CN104306745B - 一种天麻醒脑胶囊的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种天麻醒脑胶囊的检测方法,属于生物医药技术领域,它包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法和含量测定方法。将现代药品生产管理融入到质量控制中,本发明从源头抓起,生产中使用的药材、溶剂皆进行质量检验,建立生产过程中的产品质量控制,建立完善的产品质量标准,薄层色谱检测比例高于国家要求,并大幅度提高天麻素的含量,提升幅度达到了28.3%,保证了药品的质量和疗效。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种具有滋补肝肾,平肝息风,通络止痛功效,用于治疗肝肾不足,肝风上扰所致头痛、头晕、记忆力减退、失眠、反应迟钝、耳鸣、腰酸以及血管性痴呆等的天麻醒脑胶囊的检测方法。
背景技术
天麻醒脑胶囊是一种获得国家批准生产的民族药,为国药准字Z20027062,质量标准为WS-11293(ZD-1293)-2002,并于2005年,我公司获得其发明专利,申请号为200410022700.7。
随着科学技术的进步,国家要求的不断提高,我们对天麻醒脑胶囊进行了再研究,发现了天麻醒脑胶囊在促智防治血管性痴呆(VD)的功能,发表论文十余篇。随着应用范围的扩大,产量增加,知名度提高,产品的质量尤为显得重要。严格的质量控制也因此被提上了日程。
中国专利200610138595.2公开了一种天麻醒脑制剂及其制法和控制方法,其采用三氯甲烷作溶剂,毒性较大,不利于检测人员的健康及检测结果的准确性;而且其中三氯甲烷和乙酸乙酯均且易产生乳化,严重影响检测结果。对于制备方法,其用水量过多,在提取时,大量无效成分被提出,使得产品成分杂,严重影响天麻醒脑胶囊制剂及药效。同时,该专利的质量控制不全面,药物的质量监控是贯穿于整个生产过程中的,而该专利只提供了生产所得产品的部分质控方法,没有对原材料、溶剂以及臣药地龙药材进行监控,所以该片面的质控方法无法满足目前药品的严格质量控制的要求。因此如何克服现有技术的不足是目前生物医药技术领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足,提供一种天麻醒脑胶囊的检测方法,全面的对天麻醒脑胶囊进行检测与监控,符合目前严格质控的要求。
本发明采用的技术方案如下:
一种天麻醒脑胶囊的检测方法,包括原料控制、制备方法控制及含量检验控制,具体如下:
第一,原料控制:
所述的1000个单剂量天麻醒脑胶囊由以下活性成分重量配比原料制备:
天麻300g、地龙200g、石菖蒲300g、远志200g、熟地黄100、肉苁蓉100g;以上六味药应符合《中国药典》2010版中相应的药材标准,且各味药在进入加工之前都需净制(捡、洗、切、干燥)粉碎,生产中使用的水、乙醇也要符合饮用标准;
第二,制备方法控制:
(1)地龙粗粉用质量为6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小时,滤过,滤液备用;
(2)石菖蒲、远志、熟地黄和肉苁蓉四味药的粗粉,加水煎煮二次,每次加水质量是其4味药总质量的6倍量,第一次1.5小时,第二次1小时,分次滤过,合并滤液,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10-1.15的清膏,冷却,加乙醇使含醇量达60%,静置48小时,滤过,滤液与步骤(1)滤液合并,回收乙醇,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10-1.15的清膏;
(3)天麻于洁净区粉碎成细粉,然后于≤80℃下干燥,并进行微生物检测及粒度检测,过筛后在洁净区与步骤(2)最后得到的清膏,充分混匀,80℃以下烘干,粉碎成细粉或制成颗粒,即得到内容物,将内容物装入胶囊,得到1000粒胶囊,控制崩解时限≤30分钟,装量差异为±10%;
其中,步骤(3)烘干后粉碎成细粉后,水份≤9%,且需经微生物检测;
微生物检测:细菌≤10000cfu/g,霉菌、酵母菌≤100cfu/g,大肠菌群<100个/g,大肠埃希菌不得检出/g,沙门菌不得检出/10g,活螨不得检出;
所得到的胶囊为硬胶囊,内容物为淡黄色至棕黄色的粉末或颗粒;气腥,味辛、咸;
第三,鉴别方法:
A.地龙的薄层色谱检测
取内容物3g,置于瓶中,加二氯甲烷30ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,药渣备用用于天麻素的检测,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为供试品溶液;另取地龙对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为9:1的甲苯与丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
B.石菖蒲的薄层色谱检测
取A项中的供试品溶液作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材0.3g,加二氯甲烷25ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:2的石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;
C.天麻素的薄层色谱检测
取A项中二氯甲烷提取过的药渣,加水饱和的正丁醇30ml,振摇15秒钟,再超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水2ml使其溶解,通过大孔吸附树脂柱,用浓度为10%的乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取天麻素对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg天麻素的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开至12cm,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.肉苁蓉和熟地黄中的毛蕊花糖苷的薄层色谱检测
取内容物2g,置于瓶中,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,然后用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液并蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg毛蕊花糖苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上(可使成条状),以体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍,晾干;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.肉苁蓉中的松果菊苷的薄层色谱检测
