CN104820039B - 天麻中天麻素的含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种天麻中天麻素的含量的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将天麻粉碎后与硅藻土混合，天麻和硅藻土的重量比为1:1，天麻粉碎后的粒径为经三号筛过筛后的天麻粉；步骤2：采用ASE萃取法萃取天麻素，收集萃取液，其中，ASE萃取法所采用的萃取溶剂为体积分数为49.5‑50.5％的稀乙醇溶液；步骤3：将萃取液蒸干后用乙腈和0.05％磷酸水溶液的混合液溶解并稀释定容，离心后取上清液；步骤4：将上述上清液以高效液相色谱法进行检测测定天麻素的含量。本发明的目的是提供一种萃取迅速、测量精度高的天麻中天麻素的含量的测定方法。
Description
技术领域
本发明涉及化学检测技术领域，特别是一种天麻中天麻素的含量的测定方法。
背景技术
天麻为兰科植物天麻GastrodiaelataB1.的干燥块茎。立冬后至次年清明前采挖，立即洗净，蒸透，敞开低温干燥。天麻呈椭圆形或长条形，略扁，皱缩而稍弯曲，长3～15cm，宽1.5～6cm，厚0.5～2cm。表面黄白色至淡黄棕色，有纵皱纹及由潜伏芽排列而成的横环纹多轮，有时可见棕褐色菌索。顶端有红棕色至深棕色鹦嘴状的芽或残留茎基；另端有圆脐形疤痕。质坚硬，不易折断，断面较平坦，黄白色至淡棕色，角质样。气微，味甘。天麻横切面：表皮有残留，下皮由2～3列切向延长的栓化细胞组成。皮层为10数列多角形细胞，有的含草酸钙针晶束。较老块茎皮层与下皮相接处有2～3列椭圆形厚壁细胞，木化，纹孔明显。中柱占绝大部分，有小型周韧维管束散在；薄壁细胞亦含草酸钙针晶束。粉末黄白色至黄棕色。厚壁细胞椭圆形或类多角形.直径70～180μm，壁厚3～8μm，木化，纹孔明显。草酸钙针晶成束或散在，长25～75(93)μm。用醋酸甘油水装片观察含糊化多糖类物的薄壁细胞无色，有的细胞可见长卵形、长椭圆形或类圆形颗粒，遇碘液显棕色或淡棕紫色。螺纹导管、网纹导管及环纹导管直径8～30μm。
药典所记录的方法为：取本品粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50m1.称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量。摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，浓缩至近干。残渣加乙腈一水(3：97)混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中。用乙腈一水(3：97)昆合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。上述方法溶剂用量大，测试时间长，对测试人员技能要求高。因此如何提供一种萃取迅速、测量精度高的天麻中天麻素的含量的测定方法，成为一个技术难题。
发明内容
本发明的目的是提供一种萃取迅速、测量精度高的天麻中天麻素的含量的测定方法。
本发明提供的技术方案为：一种天麻中天麻素的含量的测定方法，包括以下步骤：
步骤1：将天麻粉碎后与硅藻土混合，天麻和硅藻土的重量比为1:1，天麻粉碎后的粒径为经三号筛过筛后的天麻粉；
步骤2：采用ASE萃取法萃取天麻素，收集萃取液，其中，ASE萃取法所采用的萃取溶剂为体积分数为50％的稀乙醇溶液；
步骤3：将萃取液蒸干后用乙腈和0.05％磷酸水溶液的混合液溶解并稀释定容，离心后取上清液；
步骤4：将上述上清液以高效液相色谱法进行检测测定天麻素的含量，高效液相色谱法的具体参数如下：色谱柱：Syncronis AQ C18250mm*4.6mm 5μm、柱温：40℃、流速：1mL/min、流动相：乙腈-0.05wt％磷酸水溶液、检测波长：220nm、上清液进样量10μl；其中，乙腈-0.05％磷酸水溶液的体积比为2:98。
在上述的天麻中天麻素的含量的测定方法中，所述的步骤2包括以下子步骤：
S1：在萃取池的底部垫3-6张滤纸，再加入硅藻土作为底层；
S2：向萃取池中加入步骤1所得到的天麻和硅藻土的混合物；
S3：向萃取池中加入适量的硅藻土作为表层；
S4：采用甲醇进行萃取；其中，萃取参数为：萃取温度120℃；循环次数1次；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；吹扫时间60s。
在上述的天麻中天麻素的含量的测定方法中，所述的天麻和硅藻土的混合物的重量为2g，所述的萃取池的体积为10ml。
在上述的天麻中天麻素的含量的测定方法中，所述的步骤3具体为：将萃取液倒入蒸发皿中并用少量稀乙醇润洗接收瓶合并萃取液，蒸干。用乙腈和0.05％磷酸水溶液的混合液溶解并稀释至25mL，取2mL在15000r/min下离心3min，取上清液，其中用乙腈和0.05％磷酸水溶液的重量比为2：98。
在上述的天麻中天麻素的含量的测定方法中，所述的ASE萃取法通过ASE-350加速溶剂萃取仪进行，高效液相色谱检测的仪器为岛津20AD液相色谱仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明采用ASE萃取法萃取后蒸干并通过乙腈和0.05％磷酸水溶液定容，得到的待测品有利于后期的测试，本方法萃取效率高，溶剂用量少，测量精度高。萃取得到的溶液采用HPLC法进行检测，主峰出峰清楚检测精度高。
