CN105651925A - 一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；本发明提供了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。

Description

一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法
技术领域
本发明涉及实验室检测领域，特别是一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法。
背景技术
2015年药典记载：取本品粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇30ml，加热回流3小时，提取液低温蒸干，加水10ml使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次10ml，弃去醚液，水液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱长为15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液。再用20％乙醇50ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用80％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液70ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。LC测试的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸溶液(20：80)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于1500。
药典的方法操作过程复杂，洗脱次数多，对操作人员的操作技能要求高。
发明内容
本发明的目的是提供一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。
本发明提供的技术方案为：一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；
步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：50×2.1mm1.7μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.3mL/min
e)流动相：乙腈-水；梯度洗脱；
其中梯度洗脱具体为在0-1min时流动相为乙腈：水，其体积比为60:40；1-3min时流动相为乙腈：水，其体积比为70:30；3-8min时流动相为乙腈：水，其体积比为80:20；
f)检测波长：203nm。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的步骤1具体为：
S11：将人参叶粉碎后，过筛；
S12：称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间7min；冲洗体积80％；静态循环次数3次。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的步骤2具体为将萃取液稀释后加入到离心管中净化，然后过滤后得到滤液，所述的离心管中加有石墨碳SPE柱。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的双三元液相色谱仪为ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的色谱柱为ThermoSyncronisDim.(mm)AQ色谱柱。
在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明的萃取方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
附图说明
图1为本发明的色谱分析人参皂苷Rg1有效性验证的直角坐标图；
图2为本发明的色谱分析人参皂苷Re有效性验证的直角坐标图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
将人参叶样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.2g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的ASE10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移至蒸发皿中蒸干后用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶，吸取1ml样品液加入装有100mgGCB的2ml离心管进行净化，溶液过0.22微米滤膜后进入HPLC测定。
萃取条件(见表1)为：
表1
与药典接近
萃取池体积(ml) 10
萃取溶剂 甲醇
压力(psi) 1500
温度(℃) 110
静态萃取时间(min) 7
静态循环次数 3
冲洗体积(％) 80
吹扫时间(s) 60
分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)
b)色谱柱：ThermoSyncronisDim.(mm)AQ1.7μm50×2.1mm
c)柱温：40℃
d)流速：0.3mL/min
e)流动相：乙腈-水梯度洗脱(1min乙腈：水的体积比为60:40；1-3min乙腈：水的体积比为70:30；3-8min乙腈：水的体积比为80:20)
f)检测波长：203nm
色谱分析有效性验证：
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.2mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液。
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.2mg的混合溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、1.5μl、2μl、3μl进入LC测定，并依照上述方法测定。以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：人参皂苷Rg1y＝1264.2x+7.6763，R2＝0.99979,人参皂苷Rg1y＝1148.8x-0.96132，R2＝0.99998,人参皂苷Rg1在0.0911～0.5466mg/ml,人参皂苷Rg1在0.1013～0.6078mg/ml范围内呈良好的线性关系。表2和图1为人参皂苷Rg1线性试验结果；表3和图2为人参皂苷Re线性试验结果；其中，图1和2的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。
表2人参皂苷Rg1线性试验结果
表3人参皂苷Re线性试验结果
1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
取相同批号的样品(批号：15071601)0.2g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量见表1，RSD为0.5％，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表4。
表4
1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对人参叶进行萃取，人参叶为3批，批号分别为15071601，120303，1407221；
实施例1的ASE萃取方法对同一批次的人参叶采用相同规格的设备平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
具体测试结果见下表5；
表5
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；
步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：50×2.1mm1.7μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.3mL/min
e)流动相：乙腈-水；梯度洗脱；
其中梯度洗脱具体为在0-1min时流动相为乙腈：水，其体积比为60:40；1-3min时流动相为乙腈：水，其体积比为70:30；3-8min时流动相为乙腈：水，其体积比为80:20；
f)检测波长：203nm。
2.根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的步骤1具体为：
S11：将人参叶粉碎后，过筛；
S12：称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间7min；冲洗体积80％；静态循环次数3次。
3.根据权利要求2所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的萃取池的体积为10ml。
4.根据权利要求2所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的压力为1500psi。
5.根据权利要求4所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
6.根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的步骤2具体为将萃取液稀释后加入到离心管中净化，然后过滤后得到滤液，所述的离心管中加有石墨碳SPE柱。
7.根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的双三元液相色谱仪为ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。
8.根据权利要求7所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的色谱柱为ThermoSyncronisDim.(mm)AQ色谱柱。
9.根据权利要求8所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
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