CN109320486A - 一种红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属分析化学领域，涉及一种萃取中药中有效成分的方法，具体涉及一种红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法。本发明方法，采用红外灯照射卷柏样品的溶液，经过一定时间的提取后，处理提取液，运用高效液相色谱仪进行分离分析。根据样品和对照品的色谱信息进行定性和定量分析。所述方法快速、环保、回收率高。

Description

一种红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法
技术领域
本发明属分析化学领域，涉及一种萃取中药中有效成分的方法，具体涉及一种红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法。
背景技术
传统的中药提取方法，比如浸渍法，将中药通过浸泡从而提取其中的有效成分，比如煎煮法，类似于我们传统的熬中药，等等，实践显示，传统的中药提取方法很难满足目前科学研研究的需求，所以一些新型中药提取方法开始得到本领域技术人员的关注，比如微波提取技术，利用微波使药物中的有效成分进入溶液；比如酶法提取技术通过在药物提取液中加入特定的酶，从而提高提取效率；液相萃取技术利用药物在互不相溶的两相中溶解度的不同实现分离，以及加速溶剂提取技术，超临界流体萃取技术等等。越来越多的新技术运用到了中药的提取中，但其中尚存在一些缺陷，比如成本高，耗时长，污染环境等问题。
红外辅助萃取技术(Infrared Ray-Assisted Extraction,IRAE)是基于红外辐射的一种新型提取技术；所述红外辐射是介于可见光与微波之间的电磁波，以辐射的形式向外传播，其波长范围在约0.76μm到1000μm之间，频率从4×1014Hz到3×1011Hz之间。由于红外辐射直接作用于物质而不加热物质周围的空气，故不同于其它如对流和传导热传播方式，红外辐射较其它热传递方式更为高效。有研究显示，当红外辐射源的波长与被加热物的吸收波长一致时，该物质易于吸收红外能；物质分子在吸收红外能后，可使光子的能量完全转变成分子的振动或转动能量。目前，市售的红外光源可发出一定强度的连续光谱并主要集中在1.72-16.66μm处(其所对应的波数范围正好为600-5800cm-1)；而大部分分子的红外振动吸收峰均落在这个范围内。还有研究显示，当红外辐射被应用与中药材有效成分提取时，红外辐射进入物质体内，能加强其组分分子的运动，当组分分子运动强到足以摆脱被加热物体的束缚作用时，则上述组分被提取出来。所述的红外辐射与微波相似，是以光的速度传播到被加热物体表面，且有部分辐射透入物体内部才被吸收，具有传热快及物体内外表面温差小等特点。但迄今为止，尚未见有关红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法。
基于现有研究的基础与现状，本申请的发明人拟提供一种快速、环保、回收率高的提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法，尤其是一种利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供新的提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法，尤其是一种利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法。该方法简便，快速，回收率高且环保。
本发明的利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法，采用定量取不同的中药药材样品，放入反应器中，加入提取溶剂后，通过红外灯加热，同时冷凝回流，取上清液滤液，用液相或气相色谱分析，测定中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的含量，通过提取液浓度计算提取率。
具体而言，本发明的利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮的方法，其特征在于，其包括步骤，
1)红外加热提取
将卷柏样品粉碎，药粉于圆底烧瓶，加入乙醇，通过红外灯加热，同时接冷凝管冷凝回流；
2)提取液冷却，离心，取上清滤液进样；
3)配制标准溶液
取穗花杉双黄酮标准品，用乙醇溶解、定容得标准溶液；
4)色谱分离条件
色谱柱：XtimateTM C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1％H3PO4(60:40)；流速：1ml/min；检测波长：330nm；
5)建立标准曲线
标准曲线方程：A(峰面积)＝7*10^7C-108.82，r2＝0.9971，线性范围0.005-0.045mg/ml；
5)评价精密度
将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率(样品溶液图谱如图2所示)，平均提取率为0.318％，RSD＝3.55％；
6)回收率考察
将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，进一步得相对回收率，平均相对回收率102.50％，RSD＝4.01％。
本发明所述的方法中，用红外灯提取卷柏中穗花杉双黄酮，将卷柏粉末，溶于80％的乙醇水溶液，称重，通过红外灯对卷柏提取液进行加热，本发明的实施例中，使用250W红外灯加热提取液，所述提取液为80％的乙醇，提取固液比为1:160.，所述红外提取时间为25min；红外波长为780nm–1mm，介于可见光到微波之间，当被加热物吸收红外能量后，分子运动增加，内能增大，温度升高，加热回流25min，将提取液冷却至室温，待用；
本发明所述的方法中，所述提取液需经过补足失重、离心、过滤后分析测定。
本发明所述的方法中，所述分析方法为高效液相色谱法，采用XtimateTM C18(4.6*250mm，5μm)色谱柱，流动相：甲醇-0.1％H3PO4(60:40)，流速1ml/min，检测波长330nm。
本发明所述的方法中，取0.045mg/ml的标准溶液，再分别用80％的乙醇稀释至0.030、0.020、0.010、0.005mg/ml的不同浓度，进样20μl，将峰面积A对标准溶液浓度C(mg/ml)进行加权线性回归，得标准曲线方程：A＝7*10^7C-108.82，r2＝0.9971，线性范围0.005-0.045mg/ml；测定卷柏提取液中穗花杉双黄酮的最低定量限为0.005mg/ml。
本发明所述的方法中，将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，提取结果为：平均提取率为0.318％，RSD＝3.55％，回收率和RSD值均在规定范围内，说明所述检测方法准确、可靠。
