CN103308615A - 一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,它涉及一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法。本发明要解决现有注射用双黄连含量测定方法,样品处理复杂,双黄连的检测费时、占用大量的人员和检验设备,检验周期长的问题。本发明提供一种注射用双黄连中同时测定连翘苷、连翘酯苷A、咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、黄芩素、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷等10种以上成分的含量,并同时监视指纹图谱的检测方法,该方法仅采用一种检测系统,一次性完成上述检测,能够更加准确、稳定、全面、快捷地控制注射用双黄连的质量。

Description

一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法
技术领域
本发明涉及双黄连中多种成分含量测定方法。
背景技术
注射用双黄连,是由金银花、黄芩、连翘三味药材的提取物制成的天然药物注射剂。其主要成分为连翘苷(phillyrin)、芦丁(rutin)、黄芩苷(baicalin)、千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷(OroxylinA-7-O-gluacid)、汉黄芩苷(Wogonoside)、黄芩素(baicalein)、汉黄芩素(wogonin)、连翘酯苷A(Forsythoside A)、新绿原酸(5-Caffeoylquinic acid)、绿原酸(3-Caffeoylquinic acid)、隐绿原酸(4-Caffeoylquinic acid)、异绿原酸A(3,5-Dicaffeoylquinicacid)、异绿原酸B(3,4-Dicaffeoylquinic acid)、异绿原酸C(4,5-Dicaffeoylquinic acid)等。具有抗病毒及抗菌双重治疗作用,对于流感等20余种常见病毒有明显作用,其抗菌作用有别于其他常用的抗感染药物,尤其是对抗生素耐药性细菌感染的治疗更具优势,从临床的总体效果来判断是安全、有效的、不良反应少。其抗菌作用有别于其他常用的抗感染药物,注射用双黄连这一结合了中国传统文化与现代技术的产物,目前已成为全国临床治疗肺炎、上呼吸道感染、急性支气管炎等多种疾病的常用药物之一。
注射用双黄连作为中药注射剂质量控制的典范被载入中国药典,并且较科学的对分别来源于连翘的连翘苷、金银花的绿原酸以及黄芩中的黄芩苷分别进行含量控制,并对这三种成分的含量规定上下限度,对保证药品质量和临床疗效的稳定具有重要意义。但注射用双黄连上市近20年时间,这些控制手段也是在不同时期逐步完善的,这些含量测定包括最后增加的指纹图谱,分别采用独立的含量测定方法,采用不同的流动相系统;不同的供试品制备方法,不同的检测波长进行检测,三种成分含量测定加上指纹图谱检测,单针仪器仅样品检验运行时间接近2小时(见附图1-4),有的检验条件有一定弊端(见附图5),同时在药品制备过程中的原料、中间体、半成品、成品的控制等,使得检验人员、设备的占用量巨大,检验试剂使用量巨大,同时产生的检验废液及废液处理费用较高。
目前,有关双黄连含量测定的方法,能将绿原酸、黄芩苷、连翘苷三者同时测定,均存在含量较小的连翘苷与含量较大的黄芩苷同时检测,要较稳定地检测连翘苷必须采用较大浓度的供试品,通用色谱柱分离时将较长等问题,例如孙永慧等在《中成药》(2010.32:65-68)中公开的文章《HPLC同时测定双黄连粉针剂中5种成分的含量》所提供的方法,可对上述部分部分问题进行克服,但该方法仍有部分问题,如样品浓度较大(4mg/g),导致标准品黄芩苷样因浓度较高有溶解困难和析出现象;另外样品采用水溶液制备导致样品中的部分成分在放置一段时间后(10小时以上,尤其是夏天)有衰减现象;甲醇水系统梯度洗脱采用低波长检测(如208nm)基线有漂移现象;每一次进样运行时间为1小时,占用设备和检验周期仍然较长。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有注射用双黄连质量检验过程中存在一个样品需要采用不同的方法处理,用不同的条件检测,部分样品处理方法复杂存在弊端,不能充分体现指纹的完整性,检测成本高、产生的废液多,占用大量的人员、设备,检验周期较长的问题,而提供了一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法。
本发明的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,是按照以下步骤进行的:
一、黄芩苷对照品的制备:取黄芩苷对照品,加入缓冲盐溶液制成浓度为0.5mg/mL的溶液,作为黄芩苷对照品;
二、混合对照品溶液的制备:称取对照品,加入缓冲盐溶液制成每1mL含10μg的新绿原酸、40μg的绿原酸、8.0μg的隐绿原酸、4.0μg的异绿原酸A、10.0μg的异绿原酸C、8.0μg的连翘苷、20μg的千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、3.0μg的汉黄芩苷、2.0μg的黄芩素和0.6μg的汉黄芩素的溶液,作为混合对照品;
