CN103800523A - 一种抗病毒中药组合物的制备方法及指纹图谱的测定方法 - Google Patents
一种抗病毒中药组合物的制备方法及指纹图谱的测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抗病毒中药组合物的制备方法及指纹图谱的测定方法，该方法超声逆流提取法对药材进行提取，并采用超高压液相色谱法测定该中药组合物超声提取液的指纹图谱，该方法符合药物制剂质量控制的要求，可有效控制该中间体的质量。
Description
技术领域
本发明涉及到一种中药组合物的制备方法及指纹图谱的测定方法，属于中药制药领域。
背景技术
现代中药产业化过程中，提取工艺是必不可少的一个重要环节，也是中药生产区别于其他药物生产的一个显著特征。目前中药产业化提取过程中，几乎清一色采用回流提取技术（乙醇提取或水煎煮），但该项技术有其固有缺陷，如提取用溶媒量大，生产成本高，不适合热不稳定性成分提取以及提取效率有限等。随着提取技术的不断发展，连续超声逆流提取技术无论是在生产连续性，大幅度降低生产成本，提高生产自动化程度方面均显示了巨大的优势，有望成为引领行业的提取新技术。但由于部分技术瓶颈的限制，该项技术尚未在中药产业化中大规模推广应用。本项目就是利用连续超声逆流提取技术，对本发明中药组合物的醇提工艺进行优化，解决该技术在中药提取产业化中的共性技术问题，最终实现在中药行业中的大规模推广应用。该项研究将大幅度降低中药生产企业生产成本，提高提取效率，创造良好的社会效益和经济效益。
超高效液相色谱（UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色谱法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。
超高效液相色谱仪尤其对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂，分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。在同样条件下，UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。在同样条件下，UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰。中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。指纹图谱应该具备指纹性，即：（1）专属性强。指所制订的指纹图谱应该是该中药所独有的、能与其它中药相区别的，其反映的化学信息是具有高度的选择性的；（2）稳定性好。即中药的指纹图谱应该是从某中药的多批次中归纳出的共性，图谱中的共有峰或特征峰应相对稳定；（3）重现性好。所制订的指纹图谱在规定条件下应能再现指纹特征（如共有峰数目、大小、位置等），其误差应在允许的范围内。只有这样，所制订的指纹图谱才具有实用价值，才可以有效控制药品的质量。采用UPLC 指纹图谱方法控制药品质量具有灵敏、快速、简便、准确等特点，通过优选色谱条件测定药品制剂的指纹图谱，可以很好控制药品质量。
专利CN03143211.5公开了一种抗病毒中药组合物及制备方法，作为非典型性肺炎的治疗和预防用药，该中药组合物以清瘟解毒、宣肺泄热为原则，适当配伍芳香辟秽、益气扶正，制备这种抗病毒中药组合物有效成份的原料药包括如下重量份的：连翘、金银花、板蓝根、苦杏仁、薄荷脑、鱼腥草、大黄、广藿香、绵马贯众、红景天、麻黄、甘草、石膏。原工艺中麻黄、连翘、大黄、鱼腥草提取工艺为70%乙醇回流提取，提取液出膏率高、耗时耗能，有效成分提取率相对较低。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗病毒中药组合物的制备方法，该制备方法缩短了提取时间、降低了能耗，有效成分的提取率明显提高，同时，本发明人还采用了超高效液相色谱（UPLC）法对该制备工艺进行了质量控制，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300，该制备方法由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄采用连续超声逆流提取；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得的连续超声逆流提取液，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
其中所述步骤（3）的连续超声逆流提取的提取溶媒为50%-85%乙醇，提取时间30-120分钟，超声波频率20-50 kHz。
该制备方法中连续超声逆流提取的参数优选为：提取溶媒为70%乙醇，提取时间60分钟，超声波频率27kHz。
该制备方法中连续超声逆流提取的参数还优选为：提取溶媒为85%乙醇，提取时间30分钟，超声波频率50kHz。
该制备方法中连续超声逆流提取的参数还优选为：提取溶媒为50%乙醇，提取时间120分钟，超声波频率20kHz。
该制备方法中所述中药组合物的重量比例优选为：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 60 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天 60 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
该制备方法中所述中药组合物的重量比例还优选为：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天 60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
该制备方法中所述中药组合物的重量比例：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天 87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277；
该制备方法中所述中药组合物的重量比例还优选为：
连翘 255、金银花255、板蓝根255、大黄51、广藿香85、绵马贯众255、红景天85、 薄荷脑 7.5、麻黄 85、苦杏仁 85 、鱼腥草 255 、甘草 85、石膏255。