取D项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取松果菊苷对照品,加甲醇制成每每1ml溶液中含1mg松果菊苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄层板上,以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
第四,含量测定方法:
按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定;
a.色谱条件与系统适用性试验条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相;检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于4000;
b.对照品溶液的制备:精密称取天麻素对照品适量,加体积比为2:98的乙腈-水混合溶液制成每1ml含50μg天麻素的溶液,即得;
c.供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1g,精密称定,置于瓶中,精密加入体积比为2:98的乙腈-水混合溶液50ml,密塞,称定重量,充分摇散后超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用体积比为2:98的乙腈-水混合溶液补足减失的重量,摇匀,倾出溶液适量置离心管中,加塞,离心10分钟,取上清液,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
d.测定方法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5-10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。每粒含天麻以天麻素(C13H18O7)计,不得少于0.60mg。
进一步,优选的是A项、D项及含量测定方法中所述的置于瓶中均为置具塞锥形瓶中。
进一步,优选的是B项中所述的石油醚的沸程为60-90℃。
进一步,优选的是C项中所述的大孔吸附树脂柱为D101型大孔吸附树脂柱。
进一步,优选的是所述的D101型大孔吸附树脂柱内径为1cm,柱内树脂高度为15cm。
进一步,优选的是所述的含量测定方法供试品溶液的制备中超声处理的功率为250W,频率为50kHz。
进一步,优选的是所述的含量测定方法供试品溶液的制备中离心转速为每分钟4000转。
进一步,优选的是所述的含量测定方法供试品溶液的制备中微孔滤膜的孔径为0.45μm。
本发明的天麻醒脑胶囊功能与主治:滋补肝肾,平肝息风,通络止痛。用于肝肾不足,肝风上扰所致头痛、头晕、记忆力减退、失眠、反应迟钝、耳鸣、腰酸等症。
用法与用量:口服,一次2粒,一日3次。
规格:每粒装0.4g。
贮藏:密封。
有效期:2年。
本发明与现有技术相比,其有益效果为:
(1)薄层色谱法鉴别处方中地龙。原方法供试液制备过程中采用三氯甲烷作溶剂,毒性较大,且易产生乳化,现改用二氯甲烷直接提取,不仅避免了上述问题,阴性样品同法操作无干扰,所以该鉴别具有专属性,见附图1。
(2)薄层色谱法鉴别处方中石菖蒲。石菖蒲的鉴别在原标准中与地龙同板进行薄层鉴别,但此次研究中发现,原方法中用对照药材水煎煮后以三氯甲烷萃取制成对照药材溶液,结果对照药材色谱中斑点很弱,现改为对照药材直接用二氯甲烷超声提取,结果以体积比为8:2的石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯混合溶剂为展开剂薄层效果较好,且阴性无干扰,见附图2。
(3)薄层色谱法鉴别处方中天麻。在对原标准方法验证中发现阴性样品有一定干扰,本发明发现以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶剂较好,阴性无干扰,见附图3和附图4。
(4)薄层色谱法鉴别处方中肉苁蓉及熟地黄。肉苁蓉及熟地黄中均含有毛蕊花糖苷成分,供试品溶液的制备参照《中国药典》2010年版一部熟地黄药材鉴别方法,薄层色谱条件中发现展开剂为体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶剂,点于硅胶G薄层板上,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍显色,薄层效果较好。肉苁蓉及熟地黄双阴性样品无干扰,见附图5。
(5)鉴别肉苁蓉中的松果菊苷为新增项目,以肉苁蓉中含有的松果菊苷为对照,供试品溶液的制备参照《中国药典》2010年版一部肉苁蓉药材的鉴别方法,并同时用鉴别D的供试品溶液进行对比试验,结果表明鉴别D的供试品溶液较好;展开剂以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水的混合溶剂效果较好,阴性对照无干扰,鉴别具有专属性,见附图6。
(6)将现代药品生产管理融入到质量控制中,本发明从源头抓起,生产中使用的药材、溶剂皆进行质量检验,不仅建立生产过程中的产品质量控制,建立完善的产品质量标准,薄层色谱检测监控均高于国家要求,并从严大幅度提高天麻素的含量,提升幅度达到了28.3%,保证了药品的质量和疗效。
附图说明
图1为地龙的薄层鉴别图;
图2为石菖蒲的薄层鉴别图;
图3为天麻的薄层鉴别图;展开剂为体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯—甲醇—甲酸的混合溶剂;
图4为天麻的薄层鉴别图;展开剂为体积比为9:1:0.2的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶剂;
图5为肉苁蓉、熟地黄中毛蕊花糖苷的薄层鉴别图;
图6为肉苁蓉中松果菊苷薄层鉴别图;
图7为天麻素紫外吸收光谱图;
图8为天麻素对照品HPLC色谱图;
图9为天麻醒脑胶囊样品HPLC色谱图;
图10为阴性样品HPLC色谱图;
图11为天麻素线性关系图;
其中,1为地龙对照药材,2为地龙阴性样品,3为20130524批号天麻醒脑胶囊样品;4为20130525批号天麻醒脑胶囊样品,5为20130545批号天麻醒脑胶囊样品,6为石菖蒲阴性样品,7为石菖蒲对照药材,8为天麻素对照品,9为天麻阴性样品,10为肉苁蓉及熟地黄双阴性样品,11为肉苁蓉阴性样品(熟地黄含量仅为0.02%),12为熟地黄阴性样品,13为毛蕊花糖苷对照品,14为松果菊苷对照品。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
(一)仪器及试药
仪器:岛津LC-20AD-HPLC液相色谱仪,Agilent-1100液相色谱仪。
天麻素:中国药品生物制品检定所提供,批号110807-200205,供含量测定用,其紫外吸收光谱如图7所示。
天麻醒脑胶囊样品:云南永孜堂药业有限公司生产,批号:20130524、20130525、20130545。