附图说明
图1为本发明的实施例1的测试谱图；
图2为本发明的标准样的测试谱图；
图3为本发明按照药典方法分离得到的样品的测试谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
本实施例所用到的仪器与耗材为：粉碎机、电子分析天平(XA205DU)：感量0.001g、加速溶剂萃取仪型号：ASE-350(10ml萃取池，50ml收集瓶)、容量瓶：25ml、离心管：2ml。
步骤1：取天麻粉末(过三号筛)约1g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用；
步骤2：萃取池底部垫3～6张(商品化滤纸1张)自制圆形滤纸(直径27mm)，加入约1g硅藻土后加入步骤1得到的混合均匀的样品、再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。
步骤3：用ASE萃取放萃取，得到萃取液，具体参数见下表1。
表1 ASE萃取参数
步骤4：萃取结束后，将萃取液倒入蒸发皿中并用少量稀乙醇润洗接收瓶合并萃取液，蒸干。用乙腈和0.05％磷酸水溶液(乙腈：0.05％磷酸水溶液＝2:98)溶解并稀释至25mL，取2mL在15000r/min下离心3min，取上清液，待上机测定。
检测
采用岛津20AD高效液相色谱仪进行检测，检测参数为：
色谱柱：Syncronis AQ C18250mm*4.6mm 5μm、柱温：40℃、流速：1mL/min、流动相：乙腈-0.05wt％磷酸水溶液(2:98体积比)、检测波长：220nm、上清液进样量10μl。
标准样的准备
取天麻素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得，检测，检测方法按照实施例1的检测步骤进行。
实施例1和标准样的检测结果如下图1和图2。图3为药典所记录分离方法检测得到的谱图，具体为取天麻粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50m1.称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量。摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，浓缩至近干。残渣加乙腈一水(3：97)混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中。用乙腈一水(3：97)昆合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，检测，检测方法按照实施例1的检测步骤进行。。通过三项谱图对照可以发现，本方法分离所得到的样品能够得到清晰的完整的图谱，与药典记录的分离方法得到的样品测试谱图具有高度重合性。
本方法分离精度高，用时短，检测结果准确，有利于简化分析人员的操作。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种天麻中天麻素的含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将天麻粉碎后与硅藻土混合，天麻和硅藻土的重量比为1:1，天麻粉碎后的粒径为经三号筛过筛后的天麻粉；
步骤2：采用ASE萃取法萃取天麻素，收集萃取液，其中，ASE萃取法所采用的萃取溶剂为体积分数为49.5-50.5％的稀乙醇溶液；
步骤3：将萃取液蒸干后用乙腈和0.05％磷酸水溶液的混合液溶解并稀释定容，离心后取上清液；
步骤4：将上述上清液以高效液相色谱法进行检测测定天麻素的含量，高效液相色谱法的具体参数如下：色谱柱：Syncronis AQ C18 250mm*4.6mm 5μm、柱温：40℃、流速：1mL/min、流动相：乙腈-0.05wt％磷酸水溶液、检测波长：220nm、上清液进样量10μl；其中，乙腈-0.05wt％磷酸水溶液的体积比为2:98。
2.根据权利要求1所述的天麻中天麻素的含量的测定方法，其特征在于，所述的步骤2包括以下子步骤：
S1：在萃取池的底部垫3-6张滤纸，再加入硅藻土作为底层；
S2：向萃取池中加入步骤1所得到的天麻和硅藻土的混合物；
S3：向萃取池中加入适量的硅藻土作为表层；
S4：采用甲醇进行萃取；其中，萃取参数为：萃取温度120℃；循环次数1次；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；吹扫时间60s。
3.根据权利要求2所述的天麻中天麻素的含量的测定方法，其特征在于，所述的天麻和硅藻土的混合物的重量为2g，所述的萃取池的体积为10ml。
4.根据权利要求1至3任一所述的天麻中天麻素的含量的测定方法，其特征在于，所述的步骤3具体为：将萃取液倒入蒸发皿中并用少量稀乙醇润洗接收瓶合并萃取液，蒸干；用乙腈和0.05％磷酸水溶液的混合液溶解并稀释至25mL，取2mL在15000r/min下离心3min，取上清液，其中用乙腈和0.05％磷酸水溶液的重量比为2：98。
5.根据权利要求1所述的天麻中天麻素的含量的测定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法通过ASE-350加速溶剂萃取仪进行，高效液相色谱检测的仪器为岛津20AD液相色谱仪。
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