.00分钟：45～50％A；检测波长210nm，进样量为3.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
②色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：5～12％A；8.01–15.00分钟：12～22％A；15.01–20.00分钟：22～28％A；20.01–25.00分钟：28～30％A；25.01–30.00分钟：30～48％A；30.01–35.00分钟：48～52％A；35.01–40.00分钟：52～58％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
③色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：10～20％A；8.01–15.00分钟：20～23％A；15.01–20.00分钟：23～30％A；20.01–25.00分钟：30～33％A；25.01–30.00分钟：33～39％A；30.01–35.00分钟：39～48％A；35.01–40.00分钟：48～60％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
④色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：15～20％A；8.01–15.00分钟：20～24％A；15.01–20.00分钟：24～30％A；20.01–25.00分钟：30～34％A；25.01–30.00分钟：34～40％A；30.01–35.00分钟：40～50％A；35.01–40.00分钟：50～60％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
2.2药液的配制
精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷对照品适量，精密称定，置于25mL棕色容量瓶中，加色谱级甲醇制成每1mL含60μg、75μg、68μg、125μg、64μg、80μg、53μg的溶液，即得对照品溶液。
取中药组合物胶囊内容物，研钵研为细粉，约取0.35g，精密称定，置于25mL容量瓶中，精密加入60％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理40分钟(功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
3实验结果
3.1色谱条件考察结果
精密吸取供试品溶液2.0μL，注入超高效液相色谱仪，分别按照色谱条件①-④进行考察，记录色谱图，见图1-4。
结果表明，色谱条件①、②、③待测成分不能完全分离，色谱条件④7个成分的分离度、理论塔板数、拖尾因子均满足含量测定要求，系统适用性良好。因此选择色谱条件④为检测方法的色谱条件。
精密吸取对照品混合溶液2.0μL，注入超高效液相色谱仪，按照色谱条件④进行考察，记录色谱图，见图5。
3.2方法学考察
精密度考察取同一标准品溶液，连续进样6次，按色谱条件④进行检测，记录色谱峰面积。结果显示绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、芦丁、异绿原酸C和连翘苷等7个被测试物质的峰面积的RSD均小于5.0％，表明仪器的精密度良好。
线性关系考察精密吸取上述混合对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、3.0μL注入超高效液相色谱仪，按色谱条件④进行检测，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量(μg)为横坐标(X)，绘制标准曲线。结果相关性系数均大于0.999，表明绿原酸在0.024～0.1788μg、咖啡酸在0.0302～0.2268μg、连翘酯苷A在0.0317～0.2376μg、异绿原酸B在0.0504～0.378μg、芦丁在0.027～0.2028μg、异绿原酸C在0.0252～0.1896μg、连翘苷在0.021～0.1596μg范围内的线性关系较好。
稳定性考察取同一供试品溶液(S40)，分别于制备后0、3、6、12、24h内进样，按色谱条件④进行检测，记录各自色谱峰的峰面积，计算7个对照品色谱峰面积的RSD。结果显示，7个被测试物在24h内色谱峰面积的RSD分别为2.45％、3.08％、3.17％、1.89％、3.44％、4.02％和3.78％，表明在24小时内供试品溶液的稳定性良好。
重复性考察取同一批次(S40)的胶囊内容物0.35g，共6份，精密称定，按2.2方法制备供试品溶液，2.3方法进行测定并计算含量。结果6份供试品中7个被测试物质的含量平均值为绿原酸2.93mg/g、咖啡酸1.41mg/g、连翘酯苷A 2.17mg/g、异绿原酸B 6.66mg/g、芦丁1.08mg/g、异绿原酸C 1.31mg/g连翘苷2.37mg/g；表明方法的重复性良好。
准确性考察取同一批次已知含量的胶囊内容物0.16～0.18g，置于25mL棕色容量瓶中，分别加入计算的相同含量的标准品物质，按2.2方法制备供试品溶液，按色谱条件④进行检测，并计算回收率。结果表明除了咖啡酸(90.79％)和芦丁(88.91％)的回收率较差外，其余5个被测试物的回收率较好，表明方法的准确性较好。
3.3中药组合物胶囊中7个活性成分的含量测定
取不同批次的中药组合物胶囊，按2.2方法制备供试品溶液，按色谱条件④进行检测，并计算含量，结果见表1。
表1中药组合物胶囊中7个活性成分的含量测定结果
Figure BDA0001433748830000091
Figure BDA0001433748830000101
《中国药典》规定中药组合物胶囊含量测定合格标准为含连翘苷不得少于0.17mg/粒，以装量0.35g/粒计算，该品不得少于0.49mg/g，测定结果表明40批次中药组合物胶囊全部合格，破坏性样品A1、A2、A3连翘苷的含量也均合格。但各成分含量的变异较大，绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、芦丁、异绿原酸C、连翘苷含量的变异系数为26％、16％、30％、27％、35％、36％、28％。可见，仅以连翘苷一种成分作为质量评价指标是远远不够的。