三、供试品溶液的制备:取中药制剂注射用双黄连供试品,加入缓冲盐溶液制成浓度为2mg/mL的溶液,作为供试品;
四、测定条件:采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法进行洗脱,采用多波长同时监视或随时间变更波长进行监测;采用HPLC和UHPLC兼容的快速分析柱。
本发明包含以下有益效果:
本发明通过在注射用双黄连检测过程中对双黄连的连翘苷、连翘酯苷A、咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、黄芩素、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷等多种成分同时测定,使用现有设备,同一种程序条件下将指纹图谱和多种含量测定成分一次性检测完成;采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法,采用多波长同时监视或随时间变更波长监视,使常规多种色谱条件下实现的效果,现在一次性实现;采用简单的缓冲盐溶液直接溶解对照品和供试品溶液,成功地解决黄芩苷对照品高浓度情况下的析出问题,也解决了供试品溶液长期室温放置的某些成分衰减问题;将连翘苷的最大吸收峰波长208nm作为检测波长,使其在较低浓度下具有较大的吸收响应值,可使样品浓度降低,将黄芩苷吸收峰谷波长350nm作为作为检测波长,并解决指纹谱不体现连翘苷和黄芩苷峰面积过大问题;采用乙腈水系统梯度洗脱解决低波长下基线漂移现象;采用Agilent新型的高效、高分离度低压的Poroshell色谱柱,该柱能在普通HPLC和UHPLC设备上兼容使用,使每一次进样运行时间减少为30分钟以下,大大缩短了检验周期。
附图说明
图1为注射用双黄连现行标准指纹图谱HPLC图谱;
图2为注射用双黄连现行标准黄芩苷含量测定HPLC图谱;
图3为注射用双黄连现行标准连翘苷含量测定HPLC图谱;
图4为注射用双黄连现行标准绿原酸含量测定HPLC图谱;
图5为注射用双黄连现行标准绿原酸含量多针后测定的HPLC图谱;
图6为实施例1中对照品溶液的HPLC图谱;
图7为实施例1中注射用双黄连供试品溶液的HPLC图谱;
图8为实施例2中对照品溶液的HPLC图谱;
图9为实施例2中注射用双黄连供试品溶液的HPLC图谱;
图10为实施例3中对照品溶液在324nm的HPLC图谱;
图11为实施例3中对照品溶液在350nm的HPLC图谱;
图12为实施例3中对照品溶液在230nm的HPLC图谱;
图13为实施例3中供试品溶液在324nm的HPLC图谱;
图14为实施例3中供试品溶液在350nm的HPLC图谱;
图15为实施例3中供试品溶液在230nm的HPLC图谱。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,是按照以下步骤进行的:
一、黄芩苷对照品的制备:取黄芩苷对照品,加入缓冲盐溶液制成浓度为0.5mg/mL的溶液,作为黄芩苷对照品;
二、混合对照品溶液的制备:称取对照品,加入缓冲盐溶液制成每1mL含10μg的新绿原酸、40μg的绿原酸、8.0μg的隐绿原酸、4.0μg的异绿原酸A、10.0μg的异绿原酸C、8.0μg的连翘苷、20μg的千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、3.0μg的汉黄芩苷、2.0μg的黄芩素和0.6μg的汉黄芩素的溶液,作为混合对照品;
三、供试品溶液的制备:取中药制剂注射用双黄连供试品,加入缓冲盐溶液制成浓度为2mg/mL的溶液,作为供试品;
四、测定条件:采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法进行洗脱,采用多波长同时监视或随时间变更波长进行监测;采用HPLC和UHPLC兼容的快速分析柱。
本实施方式通过在注射用双黄连检测过程中对双黄连的连翘苷、连翘酯苷A、咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、黄芩素、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷等多种成分同时测定,使用现有设备,同一种程序条件下将指纹图谱和多种含量测定成分一次性检测完成;采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法,采用多波长同时监视或随时间变更波长监视,使常规多种色谱条件下实现的效果,现在一次性实现;采用简单的缓冲盐溶液直接溶解对照品和供试品溶液,成功地解决黄芩苷对照品高浓度情况下的析出问题,也解决了供试品溶液长期室温放置的某些成分衰减问题;将连翘苷的最大吸收峰波长208nm作为检测波长,使其在较低浓度下具有较大的吸收响应值,可使样品浓度降低,将黄芩苷吸收峰谷波长350nm作为作为检测波长,并解决指纹谱不体现连翘苷和黄芩苷峰面积过大问题;采用乙腈水系统梯度洗脱解决低波长下基线漂移现象;采用Agilent新型的高效、高分离度低压的Poroshell色谱柱,该柱能在普通HPLC和UHPLC设备上兼容使用,使每一次进样运行时间减少为30分钟以下,大大缩短了检验周期。