CN105699562B - 一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。

Description

一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法
技术领域
本发明涉及实验室检测领域，特别是一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法。
背景技术
2015年药典记录了提取威灵仙中齐墩果酸的方法：取本品粉末(过四号筛)约4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯适量，加热回流3小时，弃去乙酸乙酯液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒转移至锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。照高效液相色谱法(附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(90：10)为流动相；检测波长为205nm。理论板数按齐墩果酸峰和常春藤皂苷元峰计算均应不低于3000。
药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
发明内容
本发明的目的是提供一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。
本发明提供的技术方案为：一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法，包括以下步骤：
步骤1：将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；
步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析；
其中，液相色谱法的分析条件为：
a)仪器：双三元液相
b)色谱柱规格：2.1*150mm,3μm
c)柱温：20℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：乙腈-水，体积比62：38
f)检测波长：205nm。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，所述的步骤1具体为：
S11：将威灵仙粉碎后，过筛；
S12：称取1重量份威灵仙粉，与适量石英砂混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中先加入1重量份硅藻土，后加入混合均匀的样品，混合均匀后加入适量的石英砂至达到萃取池口水平线下2mm；盖上萃取池的盖子；
S14：对萃取池内的混合物进行除杂；
除杂条件为：萃取溶剂为乙酸乙酯；萃取温度120℃；静态萃取时间3min；冲洗体积100％；静态循环次数2次；
S15：S14结束后，对萃取池内的混合物进行提取；提取结束后得到萃取液；
提取条件为：萃取溶剂为稀乙醇；萃取温度100℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数3次；所述的稀乙醇为C2H5OH的体积百分数在20℃时为49.5％～50.5％。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，S14和S15中静态萃取的压力均为1500psi。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，S14和S15中静态萃取的吹扫时间均为60s。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，步骤2具体为：将萃取液置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液使其溶解，加热回流2小时后立即冷却，移入分液漏斗中，用水分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙酯振摇提取3次，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，所述的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，所述的色谱柱为Thermo AcclaimC30。
在上述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明的检测方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
附图说明
图1为本发明的色谱分析有效性验证的直角坐标图；
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
将威灵仙经粉碎机粉碎，过三号筛，约1g，精密称定，与适量石英砂混合均匀，待用，在预先放好过滤膜的10ml萃取池中先加入1g硅藻土，后加入混合均匀的样品，混合均匀后再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线下2mm处，拧紧萃取池上盖。萃取(包括除杂和提取2步，见ASE条件方法)结束后，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定即得。
萃取条件(见表1)为：
表1
分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
a)仪器：Thermo U-3000双三元液相液相色谱仪
b)色谱柱：Thermo Acclaim C30 2.1*150mm,3μm即碳30色谱柱，直径2.1mm，长度150mm，粒径3微米；
c)柱温：20℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：乙腈-水(体积比62：38)
f)检测波长：205nm
色谱分析有效性验证：
取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得墩果酸对照品。
取齐墩果酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含齐墩果酸1mg的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、0.8μl、1.0μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表2。附图1与表2对应，附图1横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。
表2
1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
取相同批号的样品(批号：150410(Z))1.0g，共6份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中齐墩果酸的含量见表二，RSD为2.0％，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表3。
表3
1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对威灵仙进行萃取，威灵仙为3批，批号分别为150410(Y)，1510124,150410(Z)；
实施例1的ASE萃取方法对同一批次的威灵仙平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
具体测试结果见下表4；
表4
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；
步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析；
其中，液相色谱法的分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱规格：碳30色谱柱，2.1*150mm,3μm
c)柱温：20℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：乙腈-水，体积比62：38
f)检测波长：205nm；
所述的步骤1具体为：
S11：将威灵仙粉碎后，过筛；
S12：称取1重量份威灵仙粉，与适量石英砂混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中先加入1重量份硅藻土，后加入混合均匀的样品，混合均匀后加入适量的石英砂至达到萃取池口水平线下2mm；盖上萃取池的盖子；
S14：对萃取池内的混合物进行除杂；
除杂条件为：萃取溶剂为乙酸乙酯；萃取温度120℃；静态萃取时间3min；冲洗体积100％；静态循环次数2次；
S15：S14结束后，对萃取池内的混合物进行提取；提取结束后得到萃取液；
提取条件为：萃取溶剂为稀乙醇；萃取温度100℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数3次；所述的稀乙醇为C2H5OH的体积百分数在20℃时为49.5％～50.5％。
2.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，所述的萃取池的体积为10ml。
3.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，S14和S15中静态萃取的压力均为1500psi。
4.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，S14和S15中静态萃取的吹扫时间均为60s。
5.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，步骤2具体为：将萃取液置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液使其溶解，加热回流2小时后立即冷却，移入分液漏斗中，用水分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙酯振摇提取3次，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液。
6.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，所述的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。
7.根据权利要求6所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，所述的色谱柱为Thermo Acclaim C30。
8.根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸的测定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
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