CN108169357A - 一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，属于化学检测领域。旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，本发明采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用甲醇萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；再采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。本发明用于测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷。

Description

一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法
技术领域
本发明属于化学检测领域，尤其是一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。
背景技术
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为：取本品约3g，剪成碎片，揉成絮状，取约2g，精密称定，置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6小时，弃去甲醇液，药渣挥去甲醇，再置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6小时提取液回收甲醇至适量，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法萃取时间长达12小时，操作非常不便。
专利申请号为“201510238784.6”的申请文件中所记载的制备供试品的方法为：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；将硅藻土和过筛后的粉末等重量比混合，装于10ml的萃取池中；在萃取池中加入正己烷静态萃取，正己烷萃取液舍弃；在萃取池中加入甲醇静态萃取，收集并采用甲醇定容至50ml，过滤，得到甲醇萃取液。也就是说，该对比文件采用正己烷使用ASE萃取除杂。但是在该方法的使用过程中，杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。
发明内容
针对上述不足，本发明旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。
为了解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案是这样的：一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用甲醇萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。
进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；
步骤S2：装于索氏提取器中，加入甲醇，加热回流6小时，甲醇萃取液舍弃；
步骤S3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。
进一步的，所述的步骤S4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。
进一步的，所述的ASE萃取方法采用美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪进行。
进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Syncronis C18，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，流动相为甲醇-水，检测波长为277nm。
进一步的，所述的HPLC法的检测仪器为Agilent1290液相色谱仪。
进一步的，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。
进一步的，所述的流动相的甲醇-水的体积比为23:77。
本发明所述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。
本发明的有益效果如下：
本发明采用ASE萃取方法萃取，通过采用甲醇和甲醇分次萃取，先通过甲醇萃取避免其他组分对检测的影响，使其他杂质的出峰不影响松脂醇二葡萄糖苷的出峰，同时避免了杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。
另外通过甲醇精确高效的萃取松脂醇二葡萄糖苷，使测量更加准确。
附图说明
图1为浓度-峰面积进行线性回归。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
步骤1：取杜仲样品，剪成碎片，粉碎，过三号筛，取约1g，精密称定，按重量比1：1的比例加入硅藻土后混匀，装于10ml萃取池(装样前在萃取池底部加入适量的硅藻土，装样后用硅藻土填满萃取池)。
步骤2：装于索氏提取器中，加入甲醇，加热回流6小时，甲醇萃取液舍弃，继续用甲醇进行静态萃取，回收甲醇提取液至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得甲醇萃取液，设备为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；
其中，甲醇进行静态萃取的参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。
步骤3：将步骤2得到的甲醇萃取液采用HPLC法进行检测，检测设备为Agilent1290液相色谱仪；
所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Syncronis C18，3*100mm，3um；柱温为40℃，流速为0.3mL/min；流动相为体积比为23:77的甲醇-水；检测波长为277nm；进样量为1μl；理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。
标准样品的检测：按照每1ml甲醇含0.6mg松脂醇二葡萄糖苷配置标准样品溶液，摇匀，即得；采用实施例1的步骤3所述的方法进行检测。
按照药典的方法进行萃取并检测。
按照下式计算：
式中CR——对照品溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；
AX——供试品的峰面积；
AR——对照品峰面积。
结果：
线性关系：
取松脂醇二葡萄糖苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、1.5μl进入LC测定，并依照上述步骤3所述的方法测定。
以浓度-峰面积进行线性回归，详见图1。
求回归方程：
松脂醇二葡萄糖苷y＝1653.0034x+31.5609，R2＝1,松脂醇二葡萄糖苷在0.0611～0.9165μg内呈良好的线性关系，结果见表1：
表1
重复性试验：
取相同批号的样品(批号：1511099)0.25g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中松脂醇二葡萄糖苷的含量见表2，RSD为2.4％，试验表明ASE提取方法重复性良好。
表2
精密度试验：
取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液(0.6mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为1.2％，表明仪器精密度良好。
样品不同仪器提取结果详见表3，ASE与药典提取结果比较见表4：
表3
表4
ASE提取溶剂的选择：
《中国药典》采用甲醇索式回流6小时除杂，耗材长，且甲醇的毒性大，本实验曾采用正己烷使用ASE萃取除杂，因杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，造成压力故障，故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间。
本实验提取溶剂参照《中国药典》采用甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间8min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环3次基本能提取完全。
表5
循环次数 含量％
1 0.153
2 0.007
3 0.001
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用甲醇萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；
步骤S2：装于索氏提取器中，加入甲醇，加热回流6小时，甲醇萃取液舍弃；
步骤S3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。
3.根据权利要求2所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的步骤S4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。
4.根据权利要求2所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的ASE萃取方法采用美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪进行。
5.根据权利要求1所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Syncronis C18，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，流动相为甲醇-水，检测波长为277nm。
6.根据权利要求5所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的HPLC法的检测仪器为Agilent1290液相色谱仪。
7.根据权利要求5所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。
8.根据权利要求5所述的一种测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的流动相的甲醇-水的体积比为23:77。
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CN108627599A (zh) * 2018-07-31 2018-10-09 四川新绿色药业科技发展有限公司 一种杜仲或含杜仲为原料制备成药物的含量测定方法

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