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一不同的是:所述的多波长同时监视或随时间变更波长监视,是指中药制剂注射用双黄连供试品中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、千层纸素-7-O葡萄醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素采用324nm检测;木犀草苷、芦丁采用350nm检测、连翘苷采用208nm或230nm检测;黄芩苷采用240nm或350nm检测。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一或二不同的是:所述的缓冲盐溶液为pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液、pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液混合液或醋酸-醋酸钠缓冲液混合液;其中,所述的磷酸盐缓冲液混合液是由pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液加入到甲醇或乙腈中,制成体积百分含量为5~50%的混合液(所述的体积百分含量是指磷酸盐缓冲液占混合液的体积);所述的醋酸-醋酸钠缓冲液混合液是由pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液加入到甲醇或乙腈中,制成体积百分含量为5~50%的混合液(所述的体积百分含量是指醋酸-醋酸钠缓冲液占混合液的体积)。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是:所述的pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液是采用质量百分含量为10%的氢氧化钠溶液将0.1M的磷酸二氢钠溶液调pH至5.0~6.0配制而成。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是:所述的pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液是将18g醋酸钠与9.8mL冰醋酸,加水稀释至1000mL制得。其它与具体实施方式一至三之一相同。
通过以下实例验证本发明的有益效果:
实例1
实施方法
依据高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)进行测定。
1、色谱条件与系统适用性实验
Agilent1200系列高效液相色谱仪,配备自动进样器,四元泵,VWD可变波长检测器,采用Poroshell120EC-C18色谱柱(3.0×50mm,2.7-Micron,P.N.699975-302);以0.2%磷酸为流动相A,乙腈为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长按表2中规定进行;柱温为30℃;流速为每分钟1mL。理论塔板数按绿原酸、连翘苷、黄芩苷峰计算均应不低于3000计。
表1流动相梯度洗脱表
Figure BDA00003277065300051
表2检测波长变更表
Figure BDA00003277065300052
2、对照品溶液的制备
黄芩苷对照品溶液的制备:取黄芩苷对照品适量,精密称定,加pH=6.0磷酸盐缓冲液制成每1mL含0.5mg的溶液,即得。
混合对照品溶液的制备:精密称取对照品适量,置同一棕色量瓶中,加pH=5.0磷酸盐缓冲液制成每1mL含新绿原酸10μg、绿原酸40μg、隐绿原酸8.0μg、异绿原酸A4.0μg、异绿原酸C10.0μg、连翘苷8.0μg、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷20μg、汉黄芩苷3.0μg、黄芩素2.0μg、汉黄芩素0.6μg溶液,即得。
3、供试品溶液的制备:取供试品20mg,精密称定,置10mL量瓶中,加pH5.0磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度,即得。
测定方法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。
本实例的检测结果见图6和图7所示,由图6和图7可知,图中对应保留时间处峰的成分名称:新绿原酸(1.734min)、绿原酸(3.746min)、隐绿原酸(5.077min)、异绿原酸A(10.093min)、异绿原酸C(12.081min)、黄芩苷(14.487min)、连翘苷(15.500min)、千层纸素苷(20.211min)、汉黄芩苷(20.661min)、黄芩素(21.319min)、汉黄芩素(21.529min)。
本实例完成了对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等11种成分含量同时测定。解决了甲醇水系统低波长检测基线漂移问题;解决了供试品水溶液成分不稳定的问题;采用低波长检测连翘苷,解决供试品溶液浓度较大的问题;采用缓冲溶液溶解对照品,解决了黄芩苷浓度高的情况下较难溶解和析出问题,该方法每个样品检测运行时间仅用25分钟,检测方法简单、快速、准确,经济实用。