本发明的另一个目的是提供上述该中药组合物的制备方法中步骤（3）连续超声逆流提取液的指纹图谱测定方法，色谱条件及测定方法如下：色谱条件：色谱柱为C18柱，柱流速0.2-0.8 ml.min-1，检测波长225-232nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B，4～7min，14%～35%B，7～9.5min，35%～70%B，9.5～12min，70%～75%B，12～12.5min，75%～14%B，12.5～14.5min，14%B；供试品溶液的制备：取超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；测定法：精密吸取供试品溶液0.1-1.5μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
指纹图谱测定方法优选为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；检测波长：228nm；；流速为0.4 ml.min-1；供试品溶液的制备：取超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；测定法：精密吸取供试品溶液0.4μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
一、连续超声逆流提取工艺考察
1 试验条件：
1.1 仪器设备
1.1.1 连续超声逆流提取成套设备：型号：GDC-TQ/3/C2N1（济宁金百特工程机械有限公司）
工作原理：连续超声逆流提取技术是基于高效的连续逆流浸出原理并叠加超声强化提取原理，在连续逆流提取设备基础上增加了独特设计的超声波强化提取装置。动态逆流提取技术，药材与溶剂在浸出容器中沿相反方向运动，连续而充分地进行接触提取，尽量在提取过程中创造有效的浓度差，从而增加提取效率。此外，超声提取技术是利用超声波在提取介质中产生空化效应和多级效应，使细胞壁破壁，从而大大提高药物有效成分的溶出扩散过程，因此也大大提高了提取效率。
分析仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪，METTLER TOLEDO AG135型电子天平。
试剂与对照品连翘苷（批号：110821-201112），连翘酯苷A（批号：111810-201001），大黄素（批号：110756-200110），大黄酚（批号：110796-201017），大黄素甲醚对照品（批号：110758-201013）均购于中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；其它试剂均为分析纯。
药材麻黄、连翘、大黄、鱼腥草药材购于安徽井泉集团中药饮片有限公司，经石家庄以岭药业股份有限公司质检科检验，均符合《中国药典》2010版(一部)有关项下规定。
评价指标测定方法
2.1 出膏率测定：取不同提取工艺下制备的醇提液，回收乙醇经减压浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。
有效成分含量测定方法
2.2.1连翘酯苷A含量测定方法按《中国药典》2010版一部收载的高效液相色谱法测定，色谱柱：Waters Symmetry C18 5μm 4.6*250mm，流动相：乙腈-0.4%冰乙酸(15:85)，检测波长：330 nm，流速：1 mL·min-1，柱温：25℃，进样量：10 μL，理论板数按连翘酯苷A峰计算应不低于5000。
连翘苷含量测定方法按《中国药典》2010版一部收载的高效液相色谱法测定，色谱柱：Waters Symmetry C18 5μm 4.6*250mm，流动相：乙腈-水（25:75)，检测波长：277nm，流速：1 mL·min-1，柱温：25℃，进样量：10 μL，理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量测定方法按《中国药典》2010版一部收载的高效液相色谱法测定，色谱柱：资生堂 C18 5μm 4.6*250mm，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶(85:15)，检测波长为254nm，流速：1 mL·min-1，柱温：25℃，进样量：10 μL，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
超声逆流提取工艺参数考察
[0026]3.1 连续超声逆流提取溶媒考察
按处方比例称取麻黄、连翘、大黄、鱼腥草，五份，分别用50%、60%、70%、80%、85%乙醇进行超声逆流提取，提取时间分别设定60min，收集提取液，回收乙醇，减压真空浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。测定不同样品中连翘酯苷A、连翘苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。
表1提取溶媒考察结果
| 试验号 | 提取溶媒 | 连翘酯苷A（g） | 连翘苷（g） | 大黄素（g） | 大黄酚（g） | 大黄素甲醚（g） | 出膏率（%） |
| 1 | 50%乙醇 | 173.3 | 102.4 | 23.1 | 50.2 | 9.31 | 12.08 |
| 2 | 60%乙醇 | 200.2 | 120.3 | 26.4 | 56.3 | 11.2 | 11.73 |
| 3 | 70%乙醇 | 208.4 | 125.3 | 29.1 | 59.2 | 12.5 | 11.12 |
| 4 | 80%乙醇 | 202.5 | 127.3 | 28.0 | 57.9 | 12.1 | 10.70 |
| 5 | 85%乙醇 | 203.1 | 126.9 | 28.1 | 58.2 | 12.3 | 10.59 |
研究结果显示，以70%乙醇为溶媒超声提取时，各指标成分的含量较高；以85%乙醇为溶媒超声提取时，出膏率最小。
连续超声逆流提取超声波频率考察
按照处方比例称取麻黄、连翘、大黄、鱼腥草， 五份，分别用70%乙醇进行超声逆流提取，提取时间设定为60min，超声波频率分别设定为20 kHz，27 kHz，35 kHz，40 kHz，50 kHz，分别收集提取液，回收乙醇，减压真空浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。测定不同样品中连翘酯苷A、连翘苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。
表2超声波频率考察结果