乙腈为色谱纯;水为超纯水;磷酸为分析纯。
标准研究中用对照品说明:天麻素对照品,批号110807-200205,供含量测定用;石菖蒲对照药材,批号121098—201105,供鉴别用;地龙对照药材,批号120987-201107,供鉴别用;毛蕊花糖苷对照品,批号111530-200706,供含量测定用;松果菊苷对照品,批号111670-200503,供含量测定用;全部均由中国药品生物制品检定所提供。
(二)高效液相色谱条件
色谱柱:TYPE MG ⅡCAPCELL PAK-C18柱,4.6×250mm;Waters SunFire C18柱,4.6×250mm;Waters Symmetry C18柱,4.6×250mm.
流动相:体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸;检测波长:220nm;柱温:40℃
流速:1.0ml/min
(三)薄层色谱法本发明薄层色谱法具体参见《中国药典》一部附录ⅥB。
(四)检查本发明产品应符合胶囊剂项下有关的各项规定,具体参见《中国药典》一部附录IL。
实施例1
一种天麻醒脑胶囊的检测方法,包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法,具体如下:
第一,原料控制:
所述的10000粒天麻醒脑胶囊(批号20130524)由以下活性成分重量配比原料制备:
天麻3000g、地龙2000g、石菖蒲3000g、远志2000g、熟地黄1000g、肉苁蓉1000g;以上六味药应符合药典中相应的药材标准,且所有的中药均需净制粉碎;
第二,制备方法控制:
(1)地龙粗粉用质量为6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小时,滤过,滤液备用;
(2)石菖蒲、远志、熟地黄和肉苁蓉四味药的粗粉,加水煎煮二次,每次加水质量是其4味药总质量的6倍量,第一次1.5小时,第二次1小时,分次滤过,合并滤液,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.15的清膏,冷却,加乙醇使含醇量达60%,静置48小时,滤过,滤液与步骤(1)滤液合并,回收乙醇,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.15的清膏;
(3)天麻于洁净区粉碎成细粉,然后于≤80℃下干燥,并进行微生物检测及粒度检测,过筛后在洁净区与步骤(2)最后得到的清膏,充分混匀,80℃以下烘干,粉碎成细粉或制成颗粒,即得到内容物,将内容物装入胶囊,得到9952粒胶囊,收率为99.52%;标准崩解时限为≤30分钟,实测值为20分钟;标准装量差异为±10%,实测值8%;
其中,步骤(3)烘干后粉碎成细粉后,标准水份≤9%,实测值6%;且需经微生物检测;
微生物检测:标准细菌≤10000cfu/g,实测值500cfu/g;标准霉菌、酵母菌≤100cfu/g,实测值30cfu/g;标准大肠菌群<100个/g,实测值10个/g;标准大肠埃希菌不得检出/g,实测值0个/g;标准沙门菌不得检出/10g,实测值0个/10g;标准活螨不得检出,实测值0;
所得到的胶囊为硬胶囊,内容物为淡黄色至棕黄色的粉末或颗粒;气腥,味辛、咸;
第三,鉴别方法:
A.地龙的薄层色谱检测
取内容物3g,置具塞锥形瓶中,加二氯甲烷30ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,药渣备用用于天麻素的检测,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为供试品溶液;另取地龙对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为9:1的甲苯与丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
B.石菖蒲的薄层色谱检测
取A项中的供试品溶液作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材0.3g,加二氯甲烷25ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:2的石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;
C.天麻素的薄层色谱检测
取A项中二氯甲烷提取过的药渣,加水饱和的正丁醇30ml,振摇15秒钟,再超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水2ml使其溶解,通过D101型大孔吸附树脂柱,该大孔吸附树脂柱内径1cm,柱内树脂高度15cm,用浓度为10%的乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取天麻素对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg天麻素的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开至12cm,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.肉苁蓉和熟地黄中的毛蕊花糖苷的薄层色谱检测
取内容物2g,置具塞锥形瓶中,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,然后用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液并蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg毛蕊花糖苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上(可使成条状),以体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍,晾干;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.肉苁蓉中的松果菊苷的薄层色谱检测
取D项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取松果菊苷对照品,加甲醇制成每每1ml溶液中含1mg松果菊苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄层板上,以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
第四,含量测定方法:
按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定;
a.色谱条件与系统适用性试验条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相;检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于4000;