实例2
实施方法
高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)进行测定。
Agilent1200系列高效液相色谱仪,配备自动进样器,四元泵,VWD可变波长检测器;采用Poroshell120EC-C18色谱柱(3.0×50mm,2.7-Micron,P.N.699975-302);以0.2%磷酸为流动相A,乙腈为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长按表2中规定进行;柱温为30℃;流速为每分钟1mL。理论塔板数按绿原酸、连翘苷、黄芩苷峰计算均应不低于3000。
表1流动相梯度洗脱表
Figure BDA00003277065300061
1、对照品溶液的制备
黄芩苷对照品浓溶液的制备:取黄芩苷对照品适量,精密称定,加pH=6.0磷酸盐缓冲液制成每1mL含0.5mg的溶液,即得。
混合对照品溶液的制备:精密量取对照品溶液适量,置同一量瓶中,加pH=5.0磷酸盐缓冲液制成每1mL含新绿原酸10μg、绿原酸40μg、咖啡酸1.0μg、隐绿原酸8.0μg、连翘酯苷A50μg、异绿原酸A4.0μg、异绿原酸C10.0μg、黄芩苷500μg、连翘苷8.0μg、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷20μg、汉黄芩苷3.0μg、黄芩素2.0μg、汉黄芩素0.6μg溶液的溶液,即得。
2、供试品溶液的制备:取注射用双黄连药粉20mg,精密称定,置10mL棕色量瓶中,加pH=5.0磷酸盐缓冲液溶解并稀释至10mL,即得。
测定方法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。
本实施的检测结果如图8和图9所示,由图8和图9可知,图中对应保留时间处峰的成分名称:新绿原酸(1.048min)、绿原酸(2.037min)、咖啡酸(2.369min)隐绿原酸(2.590min)、连翘酯苷A(10.191min)异绿原酸A(11.392min)、异绿原酸C(14.198min)、黄芩苷(16.102min)、连翘苷(17.148min)、千层纸素苷(19.576min)、汉黄芩苷(20.537min)、黄芩素(222.163min)、汉黄芩素(24.920min)。
本实例完成了对新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷、千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等13种成分含量同时测定。并能同时监视指纹图谱。解决了甲醇水系统低波长检测基线漂移问题;解决了供试品水溶液成分不稳定的问题;采用低波长检测连翘苷,解决供试品溶液浓度较大的问题;采用缓冲溶液溶解对照品,解决了黄芩苷浓度高的情况下较难溶解和析出问题,黄芩苷采用350nm监视,连翘苷采用208nm监视,解决了指纹图谱不体现连翘苷和黄芩苷单峰峰面积过大的问题,同时采用HPLC和UHPLC兼容的高效低压的快速分析柱,该方法每个样品检测运行时间仅用30分钟,检测方法简单、快速、准确,经济实用。
实例3
实施方法
高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)进行测定。
1、色谱条件与系统适用性实验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.2%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长324nm、350nm、230nm同时监视;柱温为30℃;流速为每分钟1mL。理论塔板数按绿原酸、连翘苷、黄芩苷峰计算均应不低于6000。
表3-1流动相梯度洗脱表
Figure BDA00003277065300081
2、对照品溶液的制备
对照品浓溶液的制备:取各对照品精密称定,制成每1mL含黄芩苷1.0mg的溶液,其它对照品制成每1mL含约0.5mg的溶液,置冰箱中冷藏备用;其中,配制溶剂为体积百分含量为50%甲醇缓冲溶液,所述的50%甲醇缓冲溶液是由pH=4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液与甲醇按体积比为50:50的比例混合而成。
混合对照品溶液的制备:精密量取各对照品浓溶液适量,置同一量瓶中,加体积百分含量为50%甲醇缓冲溶液[pH=4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液-甲醇(50:50)混合溶液]制成每1mL含如表格中含量的溶液,即得。
Figure BDA00003277065300082
Figure BDA00003277065300091
3、供试品溶液的制备:取供试品20mg,精密称定,置10mL量瓶中,加入溶剂至10mL,即得;其中,所述的溶剂为体积百分含量为50%甲醇缓冲溶液,所述的50%甲醇缓冲溶液是由pH=4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液与甲醇按体积比为50:50的比例混合而成。
4、测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