| 试验号 | 超声波频率（kHz） | 连翘酯苷A（g） | 连翘（g） | 大黄素（g） | 大黄酚（g） | 大黄素甲醚（g） | 出膏率（%） |
| 1 | 20 | 183.1 | 112.4 | 25.2 | 55.3 | 9.80 | 10.32 |
| 2 | 27 | 186.2 | 126.9 | 28.4 | 57.8 | 12.22 | 10.63 |
| 3 | 35 | 199.5 | 128.3 | 26.9 | 56.2 | 11.87 | 11.02 |
| 4 | 40 | 198.7 | 127.7 | 28.1 | 57.0 | 11.33 | 12.10 |
| 5 | 50 | 200.6 | 130.9 | 28.6 | 57.2 | 12.65 | 11.59 |
研究结果显示，超声功率为27 kHz时各指标成分含量较高，超声功率为20 kHz时出膏率较小。
连续超声逆流提取时间考察
按照处方比例称取麻黄、连翘、大黄、鱼腥草， 五份，分别用70%乙醇进行超声逆流提取，提取时间设定为60min，提取时间分别设定为30min，60min，90min，120min，分别收集提取液，回收乙醇，减压真空浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。测定不同样品中连翘酯苷A、连翘苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。
表3提取时间考察结果
| 试验号 | 提取时间（min） | 连翘酯苷A（g） | 连翘苷（g） | 大黄素（g） | 大黄酚（g） | 大黄素甲醚（g） | 出膏率（%） |
| 1 | 30 | 163.8 | 92.4 | 20.0 | 48.2 | 7.31 | 9.08 |
| 2 | 60 | 190.2 | 110.6 | 23.4 | 52.3 | 10.2 | 10.73 |
| 3 | 90 | 208.9 | 115.5 | 29.8 | 57.5 | 11.5 | 11.15 |
| 4 | 120 | 208.5 | 117.7 | 30.1 | 57.9 | 12.1 | 11.80 |
研究结果显示，连续超声逆流提取120min时各指标成分含量较高。
原回流提取工艺与连续超声逆流提取工艺比较：比较原回流提取工艺与连续超声逆流提取在提取效果上的差异，测定出膏量、有效成分含量、提取溶媒消耗量及提取时间。
评价指标
1) 出膏量——是否有效提高提取率；
2) 有效成分含量——连翘苷、连翘酯苷A、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚；评价采用该提取工艺后是否会提高有效成分含量；
3) 提取溶媒用量——评判中药提取工艺生产成本、是否减少能耗和环境污染。
本发明中药组合物中麻黄、连翘、大黄、鱼腥草原提取工艺为70%乙醇回流提取，与新工艺为70%乙醇连续超声逆流提取比较，按处方比例投相同量的药材，分别采用加热回流提取和连续超声逆流提取，比较两种不同提取工艺下出膏率、连翘酯苷A、连翘苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量、提取时间及其所耗提取溶媒量。
样品制备
4.1.1 70%乙醇回流提取工艺样品的制备平行制备3份样品，每份按处方量取麻黄42.5kg、连翘127.5kg、大黄25.5kg、鱼腥草127.5kg，共计323kg，加70%乙醇8倍量，回流提取2次，第一次2h，第二次1.5h，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。
乙醇连续超声逆流提取样品的制备平行制备3份样品，每份按处方量取麻黄42.5kg、连翘127.5kg、大黄25.5kg、鱼腥草127.5kg，共计323kg，粉碎过40目，加70%乙醇，超声提取（超声波频率27 kHz，超声时间60 min，进料速度150 kg/h，进溶媒速度1500 L/h），超声完成后，回收乙醇，减压真空浓缩，干燥，得干膏，称重，计算出膏率。
试验结果
4.2.1不同提取工艺对出膏量的影响
本发明中药组合物中该四味药原提取工艺为70%乙醇回流提取，新工艺为70%乙醇连续超声逆流提取，按处方比例投相同量的各药材，分别采用70%乙醇加热回流提取和70%乙醇连续超声逆流提取，比较两种提取条件下出膏率，结果见表4。
表4不同醇提工艺样品出膏率测定结果
| 批号 | 提取方式 | 投料量（kg） | 出膏率（%） |
| 样品1 | 回流提取 | 323 | 17.0 |
| 样品2 | 回流提取 | 323 | 18.3 |
| 样品3 | 回流提取 | 323 | 18.7 |
| 样品4 | 连续超声逆流提取 | 323 | 11.8 |
| 样品5 | 连续超声逆流提取 | 323 | 12.7 |
| 样品6 | 连续超声逆流提取 | 323 | 11.6 |
从上表结果可以看出，回流提取样品的出膏率高于连续超声逆流提取。
不同提工艺对有效成分含量的影响
各批样品的投料量以及主要有效成分的含量测定结果见表5。
表5连翘酯苷A和连翘苷含量测定结果
| 批号 | 提取方式 | 投料量（kg） | 连翘酯苷A（g） | 连翘苷（g） | 大黄素（g） | 大黄酚（g） | 大黄素甲醚（g） |
| 样品1 | 回流提取 | 323 | 181.6 | 106.3 | 22.6 | 45.6 | 10.3 |
| 样品2 | 回流提取 | 323 | 185.7 | 108.8 | 20.7 | 46.1 | 10.5 |
| 样品3 | 回流提取 | 323 | 184.2 | 104.2 | 21.6 | 46.7 | 9.42 |
| 样品4 | 超声逆流提取 | 323 | 190.6 | 118.2 | 24.9 | 52.2 | 10.7 |
| 样品5 | 超声逆流提取 | 323 | 193.2 | 114.5 | 23.5 | 51.6 | 10.0 |
| 样品6 | 超声逆流提取 | 323 | 193.6 | 120.1 | 24.5 | 51.8 | 10.3 |
从上表可以看出，在投料量相同的情况下，连续超声逆流提取样品中连翘酯苷A、连翘苷、大黄酸的含量稍高于加热回流提取样品，采用连续超声逆流提取效果较好。
不同提取工艺耗用提取溶媒量和提取时间的比较
在投料量相同的条件下，两种提取方式所需的总提取时间及70%乙醇的耗用量见下表。
表6 不同提取工艺耗用提取溶媒量及时间的比较