b.对照品溶液的制备:精密称取天麻素对照品适量,加体积比为2:98的乙腈-水混合溶液制成每1ml含50μg天麻素的溶液,即得;
c.供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积比为2:98的乙腈-水混合溶液50ml,密塞,称定重量,充分摇散后超声处理30分钟,超声功率250W,频率50kHz,放冷,再称定重量,用体积比为2:98的乙腈-水混合溶液补足减失的重量,摇匀,倾出溶液适量置离心管中,加塞,离心10分钟,其转速为每分钟4000转,取上清液,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
d.测定方法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
每粒含天麻以天麻素(C13H18O7)计不得少于0.60mg,实测值1.404mg/粒。
实施例2
一种天麻醒脑胶囊的检测方法,包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法,具体如下:
第一,原料控制:
所述的10000粒天麻醒脑胶囊(批号20130525)由以下活性成分重量配比原料制备:
天麻3000g、地龙2000g、石菖蒲3000g、远志2000g、熟地黄1000g、肉苁蓉1000g;以上六味药应符合药典中相应的药材标准,且所有的中药均需净制粉碎;
第二,制备方法控制:
(1)地龙粗粉用质量为6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小时,滤过,滤液备用;
(2)石菖蒲、远志、熟地黄和肉苁蓉四味药的粗粉,加水煎煮二次,每次加水质量是其4味药总质量的6倍量,第一次1.5小时,第二次1小时,分次滤过,合并滤液,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.12的清膏,冷却,加乙醇使含醇量达60%,静置48小时,滤过,滤液与步骤(1)滤液合并,回收乙醇,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.12的清膏;
(3)天麻于洁净区粉碎成细粉,然后于≤80℃下干燥,并进行微生物检测及粒度检测,过筛后在洁净区与步骤(2)最后得到的清膏,充分混匀,80℃以下烘干,粉碎成细粉或制成颗粒,即得到内容物,将内容物装入胶囊,得到10012粒胶囊,收率为100.12%,标准崩解时限为≤30分钟,实测值为18分钟;标准装量差异为±10%,实测值7%;
其中,步骤(3)烘干后粉碎成细粉后,标准水份≤9%,实测值5%,且需经微生物检测;
微生物检测:标准细菌≤10000cfu/g,实测值700cfu/g;标准霉菌、酵母菌≤100cfu/g,实测值21cfu/g;标准大肠菌群<100个/g,实测值8个/g;标准大肠埃希菌不得检出/g,实测值0个/g;标准沙门菌不得检出/10g,实测值0个/10g;标准活螨不得检出,实测值0;
所得到的胶囊为硬胶囊,内容物为淡黄色至棕黄色的粉末或颗粒;气腥,味辛、咸;
第三,鉴别方法:
A.地龙的薄层色谱检测
取内容物3g,置具塞锥形瓶中,加二氯甲烷30ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,药渣备用用于天麻素的检测,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为供试品溶液;另取地龙对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为9:1的甲苯与丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
B.石菖蒲的薄层色谱检测
取A项中的供试品溶液作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材0.3g,加二氯甲烷25ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:2的石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;
C.天麻素的薄层色谱检测
取A项中二氯甲烷提取过的药渣,加水饱和的正丁醇30ml,振摇15秒钟,再超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水2ml使其溶解,通过D101型大孔吸附树脂柱,该大孔吸附树脂柱内径1cm,柱内树脂高度15cm,用浓度为10%的乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取天麻素对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg天麻素的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开至12cm,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.肉苁蓉和熟地黄中的毛蕊花糖苷的薄层色谱检测
取内容物2g,置具塞锥形瓶中,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,然后用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液并蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg毛蕊花糖苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上(可使成条状),以体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍,晾干;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.肉苁蓉中的松果菊苷的薄层色谱检测
取D项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取松果菊苷对照品,加甲醇制成每每1ml溶液中含1mg松果菊苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄层板上,以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
第四,含量测定方法:
按照《中国药典》2010年版一部附ⅥD高效液相色谱法测定;
a.色谱条件与系统适用性试验条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相;检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于4000;
b.对照品溶液的制备:精密称取天麻素对照品适量,加体积比为2:98的乙腈-水混合溶液制成每1ml含50μg天麻素的溶液,即得;