试验仪器与材料:
仪器:Agilent1100高效液相色谱仪,配备自动进样器,四元泵,DAD二极管阵列检测器,CBL-100柱温箱。
色谱柱:Waters5C18-MS-Ⅱ;填料
Figure BDA00003277065300092
250×4.6mm,5μm;
本实施检测结果如图10至图15所示,由图10至图15可知,图中对应保留时间处峰的成分名称:新绿原酸(6.033min)、绿原酸(9.235min)、隐绿原酸(10.004min)、咖啡酸(11.916min)、连翘酯苷A(20.138min)、异绿原酸A(21.391min)、木犀草苷(22.099min)、芦丁(23.380min)、异绿原酸C(24.792min)、连翘苷(26.372min)、黄芩苷(28.499min)、千层纸素苷(32.425min)、汉黄芩苷(32.997min)、黄芩素(37.162min)、汉黄芩素(41.265min)。
本实例采用多波长检测使得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸A、木犀草苷、芦丁、异绿原酸C、连翘苷、黄芩苷、千层纸素-7-O葡萄醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等15种成分能够一次全部检测,同时可以完成对指纹图谱的检测。该方法用于注射用双黄连的质量控制快捷、准确、经济实用。

Claims (5)

1.一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,其特征在于中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法是按照以下步骤进行的:
一、黄芩苷对照品的制备:取黄芩苷对照品,加入缓冲盐溶液制成浓度为0.5mg/mL的溶液,作为黄芩苷对照品;
二、混合对照品溶液的制备:称取对照品,加入缓冲盐溶液制成每1mL含10μg的新绿原酸、40μg的绿原酸、8.0μg的隐绿原酸、4.0μg的异绿原酸A、10.0μg的异绿原酸C、8.0μg的连翘苷、20μg的千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、3.0μg的汉黄芩苷、2.0μg的黄芩素和0.6μg的汉黄芩素的溶液,作为混合对照品;
三、供试品溶液的制备:取中药制剂注射用双黄连供试品,加入缓冲盐溶液制成浓度为2mg/mL的溶液,作为供试品;
四、测定条件:采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法进行洗脱,采用多波长同时监视或随时间变更波长进行监测;采用HPLC和UHPLC兼容的快速分析柱。
2.根据权利要求1所述的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,其特征在于所述的多波长同时监视或随时间变更波长监视,是指中药制剂注射用双黄连供试品中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、千层纸素-7-O葡萄醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素采用324nm检测;木犀草苷、芦丁采用350nm检测、连翘苷采用208nm或230nm检测;黄芩苷采用240nm或350nm检测。
3.根据权利要求1所述的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,其特征在于所述的缓冲盐溶液为pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液、pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液混合液或醋酸-醋酸钠缓冲液混合液;其中,所述的磷酸盐缓冲液混合液是由pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液加入到甲醇或乙腈中,制成体积百分含量为5~50%的混合液;所述的醋酸-醋酸钠缓冲液混合液是由pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液加入到甲醇或乙腈中,制成体积百分含量为5~50%的混合液。
4.根据权利要求3所述的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,其特征在于所述的pH=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液是采用质量百分含量为10%的氢氧化钠溶液将0.1M的磷酸二氢钠溶液调pH至5.0~6.0配制而成。
5.根据权利要求3所述的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法,其特征在于所述的pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液是将18g醋酸钠与9.8mL冰醋酸,加水稀释至1000mL制得。
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