CN105699577A - 一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法 - Google Patents

一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法 Download PDF

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欧妮
陈翠玲
钟水桥
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Abstract

本发明公开了一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将卷柏粉碎后，采用ASE萃取法得到萃取液；所述的ASE萃取法采用的设备为ASE快速萃取仪，萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间5min；冲洗体积80％；静态循环次数3次；步骤2：将步骤1得到的萃取液经过稀释、离心后得到上清液；步骤3：将步骤3的上清液采用液相色谱法测试穗花双黄酮的含量。本发明提供了一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法，该该方法检测速度快，检测准确度高。

Description

一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法
技术领域
本发明涉及实验室检测领域，特别是一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法。
背景技术
2010年药典记录了提取卷柏中穗花双黄酮的方法：取本品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按不同流动相配比规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm。理论板数按穗花杉双黄酮峰计算应不低于3000。
药典萃取和分析方法操作时长往往大于6个小时，这不符合海关、质检部门快速检测的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法，该方法检测速度快，检测准确度高。
本发明提供的技术方案为：一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法，包括以下步骤：
步骤1：将卷柏粉碎后，采用ASE萃取法得到萃取液；所述的ASE萃取法采用的设备为ASE快速萃取仪，萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间5min；冲洗体积80％；静态循环次数3次；
步骤2：将步骤1得到的萃取液经过稀释、离心后得到上清液；
步骤3：将步骤3的上清液采用液相色谱法测试穗花双黄酮的含量；
其中，液相色谱法的相关参数为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：碳18色谱柱，3*100mm3um
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：体积比为55：45的甲醇-0.1wt％磷酸溶液
f)检测波长：330nm。
在上述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法中，所述的步骤1具体为：S11将卷柏粉碎后，过筛；
S12称取0.2重量份卷柏粉，与1重量份的硅藻土混合均匀待用；
S13将S12得到的混合物放入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
所述的萃取池的体积为5ml。
在上述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
在上述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
在上述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明的分析方法对萃取和分析两个部分都进行了改动，这样可以在保持较高精度的前提下有效的提高分析速度。
附图说明
图1为本发明中实施例1和药典记录的测试图谱；
图2为本发明中采用药典记载的方法得到的测试图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
将卷柏经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.2g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的ASE5ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入HPLC测定。
萃取条件(见表1)为：
表1
分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
a)仪器：Thermo双三元液相色谱仪(U-3000)
b)色谱柱：ThermoSyncronisC183*100mm3um，即碳18色谱柱，直径3mm，长度100mm，粒径3um。
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-0.1％磷酸(体积比55:45，其中0.1％磷酸为质量百分比为0.1％的磷酸水溶液)
f)检测波长：330nm
色谱分析有效性验证：
取穗花双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25ug的溶液，即得。
取穗花杉双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、2μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表2。以浓度(μg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：y＝17.132x+9.1974，R2＝0.99998。穗花杉双黄酮在2.7～53.9μg/ml范围内呈良好的线性关系。
表2线性试验结果
实施例1的萃取方法的重现性验证：
取相同批号的样品(批号：1409122广西)0.2g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中穗花杉双黄酮的含量见表二，RSD为2.70％，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表3；
表3
实施例1的萃取方法的精确度测试
采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对卷柏进行萃取，卷柏为4批，批号分别为1409122(广西)，141129(山东)，20150701(湖南)，150301(泰嵘)；
实施例1的ASE萃取方法对同一批次的卷柏采用两套相同规格的设备平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
图1中标号s为药典的穗花杉双黄酮的图谱；
图1中标号T卷柏为按照实施例1的方法得到的图谱；
图2是按照药典记载的方法得到的图谱。
具体测试结果见下表4；
表4
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将卷柏粉碎后，采用ASE萃取法得到萃取液；所述的ASE萃取法采用的设备为ASE快速萃取仪，萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间5min；冲洗体积80％；静态循环次数3次；
步骤2：将步骤1得到的萃取液经过稀释、离心后得到上清液；
步骤3：将步骤3的上清液采用液相色谱法测试穗花双黄酮的含量；
其中，液相色谱法的相关参数为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：碳18色谱柱，3*100mm3um
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：体积比为55：45的甲醇-0.1wt％磷酸溶液
f)检测波长：330nm。
2.根据权利要求2所述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，所述的步骤1具体为：S11将卷柏粉碎后，过筛；
S12称取0.2重量份卷柏粉，与1重量份的硅藻土混合均匀待用；
S13将S12得到的混合物放入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
所述的萃取池的体积为5ml。
3.根据权利要求2所述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，所述的静态萃取的压力为1500psi。
4.根据权利要求2所述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
5.根据权利要求1所述的卷柏中穗花双黄酮的分析方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
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