c.供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积比为2:98的乙腈-水混合溶液50ml,密塞,称定重量,充分摇散后超声处理30分钟,超声功率250W,频率50kHz,放冷,再称定重量,用体积比为2:98的乙腈-水混合溶液补足减失的重量,摇匀,倾出溶液适量置离心管中,加塞,离心10分钟,其转速为每分钟4000转,取上清液,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
d.测定方法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
每粒含天麻以天麻素(C13H18O7)计不得少于0.60mg,实测值1.336mg/粒。
实施例3
一种天麻醒脑胶囊的检测方法,包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法,具体如下:
第一,原料控制:
所述的1500000粒天麻醒脑胶囊(批号20130545)由以下活性成分重量配比原料制备:
天麻450kg、地龙300kg、石菖蒲450kg、远志300kg、熟地黄150kg、肉苁蓉150kg;以上六味药应符合药典中相应的药材标准,且所有的中药均需净制粉碎;
第二,制备方法控制:
(1)地龙粗粉用质量为6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小时,滤过,滤液备用;
(2)石菖蒲、远志、熟地黄和肉苁蓉四味药的粗粉,加水煎煮二次,每次加水质量是其4味药总质量的6倍量,第一次1.5小时,第二次1小时,分次滤过,合并滤液,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10的清膏,冷却,加乙醇使含醇量达60%,静置48小时,滤过,滤液与步骤(1)滤液合并,回收乙醇,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10的清膏;
(3)天麻于洁净区粉碎成细粉,然后于≤80℃下干燥,并进行微生物检测及粒度检测,过筛后在洁净区与步骤(2)最后得到的清膏,充分混匀,80℃以下烘干,粉碎成细粉或制成颗粒,即得到内容物,将内容物装入胶囊,得到1518660粒胶囊,收率为101.24%;标准崩解时限为≤30分钟,实测值为22分钟;标准装量差异为±10%,实测值5%;
其中,步骤(3)烘干后粉碎成细粉后,标准水份≤9%,实测值7%,且需经微生物检测;
微生物检测:标准细菌≤10000cfu/g,实测值430cfu/g;标准霉菌、酵母菌≤100cfu/g,实测值25cfu/g;标准大肠菌群<100个/g,实测值8个/g;标准大肠埃希菌不得检出/g,实测值0个/g;标准沙门菌不得检出/10g,实测值0个/10g;标准活螨不得检出,实测值0;
所得到的胶囊为硬胶囊,内容物为淡黄色至棕黄色的粉末或颗粒;气腥,味辛、咸;
第三,鉴别方法:
A.地龙的薄层色谱检测
取内容物3g,置具塞锥形瓶中,加二氯甲烷30ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,药渣备用用于天麻素的检测,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为供试品溶液;另取地龙对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各7μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为9:1的甲苯与丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
B.石菖蒲的薄层色谱检测
取A项中的供试品溶液作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材0.3g,加二氯甲烷25ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各8μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:2的石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;
C.天麻素的薄层色谱检测
取A项中二氯甲烷提取过的药渣,加水饱和的正丁醇30ml,振摇15秒钟,再超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水2ml使其溶解,通过D101型大孔吸附树脂柱,该大孔吸附树脂柱内径1cm,柱内树脂高度15cm,用浓度为10%的乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取天麻素对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg天麻素的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各9μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开至12cm,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.肉苁蓉和熟地黄中的毛蕊花糖苷的薄层色谱检测
取内容物2g,置具塞锥形瓶中,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,然后用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液并蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg毛蕊花糖苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上(可使成条状),以体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍,晾干;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.肉苁蓉中的松果菊苷的薄层色谱检测
取D项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取松果菊苷对照品,加甲醇制成每每1ml溶液中含1mg松果菊苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄层板上,以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
第四,含量测定方法:
按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定;