实施例2中药组合物质量化学评价与生物评价相关性分析
本发明利用PCR技术对小鼠肺组织中IL-6和COX-2进行了测定，发现本发明组合物胶囊能显著降低病毒性肺炎模型小鼠肺组织中的IL-6和COX-2的表达，并呈现剂量依赖关系，因此将IL-6和COX-2作为本发明中药组合物胶囊剂质量生物评价的指标。
以中药组合物中7种化学成分(绿原酸、芦丁、连翘酯苷A、连翘酯苷、异绿原酸C、异绿原酸B、咖啡酸)含量指标为自变量，生物效价为应变量，对40批次中药组合物为统计分析样品，考察抑制COX-2生物效价、抑制巨噬细胞分泌IL-6生物效价与9种化学成分含量测定结果的相关性分析，采用多元统计SPSS统计软件计算。
结果见表2。
表2生物活性与化学成分含量的相关性分析
Figure BDA0001433748830000111
从抑制COX-2活性的抗炎生物效价来看，存在相关性的成分为绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C等酸类成分，且为正相关(p<0.05)，提示这3种成分的含量越高，其抑制COX-2酶活力的水平也有增高的趋势。因此，在化学成分指控时应考虑增加这类关联活性的指标成分的检测，在一定程度上提高中药组合物质量的一致性的评控能力。
从抑制巨噬细胞分泌IL-6活性的抗炎生物效价来看，存在相关性的成分为连翘苷，且为正相关(p<0.05)，提示连翘苷成分的含量越高，其抑制细胞分泌IL-6的水平也有增高的趋势。提示，连翘苷是发挥抗炎作用的有效成分，其含量对中药组合物质量具有一定的影响。
本发明检测方法相对于《药典》的方法增加了与生物活性相关性强的绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的成分指标，建立了对中药组合物中7种成分的检测方法，能更全面的表征中药组合物的质量。
实施例3
组方和制备方法同实施例1。
检测方法：色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：12～20％A；8.01–15.00分钟：20～22％A；15.01–20.00分钟：22～28％A；20.01–25.00分钟：28～35％A；25.01–30.00分钟：35～43％A；30.01–35.00分钟：43～50％A；35.01–40.00分钟：50～60％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷对照品适量，精密称定，置于25mL棕色容量瓶中，加色谱级甲醇制成每1mL含60μg、75μg、68μg、125μg、64μg、80μg、53μg的溶液，即得对照品溶液。
供试品溶液的制备：取中药组合物胶囊内容物，研钵研为细粉，约取0.35g，精密称定，置于25mL容量瓶中，精密加入60％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理40分钟(功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定：精密吸取供试品溶液和混合对照品混合溶液各2.0μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。
实施例4
组方和制备方法同实施例1。
检测方法：色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：16～18％A；8.01–15.00分钟：18～25％A；15.01–20.00分钟：25～28％A；20.01–25.00分钟：28～32％A；25.01–30.00分钟：32～42％A；30.01–35.00分钟：42～48％A；35.01–40.00分钟：48～58％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷对照品适量，精密称定，置于25mL棕色容量瓶中，加色谱级甲醇制成每1mL含60μg、75μg、68μg、125μg、64μg、80μg、53μg的溶液，即得对照品溶液。
供试品溶液的制备：取中药组合物胶囊内容物，研钵研为细粉，约取0.35g，精密称定，置于25mL容量瓶中，精密加入60％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理40分钟(功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定：精密吸取供试品溶液和混合对照品混合溶液各2.0μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。
实施例5
组方和制备方法同实施例1。
检测方法：色谱柱为Waters Acquity HSS T3柱(2.1×100mm,1.7μm)，流动相为甲醇(A)和0.1％(v/v)磷酸水溶液(B)的混合物，梯度洗脱程序为：0.00–8.00分钟：14～20％A；8.01–15.00分钟：20～25％A；15.01–20.00分钟：25～30％A；20.01–25.00分钟：30～35％A；25.01–30.00分钟：35～42％A；30.01–35.00分钟：42～51％A；35.01–40.00分钟：51～60％A；检测波长210nm，进样量为2.0μL，流速0.20mL/min，柱温30℃，柱平衡时间为7分钟。
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷对照品适量，精密称定，置于25mL棕色容量瓶中，加色谱级甲醇制成每1mL含60μg、75μg、68μg、125μg、64μg、80μg、53μg的溶液，即得对照品溶液。
供试品溶液的制备：取中药组合物胶囊内容物，研钵研为细粉，约取0.35g，精密称定，置于25mL容量瓶中，精密加入60％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理40分钟(功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定：精密吸取供试品溶液和混合对照品混合溶液各2.0μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。
