CN101149361A - 一种天麻药材的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
一种天麻药材的鉴别方法,包括以下步骤:(1)建立天麻的标准化学指纹图谱:a.将天麻标准品放入索氏提取器中;b.加入乙醇,置水浴中热回流,用超声波细胞破碎器处理,超声波处理后称重,用相应的溶剂补足减失的重量;重复一次;过滤、浓缩、干燥后,用10%乙腈溶液定容;c.用高效液相色谱仪、Eclipse、XD13-C8色谱柱,10%乙腈溶液作流动相,221±1nm波长光作检测光源,测定天麻标准品的化学指纹图谱;所述的天麻标准化学指纹图谱中有7个明显的峰,保留时间为1.920min的峰为天麻素峰,其它各种天麻的天麻素峰与天麻标准品的最大偏差为1.9%。(2)按步骤(1)的方法测定待测天麻样品和天麻伪品的化学指纹图谱,进行鉴别比较。
Description
技术领域
本发明涉及天麻化学指纹图谱的构建方法及其在天麻鉴定中的应用。
背景技术
天麻是我国四大名贵中药材(冬虫夏草、人参、鹿茸)之一,具有平肝息风、止痉之功效,近年研究发现:天麻还具有增智、健脑、治疗老年性痴呆症、延缓衰老、抗炎、增强免疫功能、降血压,调整心率、增加心输出量等调节心血管的作用,而且毒副作用很小。天麻的主要有效成分是天麻素。天麻素含量高低是判断天麻质量的重要指标。由于野生天麻越来越少,以人工天麻冒充野生天麻,以假天麻冒充真天麻,以非道地天麻冒充道地天麻的事件时有发生。而天麻质量和真伪鉴定通常凭肉眼观察和经验判断。由于缺乏科学鉴定方法,有时甚至将质量最差的天麻判定为最好的天麻。如何高效地鉴定天麻的质量和真伪,特别是采用当今国际公认的鉴定中药质量的有效方法,目前还未见有关报道。因此,研究鉴定天麻质量和真伪的化学指纹图谱技术,并用于天麻鉴定具有十分重要的意义和应用价值。
发明内容
本发明旨在提供一种用天麻化学指纹图谱来对天麻的质量,真伪进行准确鉴别的方法。
本发明的目的是通过下述方式实现的:
本发明包括以下步骤:
(1)建立天麻的标准化学指纹图谱,方法如下:
a、将天麻标准品放入索氏提取器中;
b、加入70%乙醇,回流提取,用超声波细胞破碎器处理20-30min,超声波处理后称重,用相应的溶剂补足减失的重量;重复一次;过滤、浓缩、干燥后,用10%乙腈溶液定容;
c、用高效液相色谱仪、Eclipse、XD13-C8色谱柱,10%乙腈溶液作流动相,221±1nm波长光测定天麻标准品的化学指纹图谱(图3);
所述的天麻标准的化学指纹图谱中保留时间为1.920min是天麻素峰,其它各种天麻的天麻素峰与天麻标准品的最大偏差为1.9%;
(2)、按步(1)的方法测定待测天麻样品和天麻伪品的化学指纹图谱;并与(1)步的天麻标准化学指纹图谱对比鉴别天麻质量、道地性和真伪。
本发明b步中所述的回流提取为在95-100℃水浴中热回流15-25min。
本发明c步中采用的是25℃柱温,20μl进样量,1ml/min流速。
所述的天麻标准化学指纹图谱中有7个明显的峰,根据这些峰出现的先后将它们分别编号为1号峰保留时间为1.295min、2号峰为1.509min、3号峰为1.682min、4号峰为1.920min、5号峰为2.535min、6号峰为3.225min、7号峰为3.415min,其中1、2、4、5、7号峰为所有的天麻样本的共有峰。
天麻的化学指纹图谱中保留时间在1.908~1.939min之间的峰是天麻素峰。
还可以根据天麻素峰面积和其他化学成分峰面积的总和大小对天麻进行进一步鉴定,其中面积越大,其所含物质成分数量越多,其质量越高。
来自不同地区的天麻的化学指纹图谱具有不同的特征和不同数量的波峰,但是,它们在相同位置具有5个共有峰(峰1、2、4、5和7),特别具有非常稳定的天麻素特征峰(峰4),各种天麻的天麻素峰的保留时间在1.908~1.939min之间,与天麻标准化学指纹图谱的天麻素峰的最大偏差为1.9%。
来自同一个省区(云南)的天麻,无论是野生的还是人工种植的都具有十分相似的化学指纹图谱(见图9~11)。来自不同省区天麻的化学指纹图谱明显不同,如云南天麻、东北天麻和湖北天麻的化学指纹图谱明显不同于其他天麻。
天麻的有效化学成分有天麻素、天麻苷元、香草醛、香草醇、倍半萜类、嘌呤类等,其中天麻素是其特有的主要有效成分。根据天麻的天麻素的峰面积,计算其天麻素含量表明:不同地区天麻的天麻素含量差异很大,来自同一地区的野生天麻的天麻素含量比人工种植的天麻高,其他成分含量也高,质量好。
通过本发明的方法,观察和分析得到的不同天麻样本的化学指纹图谱的图形特征、共有峰的有无和多少,天麻素含量的高低,可用于天麻质量的鉴定,不同地区天麻的鉴别(即道地天麻的鉴别);同一地区的野生天麻和人工天麻的鉴别;天麻有效成分天麻素含量的测定;天麻真伪的鉴别;以及用于发现天麻优良种群和最适种植地区。因而本发明是一种很好的国际通用研究鉴定天麻质量和真伪的方法,对天麻鉴定具有十分重要的意义和应用价值。
本发明的优化萃取方法和分离检测条件是通过下列过程获得的。萃取方法中:用电子天平从1种天麻中精确地称取三份样品各2g,分别放入各自的索氏提取器中,分别加入溶剂无水乙醇-异丙醇混合液(1∶1)、甲醇和70%乙醇;置98℃水浴中热回流20min,用超声波细胞破碎器处理25min(超声波处理9s;隔歇2s;振幅功率250w),超声波处理后称重,用相应的溶剂补足减失的重量。重复上述处理过程一次。溶液用滤纸过滤后,浓缩干燥,用流动相10%乙腈水溶液定溶到10ml。用0.45μm滤膜过滤后,用高效液相色谱方法测定样品的化学指纹图谱和天麻素含量。结果表明:以70%乙醇为溶剂萃取天麻化学成分得到的化学指纹图谱有11个明显的峰,天麻素峰面积为8042mAU,各种化学物质峰面积总和为91496mAU;以甲醇为溶剂得到的化学指纹图谱有9个明显的峰,天麻素峰面积为4552mAU,各种化学物质峰面积总和为56615mAU。以无水乙醇-异丙醇混合液为溶剂得到的化学指纹图谱有9个峰,天麻素峰面积为4607mAU,各种化学物质峰面积总和为16522mAU。结论是以70%乙醇为溶剂得到的化学指纹图谱的峰最多,天麻素含量最高,其他化学成分含量(根据它们的峰面积判断)也是最高(见图1)。因为70%乙醇溶剂能将天麻细胞中溶于水和有机溶剂或两种性质兼有的化学物质萃取出来。所以用它作为萃取溶剂可以有效地提高天麻化学成分的萃取率。
天麻化学成分分离和检测条件中:精密地称取2份天麻标准品各0.5g,采用上述优化的萃取方法萃取天麻标准品的化学成分。经滤纸过滤、浓缩、干燥后,分别用10%乙腈、3%甲醇溶液定溶到10ml。滤膜过滤后,分别用Agilent1100高效液相色谱仪、Eclipse、XD13-C8色谱柱(美国制造),10%乙腈溶液和3%甲醇作流动相,25℃柱温,20μl进样量,1ml/min流速,221nm、240nm、254nm、260nm、270nm波长光测定天麻样本的化学指纹图谱和天麻素峰面积。结果表明:以10%乙腈水溶液为流动相,用波长为221nm、240nm、254nm、260nm、270nm的紫外光测定天麻样本,得到的化学指纹图谱(图2)分别有10、7、6、6和6个明显的峰,天麻素峰面积分别为2198、388、286、297和270 mAU。以3%甲醇溶液为流动相,用波长为221nm、240nm、254nm、260nm、270nm的紫外光测定天麻样本,得到的化学指纹图谱分别有4、3、2、2和2个明显的峰,天麻素峰面积分别为1047、136、119、128和102 mAU。结论是:以10%乙腈为流动相、221nm光为光源检测天麻样本得到的波峰最多,天麻素峰面积最大(见图2)。
附图说明
图1用70%乙醇作溶剂处理天麻样品的高效液相色谱图
图2用10%乙腈为流动相和不同波长光测定天麻样本的高效液相色谱图。
图3天麻标准品的化学指纹图谱。它共有7个明显的峰。根据峰出现的先后将它们分别编号为1(1.295min)、2(1.509min)、3(1.682min)、4(1.920min)、5(2.535min)、6(3.225min)、7(3.415min)峰。其中1、2、4、5、7号峰是所有天麻样本的共有峰;其中保留时间为1.920min的是天麻素峰,因为它与天麻素对照品的保留时间相同。
图4四川野生天麻的化学指纹图谱。
图5东北野生天麻的化学指纹图谱。
图6湖北人工天麻的化学指纹图谱。
图7陕西人工天麻的化学指纹图谱。
图8贵州人工天麻的化学指纹图谱。
图9云南野生天麻的化学指纹图谱。
图10云南人工特等天麻的化学指纹图谱。
图11云南人工二等天麻的化学指纹图谱。
图12天麻伪品的化学指纹图谱。
具体实施方式
实施例1
采用优化的萃取方法和分离检测条件测定天麻标准品的化学指纹图谱。即从天麻样本中精确地称取0.5g80目粉末,放入索氏提取器中,然后加入70%乙醇,置98℃水浴中热回流20min,用超声波细胞破碎器处理25min,超声波处理后称重,用相应的溶剂补足减失的重量。重复上述处理过程一次。过滤、浓缩、干燥后,用10%乙腈溶液定溶至10ml。用高效液相色谱仪(Agilent1100,美国制造)、Eclipse、XD13-C8色谱柱,10%乙腈溶液作流动相,25℃柱温,20μl进样量,1ml/min流速,221nm波长光测定天麻标准品的化学指纹图谱。结果见图3。
实施例2
取待测品四川野生天麻、东北野生天麻、湖北人工天麻、陕西人工天麻、贵州人工天麻、云南野生天麻、云南人工天麻,采用实施例1的方法和步骤,得到它们的化学指纹图谱见图4~11。
不同地区天麻的化学指纹图谱具有不同特征和不同数量的波峰。但是,它们在相同位置具有5个共有峰(峰1、2、4、5和7),特别具有非常稳定的天麻素特征峰(峰4)。根据天麻素对照品的保留时间(1.921min)可知[20],图谱中保留时间在1.908~1.939min之间(由22个样本得出的)的峰是天麻素峰,各种天麻的天麻素峰与天麻标准品的最大偏差为1.9%。来自同一个省区的天麻,无论是野生的还是人工种植的都具有十分相似的化学指纹图谱(见图9~11)。来自不同省区的天麻的化学指纹图谱具有明显不同的特征,如云南天麻、东北天麻和湖北天麻的化学指纹图谱明显不同于其他天麻。该技术可以有效地鉴别来自不同地区的天麻。
天麻的有效化学成分有天麻素、天麻苷元、香草醛、香草醇、倍半萜类、嘌呤类等,其中天麻素是它特有的主要有效成分。根据天麻素峰面积计算各种天麻样品的天麻素含量(见表1)。
表1天麻样本的天麻素含量、标准差和峰面积总和及其比较
天麻代号 | 平均天麻素含量(mg/g) | 天麻素含量排序 | 平均峰面积总和(mAU) | 峰面积排序 |
四川野生天麻湖北人工天麻贵州人工天麻陕西人工天麻云南野生天麻云南人工天麻东北野生天麻 | 12.8617±0.190312.3106±0.304710.2363±0.25469.3543±0.21765.6170±0.27862.8555±0.2981.9653±0.976 | 1234567 | 4156936757372039557615434312720758 | 3654127 |
采用非配对两样本平均数差异显著性t检验方法检验了天麻样本的天麻素含量的差异。结果表明:除了四川野生天麻与湖北人工天麻,贵州天麻与陕西天麻之间的天麻素含量没有显著性差异(t值<t0.05,P>0.05)以外。其他天麻之间的天麻素含量均有显著差异(t值>t0.05~t0.001,P<0.05~0.001)。
各种化学成分峰面积的总和反映其含量的多少,峰面积越大,其含量越高。天麻素是天麻特有的主要有效成分,天麻素含量高低是衡量天麻质量高低的重要指标。根据天麻素含量和各种成分峰面积总和的大小进行综合评价发现:
四川野生天麻的天麻素含量(12.895mg/g)最多,各种成分峰面积总和(41569mAU)也比较大,其质量最好。湖北、贵州和陕西人工天麻次之。东北天麻的天麻素含量和各种成分峰面积总和都是最低的,质量最差。云南天麻的天麻素含量较低,但其他成分及其含量最丰富,具有特殊性。来自同一地区的野生天麻的天麻素含量和其他成分总含量比人工种植天麻高,根据这些因素可以区分来自同一地区的野生天麻和人工种植天麻。根据不同地区的天麻质量分析和判断,四川、陕西、贵州和湖北等地区可能比较适合种植天麻。
实施例3
采用实施例1的方法与步骤,测定天麻伪品马铃薯的化学指纹图谱(见图12)。将伪品的化学指纹图谱与天麻标准品和其他真天麻的化学指纹图谱比较,可见伪天麻马铃薯只有5个峰。它们的保留时间分别为:1.356min(峰1),1.558min(2),1.955(3),2.226(4),3.122(5),与天麻标准品的对应峰的偏差分别为:4.71%(对天麻峰1)、3.25%(对2)、3.5%(对4)%、30.9%(对5)和29.3%(对7)。伪天麻与真天麻没有1个共有峰。尤其缺乏所有天麻样本都具有的面积较大的天麻素特征峰(在1.908~1.939min之间)。根据指纹图谱这些特征可以很容易地区分天麻真伪。
Claims (6)
1.一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)建立天麻的标准化学指纹图谱,方法如下:
a、将天麻标准品放入索氏提取器中;
b、加入70%乙醇,回流提取,用超声波细胞破碎器处理20-30min,超声波处理后称重,用相应的溶剂补足减失的重量;重复一次;过滤、浓缩、干燥后,用10%乙腈溶液定容;
c、用高效液相色谱仪、Eclipse、XD13-C8色谱柱,10%乙腈溶液作流动相,221±1nm波长光作检测光源,测定天麻标准品的化学指纹图谱;
所述的天麻标准化学指纹图谱中有7个明显的峰,其中保留时间为1.920min的峰是天麻素峰,其它各种天麻的天麻素峰与天麻标准品的最大偏差为1.9%;
(2)、按步(1)的方法测定待测天麻样品和天麻伪品的化学指纹图谱;并与(1)步的天麻标准化学指纹图谱对比鉴别天麻质量、道地性和真伪。
2.根据权利要求1所述的一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,所述的回流提取为在95-100℃水浴中热回流15-25min
3.根据权利要求1所述的一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,c步中采用的是25℃柱温,20μl进样量,1ml/min流速。
4.根据权利要求1所述的一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,所述天麻标准化学指纹图谱中有7个明显的峰,根据峰出现的先后将它们分别编号为1号峰保留时间为1.295min、2号峰为1.509min、3号峰为1.682min、4号峰为1.920min、5号峰为2.535min、6号峰为3.225min、7号峰为3.415min,其中1、2、4、5、7号峰为所有天麻样本的共有峰。
5.根据权利要求1所述的一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,天麻的化学指纹图谱中保留时间在1.908~1.939min之间的峰是天麻素峰。
6.根据权利要求1所述的一种天麻药材的鉴别方法,其特征在于,根据天麻素峰面积和化学成分峰面积的总和大小对天麻进行进一步鉴定,其中面积越大,其所含物质成分数量越多,其质量越高。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20080326 |