a.色谱条件与系统适用性试验条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相;检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于4000;
b.对照品溶液的制备:精密称取天麻素对照品适量,加体积比为2:98的乙腈-水混合溶液制成每1ml含50μg天麻素的溶液,即得;
c.供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积比为2:98的乙腈-水混合溶液50ml,密塞,称定重量,充分摇散后超声处理30分钟,超声功率250W,频率50kHz,放冷,再称定重量,用体积比为2:98的乙腈-水混合溶液补足减失的重量,摇匀,倾出溶液适量置离心管中,加塞,离心10分钟,其转速为每分钟4000转,取上清液,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
d.测定方法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液8μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
每粒含天麻以天麻素(C13H18O7)计不得少于0.60mg,实测值1.193mg/粒。
对于含量测定方法的方法学验证内容
1.专属性
取除天麻外的其余5味药材,按处方量及工艺要求制备缺天麻的阴性供试品,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液,同法进行测定,结果在与天麻素对照品相同保留时间处无色谱峰出现,表明阴性无干扰,方法具有专属性,见附图8-10。
2.耐用性
2.1供试品溶液制备方法的选择
方法(1)取样后加体积比为2:98乙腈-水的混合溶剂50ml超声处理20、30、40、50、60分钟,离心10分钟,滤过。
方法(2)取样后加95%乙醇50ml,加热回流1h,放冷补重,离心10分钟,精密取上清液10ml蒸干,用体积比为2:98乙腈-水的混合溶剂溶解至10ml量瓶中。
结果:方法(1)体积比为2:98乙腈-水的混合溶剂超声处理30分钟即能提取完全,而(2)法提取率较(1)法低,见表1。
表1同一样品不同提取溶剂、提取方法及时间的比较试验
2.2不同品牌色谱柱的比较
使用TYPE MG ⅡCAPCELL PAK-C18柱,4.6×250mm;WatersSunFire C18柱,4.6×250mm;以及进口的Waters Symmetry C18柱,4.6×250mm;对同一供试品进行测定,结果都能得到分离度良好的天麻素色谱峰及一致的测定结果,见表2。
2.3不同流速的比较
以0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min的流速分别对同一供试品进行测定,结果见表2,测定结果相一致。
2.4检测波长的比较
选择222nm、220nm、218nm三个波长对同一供试品进行测定,结果说明在波长有较小变化时,对测定结果基本无影响,见表2。
2.5不同柱温的比较
取同一供试品,分别于35℃,40℃,45℃测定,结果无明显影响,见表2。
2.6不同仪器的比较
取同一供试品,分别于不同仪器上进行测定,结果基本一致,见表2。
2.7不同取样量对测定结果影响
同一样品,分别取0.5g,1.0g,2.0g,按相同方法测定,结果基本一致,见表2。
表2不同影响因素的比较试验
2.8供试品溶液的稳定性
取供试品溶液,分别于0至24小时每两小时进样一针,各进样5μl,按上述色谱条件进行测定,结果峰面积RSD为0.09%,见表3,表明供试品溶液在24小时内稳定。
表3供试品溶液稳定性测定结果
测定时间 | 放置时间 | 峰面积积分值 |
15:16 | 0 | 643494 |
17:19 | 2 | 645370 |
19:21 | 4 | 644854 |
21:24 | 6 | 644300 |
23:26 | 8 | 644548 |
1:28 | 10 | 645134 |
3:30 | 12 | 644567 |
5:31 | 14 | 643635 |
7:33 | 16 | 644993 |
9:34 | 18 | 644169 |
11:43 | 20 | 644541 |
13:51 | 22 | 643427 |
16:03 | 24 | 643801 |
平均值 | 644351 | |
RSD | 0.09% |
3.线性关系考察
精密称取天麻素对照品13.47mg,置100ml量瓶中,加体积比为2:98乙腈-水的混合溶剂至刻度,摇匀,再精密吸取上述溶液5ml,置10ml量瓶中,加体积比为2:98乙腈-水的混合溶剂混合液至刻度,摇匀,得对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.5、1、3、5、10、15、20μl注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,结果见表4,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标进行线性回归,得回归方程:Y=1770954.81X-3774.64(R2=1),结果表明,天麻素在0.0337~1.347g之间与峰面积呈良好线性关系,线性关系图见附图11。
表4线性关系考察结果
4.精密度
4.1仪器精密度试验
取天麻素,配制成浓度60.85ug/ml的天麻素的甲醇溶液,然后连续进样5次,其峰面积积分值的相对标准偏差不大于2.0%,符合规定,见表5。
表5精密度试验结果
进样次数 | 峰面积积分值 |
1 | 527812 |
2 | 527914 |
3 | 527440 |
4 | 527762 |
5 | 528722 |
平均峰面积积分值 | 527930 |
RSD% | 0.09 |
4.2重复性试验
取批号为20130524的天麻醒脑胶囊,按正文含量测定方法,分别制备6份供试品溶液,测定天麻素含量,测定结果见表6。
表6重复性试验结果
5.准确度(回收率试验)
取已知含量的天麻醒脑胶囊样品(批号:20130524,天麻素含量:3.4821mg/g),分别添加天麻素对照品,按正文中含量测定方法测定天麻素含量,计算回收率,平均回收率100.39%,RSD=0.18%,结果见表7。
表7加样回收率试验结果
6.样品测定:23批天麻醒脑胶囊样品,按正文中含量测定方法测定天麻素含量(其中序号4-23的20批样品由云南永孜堂制药有限公司测定),结果见表8。
表8天麻醒脑胶囊样品含量测定结果
序号 | 样品批号 | 天麻素含量(mg/粒) |
1 | 20130524 | 1.404 |
2 | 20130525 | 1.336 |
3 | 20130545 | 1.193 |
4 | 20040401 | 0.718 |
5 | 20040403 | 0.700 |
6 | 20040501 | 0.703 |
7 | 20040502 | 0.895 |
8 | 20040601 | 0.761 |
9 | 20040701 | 0.708 |
10 | 20040801 | 0.744 |
11 | 20040901 | 0.991 |
12 | 20041002 | 1.072 |
13 | 20041101 | 1.138 |
14 | 20050101 | 1.094 |
15 | 20050103 | 0.854 |
16 | 20050201 | 0.950 |
17 | 20050301 | 1.064 |
18 | 20050502 | 0.823 |
19 | 20050503 | 0.816 |
20 | 20050601 | 0.805 |
21 | 20050602 | 0.801 |
22 | 20050603 | 0.644 |
23 | 20050701 | 0.853 |
7.含量限度确定
原标准中天麻素的含量限度为不得少于0.43mg/粒,本发明大幅度提高了天麻素的含量限度,同时考虑到不同批次天麻药材中天麻的含量会有一定差异,故将天麻素含量由每粒0.4g的不低于0.43mg,提高到0.6mg,提升的幅度达28.3%,保证了药品的质量和疗效。
Claims (8)
1.一种天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于包括原料控制、制备方法控制、鉴别方法及含量测定方法,具体如下:
第一,原料控制:
所述的1000个单剂量天麻醒脑胶囊由以下活性成分重量配比原料制备:
天麻300g、地龙200g、石菖蒲300g、远志 200g、熟地黄100、肉苁蓉100g;以上六味药应符合《中国药典》2010年版中相应的药材标准,且各味药在进入加工之前均需净制粉碎;
第二,制备方法控制:
(1)地龙粗粉用质量6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小时,滤过,滤液备用;
(2)石菖蒲、远志、熟地黄和肉苁蓉四味药的粗粉混合均匀,加水煎煮二次,每次加水质量是其4味药总质量的6倍量,第一次1.5小时,第二次1小时,分次滤过,合并滤液,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10-1.15的清膏,冷却,加乙醇使含醇量达60%,静置48小时,滤过,滤液与步骤(1)滤液合并,回收乙醇,于洁净区浓缩至90℃下相对密度1.10-1.15的清膏;
(3)天麻于洁净区粉碎成细粉,然后于≤80℃下干燥,并进行微生物检测及粒度检测,过筛后在洁净区与步骤(2)最后得到的清膏,充分混匀,80℃以下烘干,粉碎成细粉或制成颗粒,即得到内容物,将内容物装入胶囊,得到1000粒胶囊,控制崩解时限≤30分钟,装量差异为±10%;
其中,步骤(3)烘干后粉碎成细粉后,水份≤9%,且需经微生物检测;
微生物检测:细菌≤10000cfu/g,霉菌、酵母菌≤100 cfu/g,大肠菌群<100个/g,大肠埃希菌不得检出/g,沙门菌不得检出/10g,活螨不得检出;
所得到的胶囊为硬胶囊,内容物为淡黄色至棕黄色的粉末或颗粒;气腥,味辛、咸;
第三,鉴别方法:
A.地龙的薄层色谱检测
取内容物3g,置于瓶中,加二氯甲烷30ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,药渣备用用于天麻素的检测,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为供试品溶液;另取地龙对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为9:1的甲苯与丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
B. 石菖蒲的薄层色谱检测
取A项中的供试品溶液作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材0.3g,加二氯甲烷25ml,振摇20秒,再超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml二氯甲烷使其溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:2的石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;
C.天麻素的薄层色谱检测
取A项中二氯甲烷提取过的药渣,加水饱和的正丁醇30ml,振摇15秒钟,再超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水2ml使其溶解,通过大孔吸附树脂柱,用浓度为10%的乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取天麻素对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg天麻素的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为8:1:3:0.1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开至12cm,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D. 肉苁蓉和熟地黄中的毛蕊花糖苷的薄层色谱检测
取内容物2g,置于瓶中,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液并蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg毛蕊花糖苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为16:0.5:2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍,晾干;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E. 肉苁蓉中的松果菊苷的薄层色谱检测
取D项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取松果菊苷对照品,加甲醇制成每1ml溶液中含1mg松果菊苷的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄层板上,以体积比为2:2:6的甲醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
第四,含量测定方法:
按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定;
a.色谱条件与系统适用性试验条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为2:98的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相;检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于4000;