以上实施例3-5检测结果7种成分的分离度、理论塔板数、拖尾因子均满足含量测定要求。

Claims (10)

1.一种中药组合物的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤a，供试品溶液的制备：取中药组合物胶囊剂内容物，加入有机溶剂提取，即得供试品溶液；
步骤b，对照品溶液的制备：取绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷，加入有机溶剂溶解，即得对照品溶液；
步骤c，检测：采用超高效液相色谱法，以甲醇(A)-0.1％～1％的磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱；洗脱程序为：
时间/min A/％ 0.00 12～16 8.00 18～20 15.00 22～25 20.00 28～30 25.00 32～35 30.00 38～43 35.00 48～52 40.00 55～60；
其中，步骤a和步骤b所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷中的任意一种或几种；
步骤c的超高效液相色谱检测条件为：色谱柱：Waters Acquity HSS T3柱，2.1×100mm,1.7μm；检测波长为200～250nm；进样量为1.0～2.0μL；流速为0.10～0.50mL/min；柱温为20～40℃；
其中，所述中药组合物的原料组成为：连翘200～300重量份、金银花200～300重量份、炙麻黄50～100重量份、炒苦杏仁50～100重量份、石膏200～300重量份、板蓝根200～300重量份、绵马贯众200～300重量份、鱼腥草200～300重量份、广藿香50～100重量份、大黄20～70重量份、红景天50～100重量份、薄荷脑5～10重量份、甘草50～100重量份。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的原料组成为：连翘255重量份、金银花255重量份、炙麻黄85重量份、炒苦杏仁85重量份、石膏255重量份、板蓝根255重量份、绵马贯众255重量份、鱼腥草255重量份、广藿香85重量份、大黄51重量份、红景天85重量份、薄荷脑7.5重量份、甘草85重量份。
3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
时间/min A/％ 0.00 15 8.00 20 15.00 24 20.00 30 25.00 34 30.00 40 35.00 50 40.00 60。
4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸水溶液浓度为0.1％～0.5％。
5.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤a所述有机溶剂为60％的甲醇溶液；所述提取方法包括超声提取或回流提取。
6.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤a供试品溶液浓度为10～20mg/mL。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤a供试品溶液浓度为14mg/mL。
8.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤b所述有机溶剂为甲醇溶液。
9.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤b所述对照品溶液中绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸C、连翘酯苷A和连翘苷的浓度分别为55～65μg/mL、70～80μg/mL、65～72μg/mL、120～130μg/mL、60～70μg/mL、75～85μg/mL、48～58μg/mL。
10.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述检测波长为210nm。
CN201710954961.XA 2017-10-13 2017-10-13 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法 Active CN109668970B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710954961.XA CN109668970B (zh) 2017-10-13 2017-10-13 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法
PCT/CN2018/110123 WO2019072247A1 (zh) 2017-10-13 2018-10-12 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710954961.XA CN109668970B (zh) 2017-10-13 2017-10-13 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109668970A CN109668970A (zh) 2019-04-23
CN109668970B true CN109668970B (zh) 2020-11-10

Family

ID=66100417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710954961.XA Active CN109668970B (zh) 2017-10-13 2017-10-13 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN109668970B (zh)
WO (1) WO2019072247A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110716001B (zh) * 2019-11-29 2020-07-07 山东汉方制药有限公司 一种复方黄柏液制剂的特征图谱检测方法