本发明所述的方法中，将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，得相对回收率；平均相对回收率102.50％，RSD＝4.01％，相对回收率和RSD值均在规定范围内，说明所述检测方法准确、可靠。
本发明所述的方法对提取液进样分析，在室温静置5、20小时后进样，依次重复进样，测得样品在20小时后稳定。
本发明所述的方法的优点在于：
提取效率高，样品红外提取的提取率为0.318％，符合《中国药典》(2015)中不少于0.3％的规定；
提取时间快，《中国药典》(2015)规定的提取方法为加热回流5小时，而使用红外提取，将时间缩短为25分钟，显著节约了提取时间，利于工业化应用；
环保无污染，红外光对人体危害极小，不存在泄露污染环境或者影响健康；
成本低廉，仅需红外灯，及铁架台、球形冷凝管等基础仪器。
本发明利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮有效成分的方法，简便，快速，准确、可靠，回收率高且环保，能为中药及其制剂的质量控制提供技术支持，进一步可用于制定中药及其制剂的质量控制标准。
为了便于理解，以下将通过具体的附图和具体实施方式对本发明的的方法进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。
附图说明
图1是穗花杉双黄酮标准曲线。
图2是卷柏提取液色谱图。
具体实施方式
实施例
1.仪器和试药
1)分析仪器
红外灯购自海宁市安迪生照明有限公司，HH-2型数显恒温水浴锅购自金坛市杰瑞尔电器有限公司，GB204型电子天平购自METTLER TOLEDO公司，EX125DZH电子天平购自奥豪斯仪器有限公司，TDL80-2B离心机购自上海安亭科学仪器厂。
岛津LC-15C高效液相色谱仪，购自日本岛津公司，分析软件为LCsolution 15C数据处理系统，色谱柱为XtimateTM C18(4.6*250mm，5μm)，购自上海Welch公司。
2)试验药品
穗花杉双黄酮标准品(CAS：1617-53-4，含量>98％)，购自成都植标化纯生物技术有限公司。甲醇(色谱纯，1L)购自云南新蓝景化学工业有限公司。乙醇(分析纯，500ml)购自国药集团化学试剂有限公司。卷柏样品购自润邦食品专营店。纯水为Millipore去离子水。
2.试验方法与结果
1)红外提取方法
将卷柏样品粉碎，过三号筛。精密称取0.25g药粉于圆底烧瓶，加入80％的乙醇40ml，通过250W红外灯加热，同时接球形冷凝管冷凝回流；
25min后，结束提取，提取固液比为1:160.，待提取液冷却至室温，用80％的乙醇补足失重，离心，取上清液过滤，取滤液进样；
红外波长为780nm–1mm，介于可见；
2)标准溶液配制
精密称取穗花杉双黄酮标准品2.25mg，转移至50ml容量瓶中，用80％的乙醇溶解、定容得0.045mg/ml的标准溶液；
3)色谱分离条件
色谱柱：XtimateTM C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1％H3PO4(60:40)；流速：1ml/min；检测波长：330nm；
4)标准曲线的建立
取0.045mg/ml的标准溶液，再分别用80％的乙醇稀释至0.030、0.020、0.010、0.005mg/ml的不同浓度。进样20μl。将峰面积A对标准溶液浓度C(mg/ml)进行加权线性回归，得标准曲线方程：A＝7*10^7C-108.82，r2＝0.9971，线性范围0.005-0.045mg/ml，标准曲线如图1所示，本方法中测定卷柏提取液中穗花杉双黄酮的最低定量限为0.005mg/ml；
5)精密度
按1)所述提取方法，平行提取6份卷柏样品，进样分析，将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，样品溶液图谱如图2.所示；
提取结果为：平均提取率为0.318％，RSD＝3.55％，回收率和RSD值均在规定范围内，说明所述检测方法准确、可靠；
6)回收率考察
按照1)所述提取方法，平行提取6份卷柏样品，分别取5ml提取液，精密加入穗花杉双黄酮对照品0.1mg，进样分析。将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，进一步得出相对回收率；
提取结果为：平均相对回收率102.50％，RSD＝4.01％。相对回收率和RSD值均在规定范围内，说明所述检测方法准确、可靠；
7)分析样品的稳定性
按；照1)所述提取方法，所得提取液立即进样分析，在室温静置5、20小时后进样，依次重复进样。测得样品在20小时后稳定。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内。

Claims (7)

1.一种利用红外灯提取中药卷柏中穗花杉双黄酮的方法，其特征在于，其包括步骤，
1)红外加热提取
将卷柏样品粉碎，药粉于圆底烧瓶，加入乙醇，通过红外灯加热，同时接冷凝管冷凝回流；
2)提取液冷却，离心，取上清滤液进样；
3)配制标准溶液
取穗花杉双黄酮标准品，用乙醇溶解、定容得标准溶液；
4)色谱分离条件
色谱柱：Xtimate TM C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1％H3PO4(60:40)；流速：1ml/min；检测波长：330nm；
5)建立标准曲线
标准曲线方程：A＝7*10^7C-108.82，r2＝0.9971；
6)评价精密度
将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率；
7)回收率考察
将提取液中穗花杉双黄酮色谱峰面积带入标准曲线，通过提取液浓度计算提取率，得相对回收率。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，使用250W红外灯加热提取液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，所述提取液为80％的乙醇，提取固液比为1:160.。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，所述红外提取时间为25min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中，线性范围为0.005-0.045mg/ml。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤6)中，平均提取率为0.318％，RSD＝3.55％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤7)中，平均相对回收率102.50％，RSD＝4.01％。
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