b.对照品溶液的制备:精密称取天麻素对照品适量,加体积比为2: 98的乙腈-水混合溶液制成每1ml含50μg天麻素的溶液,即得;
c.供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1g,精密称定,置于瓶中,精密加入体积比为2: 98的乙腈-水混合溶液50ml,密塞,称定重量,充分摇散后超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用体积比为2: 98的乙腈-水混合溶液补足减失的重量,摇匀,倾出溶液适量置离心管中,加塞,离心10分钟,取上清液,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
d.测定方法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5-10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
每粒含天麻以天麻素计,不得少于0.60mg。
2.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于A项、D项及含量测定方法中所述的置于瓶中均为置具塞锥形瓶中。
3.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于B项中所述的石油醚的沸程为60-90℃。
4.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于C项中所述的大孔吸附树脂柱为D101型大孔吸附树脂柱。
5.根据权利要求4所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于所述的D101型大孔吸附树脂柱内径为1cm,柱内树脂高度为15cm。
6.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于所述的含量测定方法供试品溶液的制备中超声处理的功率为250W,频率为50kHz。
7.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于所述的含量测定方法供试品溶液的制备中离心转速为每分钟4000转。
8.根据权利要求1所述的天麻醒脑胶囊的检测方法,其特征在于所述的含量测定方法供试品溶液的制备中微孔滤膜的孔径为0.45μm。
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CN108362796A (zh) * | 2018-02-23 | 2018-08-03 | 贵州省科晖制药厂 | 一种陈香露白露片中药成分的检测方法 |
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CN110742972B (zh) * | 2019-11-14 | 2021-12-24 | 甘肃琛蓝生物医药有限公司 | 一种具有改善认知作用的中药组合物及其制备方法和中药制剂 |
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CN110940756B (zh) * | 2019-12-21 | 2021-10-01 | 陕西中医药大学 | 一种评价石菖蒲质量的方法 |
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CN113713047A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-30 | 云南永孜堂制药有限公司 | 天麻醒脑液体中药组合物及其制法和用途 |
CN114252550A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-29 | 湖南敬和堂制药有限公司 | 一种治疗血虚、血瘀或兼阴虚妇科疾病的中药组合物的质量控制方法及应用 |
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CN117114511B (zh) * | 2023-10-23 | 2024-01-09 | 山东希尔福生物科技有限公司 | 一种基于物联网的软胶囊生产车间智能管理系统 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1583031A (zh) * | 2004-06-01 | 2005-02-23 | 云南省昭通制药有限公司 | 一种天麻复方药物及其制备方法和应用 |
CN1686340A (zh) * | 2005-03-21 | 2005-10-26 | 北京正大绿洲医药科技有限公司 | 一种滋补肝肾的天麻醒脑滴丸及其制备方法 |
CN1973887A (zh) * | 2006-12-25 | 2007-06-06 | 河南辅仁药业集团有限公司 | 一种药物组合物及其制备方法 |
CN1981852A (zh) * | 2005-11-09 | 2007-06-20 | 北京奇源益德药物研究所 | 一种天麻醒脑制剂及其制法和质控方法 |
CN102309689A (zh) * | 2011-09-20 | 2012-01-11 | 西南交通大学 | 天麻咀嚼胶剂及其制备及检测方法 |
-
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1583031A (zh) * | 2004-06-01 | 2005-02-23 | 云南省昭通制药有限公司 | 一种天麻复方药物及其制备方法和应用 |
CN1686340A (zh) * | 2005-03-21 | 2005-10-26 | 北京正大绿洲医药科技有限公司 | 一种滋补肝肾的天麻醒脑滴丸及其制备方法 |
CN1981852A (zh) * | 2005-11-09 | 2007-06-20 | 北京奇源益德药物研究所 | 一种天麻醒脑制剂及其制法和质控方法 |
CN1973887A (zh) * | 2006-12-25 | 2007-06-06 | 河南辅仁药业集团有限公司 | 一种药物组合物及其制备方法 |
CN102309689A (zh) * | 2011-09-20 | 2012-01-11 | 西南交通大学 | 天麻咀嚼胶剂及其制备及检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
复方天麻首乌酒中天麻素的鉴别;李怀斌;《安徽中医学院学报》;20021225;第21卷(第6期);第54页 * |
天麻醒脑片中天麻素含量测定方法研究;王萍;《黑龙江医药》;20110115;第24卷(第1期);第13-15页 * |
天麻醒脑胶囊的质量控制;许威等;《安徽中医学院学报》;20120201;第31卷(第1期);第55页左栏第2段 * |
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