CN114184717B (zh) * 2021-11-29 2023-12-12 瑞普（天津）生物药业有限公司 一种基于谱效关系的兽用双黄连口服液质量检测方法
CN114990054B (zh) * 2022-07-22 2023-07-21 成都艾伟孚生物科技有限公司 一种辅助生殖用洗精受精液
CN115737570A (zh) * 2022-11-18 2023-03-07 南京中医药大学 降低中药提取液喷雾干燥颗粒吸湿性的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103308615A (zh) * 2013-05-30 2013-09-18 哈药集团中药二厂 一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法
CN104101657A (zh) * 2013-04-02 2014-10-15 河北以岭医药研究院有限公司 中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法
CN104345111A (zh) * 2013-08-08 2015-02-11 河北以岭医药研究院有限公司 一种中药组合物制剂中多种活性成分含量的测定方法
CN106290599A (zh) * 2015-06-12 2017-01-04 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN107153098A (zh) * 2016-03-03 2017-09-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN107149623A (zh) * 2016-03-03 2017-09-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1194752C (zh) * 2003-07-01 2005-03-30 河北以岭医药研究院有限公司 一种抗病毒中药组合物及制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104101657A (zh) * 2013-04-02 2014-10-15 河北以岭医药研究院有限公司 中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法
CN103308615A (zh) * 2013-05-30 2013-09-18 哈药集团中药二厂 一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法
CN104345111A (zh) * 2013-08-08 2015-02-11 河北以岭医药研究院有限公司 一种中药组合物制剂中多种活性成分含量的测定方法
CN106290599A (zh) * 2015-06-12 2017-01-04 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN107153098A (zh) * 2016-03-03 2017-09-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN107149623A (zh) * 2016-03-03 2017-09-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019072247A1 (zh) 2019-04-18
CN109668970A (zh) 2019-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107153098B (zh) 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN109668970B (zh) 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法
WO2023024322A1 (zh) 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN105842373B (zh) 一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法
CN109212083A (zh) 复方鸡内金咀嚼片的质量检测方法
CN107402265B (zh) 康媛颗粒指纹图谱的检测方法
CN108459128B (zh) 一种当归四逆汤组合物的质量控制方法
CN113063885B (zh) 用于制备保元汤的组合物，保元汤制品，及其指纹图谱测定和质量检测方法
CN108459090B (zh) 济川煎组合物的质量控制方法
CN102262132B (zh) 一种中药杜仲制剂的质量检测方法
CN100437112C (zh) 一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法
CN101502549B (zh) 一种三七总皂苷胶囊及其制备方法和含量测定方法
CN102552616A (zh) 一种舒筋活血片的检测方法
CN102293827A (zh) 一种樟树根及含有樟树根的制剂的质量检测方法
CN1939472B (zh) 一种治疗糖尿病的复方制剂的检测方法
CN114965802B (zh) 一种更年安片的质量控制方法
CN113820422B (zh) 一种白芍总苷指纹图谱检测方法
CN110960617A (zh) 一种用于关节保护的药用组合物的制备方法及其质量分析方法
CN101912522B (zh) 六味生脉片剂的检测方法
CN113759011B (zh) 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法
CN108226359A (zh) 测定逍遥丸中成分含量的方法
CN111562324B (zh) 一种消乳散结胶囊多指标成分含量检测方法
CN105445385A (zh) 一种忍冬藤配方颗粒的质量检测方法
CN103575823A (zh) 一种糖敏灵制剂中8种化学成分的检测方法
CN103604898A (zh) 益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant