CN103940749A - 一种灰毡毛忍冬花蕾药材储藏条件的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明开创性地提出了一种灰毡毛忍冬花蕾药材储藏条件的检测方法:分别在储藏前后测定灰毡毛忍冬花蕾的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量,结合储藏前后外观颜色变化的程度和六种成分含量变化的程度,来评价灰毡毛忍冬花蕾所经历的储藏条件是否适宜。该方法科学、简便,有利于药材质量的保障,填补了目前对于灰毡毛忍冬花蕾的储藏条件没有合适的检测评价方法的空白。
Description
技术领域
本发明涉及中药山银花的储藏,特别是对山银花中的储藏条件进行检测的方法。
背景技术
山银花是一种常用中药材,可用于清热解毒、凉散风热。《中国药典》中,山银花的来源为:忍冬科植物灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.)、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。
山银花具有质轻、易碎、易霉变和虫蛀等特点,如何进行储藏是十分重要的问题。现有技术中报道有多种方法。如:
CN201110175699.1公开了一种山银花茶的储藏方法:将山银花茶包装后,放入专用保质冷库中进行保质储藏,保质冷库的温度为0-5℃,湿度为40%-60%。
而对于与山银花基源相近的药材金银花(忍冬科植物园忍冬的干燥花蕾或带初开的花),其储藏方法也有一些报道,如:
CN201110041809.5公开了一种金银花的保藏方法:包装前,将金银花的含水量降低到8%-14%;包装材料的颜色选择黑色、藏青色或深绿色,材质选择铁质、纸质或塑料,厚度为0.10至1毫米;包装形式为密封;储藏养护方式为覆盖或包裹一种能够避光和/或恒温的材料。
CN201310030915.2公开了一种金银花储藏保鲜方法:将干燥后的金银花装入包装袋,通过管路向包装袋内分别充入氮气、二氧化碳或两种混合气体进行气调;气调处理后将包装袋封口,置于温度在0-6℃的冷库中储藏。
CN201110312031.7公开了一种金银花茶的储藏方法:金银花茶摊晾后放入药品级塑料袋,外套编织袋,放入专用温控储藏室进行保质储藏,储藏室温度18-26℃,湿度为45%-65%。
《中国药典》中则规定了山银花的储藏条件为“置阴凉干燥处、防潮,防蛀”。
然而,中国药典只记载“阴凉处”为不超过20℃,对于“阴凉干燥处”这一要求则较为模糊。而且,实践中受生产、经营、使用单位仓储条件、管理措施及人员素质等因素制约,对光照、温度、湿度、氧气、时间等储藏影响因素并未一一进行研究和控制;另外,储藏之后药材的质量到底如何,储藏条件是否恰当等等均没有进行研究。综上,目前的现状导致山银花的储藏条件差别较大,药材质量参差不齐。
因此,有必要对山银花的储藏条件进行研究,提供一种检测其储藏条件优劣的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测山银花储藏条件的方法,特别是以有效成分含量和药材颜色来评价药材储藏条件的适应性。
发明人对山银花储藏中的光照、温度、湿度、氧气、时间等条件进行了研究,发现这几个因素在整个储藏过程中所起的作用具有较大的差别。在研究过程中,发明人意外地发现:将山银花中几种特定有效成分的含量变化,与药材的颜色变化相结合,可以作为表征药材储藏条件的因素。发明人从而得到一种检测山银花储藏过程是否得当的方法。其技术方案是:
一种山银花储藏条件的检测方法,分别在储藏前和储藏后测定山银花的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量;再计算出在储藏前后所述山银花颜色变化的程度以及所述六种成分含量变化的程度,以此得出所述山银花所经历的储藏条件。
上述山银花储藏条件的检测方法,具体来说,包括以下步骤:
1)测定山银花的颜色,得到颜色值L、A和B;再测定山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量,对应得到六个含量值:C1、C2、C3、C4、C5和C6;
2)将1)中的山银花置于一定条件下储藏之后,测定其颜色,得到颜色值L’、A’和B’;再测定步骤1)中六种成分的含量,对应得到六个含量值:C1’、C2’、C3’、C4’、C5’和C6’;