| 批号 | 提取方式 | 投料量（kg） | 总提取时间(h) | 70%乙醇耗用量（L） |
| 样品1 | 回流提取 | 323 | 7 | 517 |
| 样品2 | 回流提取 | 323 | 7 | 517 |
| 样品3 | 回流提取 | 323 | 7 | 517 |
| 样品4 | 连续超声逆流提取 | 323 | 3 | 324 |
| 样品5 | 连续超声逆流提取 | 323 | 3 | 351 |
| 样品6 | 连续超声逆流提取 | 323 | 3 | 312 |
从上表中可看出，70%乙醇连续超声逆流提取工艺较加热回流提取节省约2/5乙醇耗用量，且提取时间大大缩短。
二、连续超声逆流提取液的指纹图谱测定：本发明方法测定该中药组合物连续超声逆流提取液的指纹图谱从多个方面评价该方法的可行性，评价方法如下：
1、仪器与试药
ACQUITY UPLC HCLASS超高效液相色谱仪(美国Waters公司，包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Empower3色谱工作站)；AT2011/10万分析天平(瑞士METTLERTOLEDO)。
色谱柱：ACQUITY UPLCBEH C18（2.1mm×100mm，1.7μm）；Milli-QAdvantage A10超纯水系统（millipore）。磷酸（色谱级，批号20120211，天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙腈（色谱级，美国Fisher）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。本发明中药组合物超声逆流提液（批号：S1:120327, S2:120401, S3:120402, S4:120403, S5:120404, S6:120405, S7:1200406, S8:120407, S9:120408, S10:120409, S11:120410）；连翘酯苷A（批号：111810-201102）、连翘苷（批号：110821 -201112）、大黄酸（批号：110757-200206）均购于中国食品药品检定研究院，松脂素-4-O-glc对照品为自制,经HPLC分析纯度大于95%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为ACQUITY UPLC 
BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流速0.4 ml.min-1，检测波长228nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B，4～7min，14%～35%B，7～9.5min，35%～70%B，9.5～12min，70%～75%B，12～12.5min，75%～14%B，12.5～14.5min，14%B；
2.2 对照品溶液制备
分别取连翘酯苷A、连翘苷、松脂素-4-O-glc、大黄酸适量，精密称定，用甲醇配制成含连翘酯苷A 0.12 mg.mL-1，连翘苷0.13 mg.mL-1，松脂素-4-O-glc 0.09 mg.mL-1，大黄酸 0.10 mg.mL-1的溶液。
2.3 供试品溶液制备：按处方量取麻黄、连翘、大黄、鱼腥草，加70%乙醇，浸泡20 min，超声逆流提取，取超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得。
测定法：精密吸取供试品溶液0.4μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 仪器精密度试验
取同一样品的供试品液（120327）在上述色谱条件下重复进样6次，记录指纹图谱。
结果表明，各色谱峰的相对保留时间的RSD＜1.1%、相对峰面积的RSD＜2%。
表明仪器精密度良好。
稳定性试验
吸取同一供试品溶液，分别于0，2，6，12，24h进样，测定峰面积，结果表明，各色谱峰的相对保留时间的RSD＜1.2%、相对峰面积的RSD＜1.8%。
综合分析，超声逆流提液在常温下24h内稳定。
重复性试验
取同一供试品6份，按2.3的方法制备样品，进行指纹图谱分析。
结果表明，各色谱峰的相对保留时间的RSD＜1.4%、相对峰面积的RSD＜2.1%。
表明方法的重复性良好。
指纹图谱的建立及相似度分析
2.5.1指纹图谱建立
取11批超声逆流提取液，进行UPLC指纹图谱测定，得到相应的指纹图谱，见图1。并采用国家药典委员会开发的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对11批样品的指纹图谱进行分析，以S6为参照指纹图谱（图2）采用平均数相关系数法对各指纹图谱色谱峰进行了多点校正和自动匹配，其中共有色谱峰27个，用标准品指认了其中4个共有峰，分别为连翘酯苷A（8号峰）、连翘苷（17号峰）、松脂素-4-O-glc（10号峰）、大黄酸（24号峰），以出峰稳定，峰面积较大的17号色谱峰-连翘苷为参照峰。
指纹图谱相似度计算
将11批超声逆流提取液的UPLC指纹图谱导入国家药典委员会2004年版“计算机辅助相似度评价系统”软件中，进以S6为参照指纹图谱（图2），采用平均数相关系数法对各指纹图谱色谱峰进行了多点校正和自动匹配，生成本发明中药组合物超声逆流提取液共有模式的对照指纹图谱（R），然后进行了相似度计算，11批超声逆流提取液指纹图谱与对照指纹图谱的相似度见表7。
表7十一批超声逆流提取液指纹图谱相似度表
| S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | S10 | S11 | R | |
| S1 | 1.000 | 0.995 | 0.998 | 0.999 | 0.999 | 0.998 | 0.998 | 0.996 | 0.999 | 0.999 | 0.999 | 0.999 |
| S2 | 0.995 | 1.000 | 0.999 | 0.996 | 0.998 | 0.998 | 0.999 | 0.984 | 0.994 | 0.998 | 0.995 | 0.997 |
| S3 | 0.998 | 0.999 | 1.000 | 0.998 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 0.990 | 0.997 | 1.000 | 0.998 | 0.999 |
| S4 | 0.999 | 0.996 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 0.999 | 0.998 | 0.995 | 0.999 | 0.999 | 1.000 | 1.000 |
| S5 | 0.999 | 0.998 | 0.999 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 0.999 | 0.992 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 1.000 |
| S6 | 0.998 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.991 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 1.000 |
| S7 | 0.998 | 0.999 | 1.000 | 0.998 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 0.991 | 0.998 | 1.000 | 0.998 | 0.999 |
| S8 | 0.996 | 0.984 | 0.990 | 0.995 | 0.992 | 0.991 | 0.991 | 1.000 | 0.997 | 0.992 | 0.994 | 0.994 |
| S9 | 0.999 | 0.994 | 0.997 | 0.999 | 0.998 | 0.998 | 0.998 | 0.997 | 1.000 | 0.998 | 0.998 | 0.999 |
| S10 | 0.999 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.992 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 1.000 |
| S11 | 0.999 | 0.995 | 0.998 | 1.000 | 0.999 | 0.999 | 0.998 | 0.994 | 0.998 | 0.999 | 1.000 | 0.999 |
| R | 0.999 | 0.997 | 0.999 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.999 | 0.994 | 0.999 | 1.000 | 0.999 | 1.000 |
3其他研究：
[0029] 发明人还考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-0.15%磷酸、乙腈-0.1%甲酸、甲醇-0.1%甲酸、乙腈-0.2%磷酸7个流动相系统，结果表明乙腈-0.1%磷酸流动相系统的色谱图中出峰较多，各峰分离度较好，基线平稳，且条件温和有利于指纹图谱的分析，因此最终采用乙腈-0.1%磷酸流动相系统。
发明人还考察了225-232 nm的色谱图，结果表明228 nm的色谱图中色谱峰较多，故确定检测波长为228 nm；本实验还考察不同分析流速：0.2-0.8ml·min-1，结果表明流速为0.4 ml·min-1时色谱图中出峰较多，各峰分离度及峰形较好，分析时间适中，但不限制在这些参数范围，因为在这些参数范围内，也可能实现本发明的目的。
本发明建立了连续超声逆流提取的UPLC指纹图谱，标定了27个共有峰，指认了其中4个共有峰，11批本发明中药组合物超声逆流提液指纹图谱的相似度均在0.991～1.000之间。
本方法具有良好的精密度和稳定性，以及重复性，为提高该中药组合物的质量控制提供一种新方法。
附图说明
图1 11批本发明中药组合物超声逆流提取液UPLC指纹图谱。
图2 本发明中药组合物超声逆流提取液指纹图谱(实施例1)。
图3 本发明中药组合物超声逆流提取液指纹图谱(实施例2)。
图4 本发明中药组合物超声逆流提取液指纹图谱(实施例3)。
图5 本发明中药组合物超声逆流提取液指纹图谱(实施例4)。
具体实施方式
实施例1
处方：
连翘 200g、金银花 300 g、板蓝根 200 g、大黄 60 g 、广藿香 60 g、绵马贯众 300 g 、红景天 60 g 、薄荷脑 9 g 、麻黄 60 g 、苦杏仁 100 g、鱼腥草 200 g 、甘草 100 g、石膏200 g。
制备方法：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，超声逆流提取，提取溶媒为70%乙醇，提取时间60分钟，超声波频率27kHz，收集连续超声逆流提取液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入炒苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得超声逆流提取液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
[0066] 上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液指纹图谱测定方法：
色谱柱为ACQUITY UPLC 
BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流速0.4 ml.min-1，检测波长228nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B；4～7min，14%～35%B；7～9.5min，35%～70%B；9.5～12min，70%～75%B；12～12.5min，75%～14%B；12.5～14.5min，14%B；
对照品溶液的配置： 分别取连翘酯苷A、连翘苷、松脂素-4-O-glc、大黄酸适量，精密称定，用甲醇配制成含连翘酯苷A 0.12 mg.mL-1，连翘苷0.13 mg.mL-1，松脂素-4-O-glc 0.09 mg.mL-1，大黄酸 0.10 mg.mL-1的溶液。
供试品溶液的配制：取上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.4μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
评价结果：
评价结果表
| 精密度RSD(%) | 重复性RSD(%) | 溶液稳定性RSD(%) | |
| 结果 | 2.0 | 2.8 | 1.8 |
结论：提取液的指纹图谱见图2，结果令人满意可以用于控制上述提取液的质量。
实施例2
处方：
连翘 300 g、金银花 200 g 、板蓝根 300 g、大黄 60 g、广藿香100 g、绵马贯众 200 g、红景天 60 g、薄荷脑 5 g 、麻黄100 g、苦杏仁 60 g、鱼腥草 300 g、甘草 60 g 、石膏 300 g。
制备方法：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，超声逆流提取，提取溶媒为85%乙醇，提取时间30分钟，超声波频率50kHz，收集连续超声逆流提取液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7倍量水煎煮至沸，加入炒苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得超声逆流提取液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
[0070] 上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液指纹图谱测定方法：
色色谱柱为ACQUITY UPLC 
BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流速0.8 ml.min-1，检测波长225nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B；4～7min，14%～35%B；7～9.5min，35%～70%B；9.5～12min，70%～75%B；12～12.5min，75%～14%B；12.5～14.5min，14%B；
对照品溶液的配置： 分别取连翘酯苷A、连翘苷、松脂素-4-O-glc、大黄酸适量，精密称定，用甲醇配制成含连翘酯苷A 0.12 mg.mL-1，连翘苷0.13 mg.mL-1，松脂素-4-O-glc 0.09 mg.mL-1，大黄酸 0.10 mg.mL-1的溶液。
供试品溶液的配制：取上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.1μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
评价结果：
评价结果表
| 精密度RSD(%) | 重复性RSD(%) | 溶液稳定性RSD(%) | |
| 结果 | 2.2 | 2.5 | 2.1 |
结论：提取液的指纹图谱见图3，结果令人满意可以用于控制上述提取液的质量。
实施例3
处方：
连翘 278 g 、金银花 294 g、板蓝根 285 g、大黄 55 g、广藿香 95 g、绵马贯众 290 g 、红景天 87 g、薄荷脑 8.5 g、麻黄 88 g、苦杏仁 80 g、鱼腥草 284 g、甘草 95 g 、石膏277 g。
制备方法：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，，超声逆流提取，药材过24目，提取溶媒为50%乙醇，提取时间120分钟，超声波频率20kHz，收集连续超声逆流提取液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入炒苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得超声逆流提取液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液指纹图谱测定方法：
色谱柱为ACQUITY UPLC 
BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流速0.2 ml.min-1，检测波长232nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B；4～7min，14%～35%B；7～9.5min，35%～70%B；9.5～12min，70%～75%B；12～12.5min，75%～14%B；12.5～14.5min，14%B；
对照品溶液的配置： 分别取连翘酯苷A、连翘苷、松脂素-4-O-glc、大黄酸适量，精密称定，用甲醇配制成含连翘酯苷A 0.12 mg.mL-1，连翘苷0.13 mg.mL-1，松脂素-4-O-glc 0.09 mg.mL-1，大黄酸 0.10 mg.mL-1的溶液。
供试品溶液的配制：取上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.4μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
评价结果：
评价结果表
| 精密度RSD(%) | 重复性RSD(%) | 溶液稳定性RSD(%) | |
| 结果 | 2.9 | 2.8 | 2.6 |
结论：提取液指纹图谱见图4，结果令人满意可以用于控制上提取液的质量。
实施例4
处方：
连翘 255 g、金银花255 g、板蓝根255 g、大黄51 g、广藿香85 g、绵马贯众255 g、红景天85 g、 薄荷脑 7.5 g、麻黄 85 g、苦杏仁 85 g、鱼腥草 255 g、甘草 85 g、石膏255 g。
制备方法：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，超声逆流提取，药材过60目，提取溶媒为60%乙醇，提取时间90分钟，超声波频率40kHz，收集连续超声逆流提取液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入炒苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得超声逆流提取液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液指纹图谱测定方法：
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T3 C18，规格为2.1mm×100mm，1.8μm；流速0.7 ml.min-1，检测波长230nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B；4～7min，14%～35%B；7～9.5min，35%～70%B；9.5～12min，70%～75%B；12～12.5min，75%～14%B；12.5～14.5min，14%B；
对照品溶液的配置： 分别取连翘酯苷A、连翘苷、松脂素-4-O-glc、大黄酸适量，精密称定，用甲醇配制成含连翘酯苷A 0.12 mg.mL-1，连翘苷0.13 mg.mL-1，松脂素-4-O-glc 0.09 mg.mL-1，大黄酸 0.10 mg.mL-1的溶液。
供试品溶液的配制：取上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.6μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
评价结果：
评价结果表
| 精密度RSD(%) | 重复性RSD(%) | 溶液稳定性RSD(%) | |
| 结果 | 2.4 | 2.1 | 2.3 |
结论：提取液指纹图谱见图5，结果令人满意可以用于控制上提取液的质量。
Claims (10)
1.一种抗病毒中药组合物的制备方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300，该制备方法由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄采用连续超声逆流提取，得连续超声逆流提取液；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得的连续超声逆流提取液，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
（6）步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分；
其特征在于：所述步骤（3）的连续超声逆流提取的提取溶媒为50%-85%乙醇，提取时间30-120分钟，超声波频率20-50 kHz。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述连续超声逆流提取的提取溶媒为70%乙醇，提取时间60分钟，超声波频率27kHz。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述连续超声逆流提取的提取溶媒为85%乙醇，提取时间30分钟，超声波频率50kHz。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述连续超声逆流提取的提取溶媒为50%乙醇，提取时间120分钟，超声波频率20kHz。
5.如权利要求1-4中任一所述的制备方法，其特征在于所述中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 60 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天 60 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
6.如权利要求1-4中任一所述的制备方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天 60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
7.如权利要求1-4中任一所述的制备方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天 87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277。
8.如权利要求1-4中任一所述的制备方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 255、金银花255、板蓝根255、大黄51、广藿香85、绵马贯众255、红景天85、 薄荷脑 7.5、麻黄 85、苦杏仁 85 、鱼腥草 255 、甘草 85、石膏255。
9.如权利要求1-4中任一所述制备方法中步骤（3）所得连续超声逆流提取液的指纹图谱测定方法，其特征在于：色谱条件及测定方法如下：
色谱条件：色谱柱为C18柱，柱流速0.2-0.8 ml.min-1，检测波长225-232nm，流动相B为乙腈，A为0.1%磷酸；梯度洗脱：0～4min，14%～14%B；4～7min，14%～35%B；7～9.5min，35%～70%B；9.5～12min，70%～75%B；12～12.5min，75%～14%B；12.5～14.5min，14%B；
供试品溶液的制备：取权利要求1-4中任一所述制备方法中的步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.1-1.5μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
10.如权利要求9所述的指纹图谱测定方法，其特征在于所述色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，色谱柱规格：2.1mm×100mm，1.7μm；检测波长：228nm；流速为0.4 ml.min-1；
供试品溶液的制备：取上述制备方法中步骤（3）中超声逆流提取液，用0.22 μm 滤膜过滤，即得；
测定法：精密吸取供试品溶液0.4μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103800523B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105748989A (zh) * | 2016-03-14 | 2016-07-13 | 赵剑锋 | 一种抗菌抗病毒的组合物及其制备方法 |
| CN105929096A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-09-07 | 上海医药集团青岛国风药业股份有限公司 | 一种治疗感冒药物的hplc指纹图谱的建立方法 |
| CN107091887A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-08-25 | 哈尔滨珍宝制药有限公司 | 一种金银花配方颗粒的特征图谱的检测方法及质量控制方法 |
| WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
| WO2017148418A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的含量测定方法 |
| CN109239251A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-18 | 无锡济民可信山禾药业股份有限公司 | 黄氏响声丸hplc—elsd指纹图谱的测定方法 |
| KR20200040886A (ko) * | 2017-09-05 | 2020-04-20 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
| EP3537147A4 (en) * | 2016-11-03 | 2020-07-01 | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | METHOD FOR DETERMINING THE MENTHOL CONTENT IN THE PRODUCTION OF A COMPOSITION FROM TRADITIONAL CHINESE MEDICINE |
| WO2022237145A1 (zh) * | 2021-05-11 | 2022-11-17 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物在制备抗s蛋白d614g突变型新冠病毒药物中的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1483463A (zh) * | 2003-07-01 | 2004-03-24 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种抗病毒中药组合物及制备方法 |
-
2012
- 2012-11-13 CN CN201210450660.0A patent/CN103800523B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1483463A (zh) * | 2003-07-01 | 2004-03-24 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种抗病毒中药组合物及制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 曹雁平等: "多频超声连续逆流浸取黄芩中的黄芩苷", 《食品科学》 * |
| 郭志雄: "超声波连续逆流提取在中药生产中的运用", 《医药工程设计》 * |
| 颜志红: "超声微波连续逆流提取、微波灭菌、真空带式干燥技术及设备的特点", 《机电信息》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
| WO2017148418A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的含量测定方法 |
| CN107153098A (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-12 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
| CN105748989A (zh) * | 2016-03-14 | 2016-07-13 | 赵剑锋 | 一种抗菌抗病毒的组合物及其制备方法 |
| CN105929096A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-09-07 | 上海医药集团青岛国风药业股份有限公司 | 一种治疗感冒药物的hplc指纹图谱的建立方法 |
| EP3537147A4 (en) * | 2016-11-03 | 2020-07-01 | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | METHOD FOR DETERMINING THE MENTHOL CONTENT IN THE PRODUCTION OF A COMPOSITION FROM TRADITIONAL CHINESE MEDICINE |
| US11333637B2 (en) | 2016-11-03 | 2022-05-17 | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for determining content of menthol in preparation of traditional Chinese medicine composition |
| CN107091887A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-08-25 | 哈尔滨珍宝制药有限公司 | 一种金银花配方颗粒的特征图谱的检测方法及质量控制方法 |
| EP3680248A4 (en) * | 2017-09-05 | 2021-06-16 | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | PROCEDURE FOR SEPARATING EIGHTEEN COMPONENTS IN A COMPOSITION OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE |
| KR20200040886A (ko) * | 2017-09-05 | 2020-04-20 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
| KR102404533B1 (ko) | 2017-09-05 | 2022-06-02 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
| CN109239251A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-18 | 无锡济民可信山禾药业股份有限公司 | 黄氏响声丸hplc—elsd指纹图谱的测定方法 |
| WO2022237145A1 (zh) * | 2021-05-11 | 2022-11-17 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物在制备抗s蛋白d614g突变型新冠病毒药物中的应用 |
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