3)根据公式ΔL=|1-L’/L|、ΔA=|1-A’/A|、ΔB=|1-B’/B|、ΔC1=1-C1’/C1、ΔC2=1-C2/C2’、ΔC3=1-C3’/C3、ΔC4=1-C4’/C4、ΔC5=1-C5’/C5和ΔC6=1-C6’/C6,计算得到ΔL、ΔA、ΔB、ΔC1、ΔC2、ΔC3、ΔC4、ΔC5和ΔC6九个评价值;
4)评价:若ΔC1>0.15或ΔC2>0.20,则所述山银花的储藏条件为不合格;若ΔC1≤0.15且ΔC2≤0.20,则所述山银花的储藏条件达到合格;若ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20且ΔC6≤0.15,则所述山银花的储藏条件达到良好;若ΔL≤0.2、ΔA≤0.2、ΔB≤0.2、ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20、ΔC3≤0.15、ΔC4≤0.20、ΔC5≤0.15且ΔC6≤0.1,则所述山银花的储藏条件达到优秀。
中国药典中对山银花质量的规定为:绿原酸含量不小于2%,灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量不小于5%。而现有技术中对山银花或金银花等忍冬属中药的储藏方法也有报道,如阴凉干燥处、防潮,防蛀等。本发明所提供的方法不是单纯地测定金银花中有效成分的含量,而是通过其含量的变化以及颜色的变化来表征储藏条件,进而评价储藏条件是否适宜。现有技术中,还未见到一种对山银花储藏条件进行检测和科学评价的方法。
上述山银花储藏条件的检测方法,所述不合格是指在非阴凉干燥处;所述合格是指在阴凉干燥处;所述良好是指在阴凉干燥处避光储藏少于两年;所述优秀是指在阴凉干燥处和真空包装中避光储藏少于一年。
其中,“达到”某级别是指属于该级别或该级别以上。如达到合格是指为合格或合格以上的级别(如合格、良好或优秀),达到良好是指为良好或良好以上的级别(如良好或优秀)。公式中计算ΔL、ΔA、ΔB所得的值均为绝对值。
发明人通过大量实验,摸索出了山银花的颜色变化以及其中特定成分的含量变化与储藏条件之间的关系:
绿原酸在储藏过程中的含量会降低,其对湿度尤其敏感,当绿原酸含量的变化值不大于15%时(即ΔC1≤0.15),可表明药材处于“干燥处”储藏。
咖啡酸在储藏过程中含量会升高,其对温度尤其敏感,当咖啡酸含量的变化值不大于20%时(即ΔC2≤0.20),可表明药材是处于“阴凉处”储藏。
因此,ΔC1和ΔC2两个值基本能够作为山银花储藏条件的评价值,当ΔC1≤0.15且ΔC2≤0.20时,可以认为药材所经历的储藏条件达到药典要求的合格,即“阴凉干燥处”,例如在温度20℃以下且相对湿度50%以下的环境中储藏;当ΔC1>0.15或ΔC2>0.20时,则储藏条件不符合药典的要求,为不合格。
川续断皂苷乙在储藏过程中含量会降低,其对储藏时间非常敏感,当川续断皂苷乙的含量变化值不大于15%时(ΔC6≤0.15),可以认为储藏的时间在两年之内;当川续断皂苷乙的含量变化值不大于10%时(ΔC6≤0.1),可以认为储藏的时间在一年之内。
因此,ΔC1、ΔC2、ΔC6三个值相结合可以评价出山银花的储藏条件达到良好。当ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20且ΔC6≤0.15时,可以认为药材所经历的储藏条件达到良好,即:在阴凉干燥处储藏小于两年,例如在温度20℃以下且相对湿度50%以下的环境中储藏少于两年。
3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙对空气中的氧气较为敏感。当3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化值不大于15%(ΔC3≤0.15),木犀草苷的含量变化值不大于20%(ΔC4≤0.20),以及灰毡毛忍冬皂苷乙的含量变化值不大于15%时(ΔC5≤0.15),可以认为药材与氧气基本没有接触,如处于真空包装中储藏。
山银花的外观颜色在储藏过程中会逐渐变深,如从绿色到黄色再到褐色,而光照是影响山银花颜色的决定因素,用分光测色计可以测定山银花颜色的L、A、B值,表征药材所经历的光照条件:在避光的情况下储藏,L、A、B三个值的变化的绝对值一般不超过20%(即ΔL≤0.2、ΔA≤0.2、ΔB≤0.2)。
因此,ΔL、ΔA、ΔB、ΔC1、ΔC2、ΔC3、ΔC4、ΔC5和ΔC6九个值相结合,可以反映出药材的储藏条件达到优秀,即:当ΔL≤0.2、ΔA≤0.2、ΔB≤0.2、ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20、ΔC3≤0.15、ΔC4≤0.20、ΔC5≤0.15且ΔC6≤0.1时,可以认为药材所经历的储藏条件为优秀,即:在阴凉干燥处和真空包装下避光储藏小于一年,例如在温度20℃以下且湿度50%以下的环境中,处于真空包装中避光储藏少于一年。
上述山银花储藏条件的检测方法,测定所述六种成分含量所用的方法为HPLC法。
具体来说,其中测定绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱,250×4.6mm,4μm;检测器均为紫外检测器;检测波长分别为:327nm、322nm、437nm和327nm(即绿原酸为327nm,咖啡酸为322nm,木犀草苷为437nm,3,5-二咖啡酰奎宁酸为327nm);流动相均为乙腈-0.4%磷酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。具体的梯度洗脱条件见表1:
表1:绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸的梯度洗脱条件
时间(min) | 流动相A(乙腈)% | 流动相B(0.4%磷酸水溶液)% |
0-10 | 14 | 86 |
10-20 | 14→20 | 86→80 |
20-30 | 20 | 80 |
30-40 | 20→70 | 80→30 |
40-45 | 70→90 | 30→10 |
45-60 | 90→14 | 10→86 |
其中,测定灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱,250×4.6mm,4μm;检测器为蒸发光散射检测器;流动相均为乙腈-0.4%乙酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。具体的梯度洗脱条件见表2:
表2:灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的梯度洗脱条件
时间(min) | 流动相A(乙腈)% | 流动相B(0.4%乙酸水溶液)% |
0-10 | 11.5→15 | 88.5→85 |
10-12 | 15→29 | 85→71 |
12-18 | 29→33 | 71→67 |
18-30 | 33→45 | 67→55 |
上述山银花储藏条件的检测方法,测定所述山银花的颜色所用的仪器为分光测色计。
本发明中的山银花,是指忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花,其中优选的是灰毡毛忍冬的干燥花蕾或初开的花。
本发明方法的技术效果包括:
1、开创性地提出了一种检测和评价山银花储藏条件的方法,填补了目前对于山银花储藏条件没有合适的评价方法的空白。
2、方法科学。将药材颜色变化与特定成分含量变化相结合,来对储藏条件进行综合评价,将“阴凉干燥处”等模糊的储藏条件数字化,更加科学,也更便于实际操作。
3、方法简便。使用现有技术中较为成熟的HPLC法测定特定有效成分含量,简便易用。
4、有利于保障山银花药材的质量。使用本发明提供的评价方法,能容易地得知药材的储藏条件是否适宜,对于保障山银花药材的质量具有积极的作用。
具体实施方式
下面以实施例的方式对本发明的技术方案进行具体说明,但实施例本身并不构成对本发明技术方案的限制。
说明:
1、实施例1、2、3和4中HPLC法色谱条件为:
色谱柱:为C18柱,250×4.6mm,4μm;
检测器:紫外检测器;检测波长:绿原酸为327nm,咖啡酸为322nm,木犀草苷为437nm,3,5-二咖啡酰奎宁酸为327nm;
流动相:乙腈-0.4%磷酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。具体的梯度洗脱条件如下:
2、实施例5和6中HPLC法色谱条件为:
色谱柱:为C18柱,250×4.6mm,4μm;
检测器:蒸发光散射检测器;
流动相:乙腈-0.4%乙酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。具体的梯度洗脱条件如下:
实施例1
自重庆中药材市场4个不同摊位上分别购买4份山银花药材,每份500g,经鉴定均为《中国药典》规定的正品山银花,标记为药材1、药材2、药材3和药材4;另取在重庆秀山县采集的灰毡毛忍冬花蕾1000g,蒸汽杀青后经高温烘干机干燥,标记为药材5。
将药材1~5每份取10g,作为样品1~5,用HPLC法分别测定其中绿原酸的含量C1。再上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中绿原酸的含量C1’,根据公式ΔC1=1-C1’/C1计算出评价值ΔC1,储藏条件和测定结果见表3:
表3不同湿度下山银花中绿原酸的含量变化
其中,样品1在储藏完毕后表面出现轻微长霉现象,说明药材质量下降较为明显。
从以上结果中可以看到,绿原酸的含量变化能较好地评价储藏中湿度对山银花的影响,当评价值ΔC1≤0.15时,可以认为药材是处于“干燥处”储藏,如在相对湿度50%以下的环境中储藏。
实施例2
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品6~10,用HPLC法分别测定其中咖啡酸的含量C2。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中咖啡酸的含量C2’,根据公式ΔC2=1-C2/C2’计算出评价值ΔC2,储藏条件和结果见表4:
表4不同温度下山银花中咖啡酸的含量变化
可以看到,咖啡酸的含量变化能较好地评价储藏中温度对山银花的影响,当评价值ΔC2≤0.20时,可以认为药材处于“阴凉处”储藏,如20℃以下储藏。
实施例3
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品11~15,用HPLC法分别测定其中3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量C3。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量C3’,根据公式ΔC3=1-C3’/C3计算出评价值ΔC3,储藏条件和结果见表5:
表5不同真空条件下山银花中3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化
可以看到,3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化能较好地评价储藏中氧气对山银花的影响,当评价值ΔC3≤0.15时,可以认为药材处于真空包装中储藏。
实施例4
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品16~20。用HPLC法分别测定其中木犀草苷的含量C4。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中木犀草苷的含量C4’,根据公式ΔC4=1-C4’/C4计算出评价值ΔC4,储藏条件和结果见表6:
表6不同真空条件下山银花中木犀草苷的含量变化
其中储藏完毕后样品17出现了虫蛀现象,说明药材质量已经下降。
从上述结果中可以看到,木犀草苷的含量变化能较好地评价储藏中空气中的氧气对山银花的影响,当评价值ΔC4≤0.20时,可以认为药材处于真空包装中储藏。
实施例5
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品21~25,用HPLC法分别测定其中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量C5。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量C5’,根据公式ΔC5=1-C5’/C5计算出评价值ΔC5,储藏条件和结果见表7:
表7不同真空条件下山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙含量变化
可以看到,灰毡毛忍冬皂苷乙的含量变化能较好地评价储藏中空气中的氧气对山银花的影响,当评价值ΔC5≤0.15时,可以认为药材处于真空包装中储藏。
另外,样品22在储藏前灰毡毛忍冬皂苷乙的含量为4.86%,其质量基本能达到药典要求,但储藏后含量降低到3.30%,已经难以符合药典要求,不能作为药材使用。这说明储藏条件对于保证药材质量非常关键。也进一步说明对山银花储藏条件进行检测和评价的积极作用。
实施例6
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品26~30,再重复取药材1~5每份10g,作为样品31~35。用HPLC法分别测定上述各样品中川续断皂苷乙的含量C6。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,分别测定其中川续断皂苷乙的含量C6’,根据公式ΔC6=1-C6’/C6计算出评价值ΔC6,储藏条件和结果见表8:
表8不同储藏时间对山银花中川续断皂苷乙含量变化的影响
其中储藏完毕后的样品27长霉较多,有霉败味,说明药材质量已经严重下降。
从以上结果中可以看到,川续断皂苷乙的含量变化能较好地评价储藏时间对山银花的影响,当评价值ΔC6≤0.15时,可以认为药材的储藏期在两年以内,当ΔC6≤0.1时,可以认为药材的储藏期在一年以内。
实施例7
将实施例1中的药材1~5每份取10g,作为样品36~40。用分光测色计(Konica MinoltaCM-5)测定样品的颜色,得到颜色值L、A、B。再将上述样品分别置于不同条件下储藏,储藏完毕后,再测定药材颜色,得到颜色值L’、A’、B’,根据公式ΔL=|1-L’/L|、ΔA=|1-A’/A|、ΔB=|1-B’/B|计算出评价值ΔL、ΔA和ΔB,储藏条件见表9,结果见表10:
表9样品26-30的不同光照储藏条件
表10不同光照条件对山银花外观颜色变化的影响
从以上结果中可以看到,药材颜色的变化能较好地评价储藏中光照对山银花的影响。当ΔL≤0.2、ΔA≤0.2且ΔB≤0.2时,基本可以认为药材是避光储藏。
Claims (8)
1.一种山银花储藏条件的检测方法,其特征是:分别在储藏前和储藏后测定山银花的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量;再得出储藏前后所述山银花颜色变化情况以及所述六种成分含量变化情况,以此确定所述山银花所经历的储藏条件。
2.权利要求1所述的方法,其特征是包括以下步骤:
1)在储藏前,测定山银花的颜色,得到颜色值L、A和B;测定山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量,对应得到含量值C1、C2、C3、C4、C5和C6;
2) 将步骤1)中的山银花置于一定条件下储藏后,再测定其颜色,得到颜色值L’、A’和B’;再测定步骤1)中所述六种成分的含量,对应得到含量值C1’、C2’、C3’、C4’、C5’和C6’;
3) 根据以下公式计算得出储藏条件的评价值:
,,,,,,,,
其中, L、A和B为步骤1)中储藏前的颜色值,C1、C2、C3、C4、C5和C6为步骤1)中储藏前的含量值;L’、A’和B’为步骤2)中储藏后的颜色值,C1’、C2’、C3’、C4’、C5’和C6’为储藏后的含量值;ΔL、ΔA、ΔB、ΔC1、ΔC2、ΔC3、ΔC4、ΔC5和ΔC6为评价值;
4) 储藏条件的确定:
若ΔC1>0.15或ΔC2>0.20,则所述山银花的储藏条件不是在阴凉干燥处储藏;
若ΔC1≤0.15且ΔC2≤0.20,则所述山银花的储藏条件是在阴凉干燥处储藏;
若ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20且ΔC6≤0.15,则所述山银花的储藏条件是在阴凉干燥处储藏少于两年;
若ΔL≤0.2、ΔA≤0.2、ΔB≤0.2、ΔC1≤0.15、ΔC2≤0.20、ΔC3≤0.15、ΔC4≤0.20、ΔC5≤0.15且ΔC6≤0.1,则所述山银花的储藏条件在阴凉干燥处和真空包装中避光储藏少于一年;
其中ΔL、ΔA、ΔB、ΔC1、ΔC2、ΔC3、ΔC4、ΔC5和ΔC6为步骤3)中得到的评价值。
3.权利要求2所述的方法,其特征是,所述阴凉干燥处是指温度20℃以下且相对湿度50%以下的环境中。
4.权利要求1~3中任一所述的方法,其特征是,测定所述六种成分的含量所用的方法为HPLC法。
5.权利要求4所述的方法,其特征是,测定绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱,250×4.6mm,4μm;检测器为紫外检测器;检测波长分别为:327nm、322nm、437nm和327nm;流动相均为乙腈-0.4%磷酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。
6.权利要求4所述的方法,其特征是,测定灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱,250×4.6mm,4μm;检测器为蒸发光散射检测器;流动相均为乙腈-0.4%乙酸水溶液,洗脱方法为梯度洗脱。
7.权利要求1~3中任一所述的方法,其特征是,测定所述山银花的颜色所用的仪器为分光测色计。
8.权利要求1~3中任一所述的方法,其特征是,所述山银花为灰毡毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。
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