CN105784869A - 一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法 - Google Patents

一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法 Download PDF

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钟水桥
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Abstract

本发明公开了一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将补骨脂粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液稀释离心分离后抽取上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法分析。本发明提供了一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。

Description

一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法
技术领域
本发明涉及实验室检测领域，特别是一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法。
背景技术
2010年药典记载取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量,加热回流2小时，放冷，转移至100ml量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器，洗液转移同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。测定时的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇一水(55：45)为流动相；检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
药典记载的液相色谱分析参数为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇一水(55：45)为流动相；检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
发明内容
本发明的目的是提供一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。
本发明提供的技术方案为：一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，包括以下步骤：
步骤1：将补骨脂粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
步骤2：将萃取液稀释离心分离后抽取上清液；
步骤3：将上清液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：50mm×2.1mm2.6μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-水(体积比49:51)
f)检测波长：246nm。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的步骤1具体为：
S11：将补骨脂粉碎后，过筛；
S12：称取0.5重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度90℃；静态萃取时间5min；冲洗体积60％；静态循环次数3次。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的步骤2具体为将萃取液稀释后在15000r/min的条件下离心3min，取上清液。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的双三元液相色谱仪为ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的色谱柱为ThermoAccucoreC18色谱柱。
在上述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法中，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明的萃取方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
附图说明
图1为本发明的色谱分析补骨脂素有效性验证的直角坐标图；
图2为本发明的色谱分析异补骨脂素有效性验证的直角坐标图
图3为本发明的补骨脂素、异补骨脂素对照品的色谱图；
图4为本发明采用药典方法测试得到的色谱图；
图5为本发明的萃取和测试方法得到色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
将补骨脂样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.5g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。
萃取条件(见表1)为：
表1
萃取池体积(ml) 10
萃取溶剂 甲醇
压力(psi) 1500
温度(℃) 90
静态萃取时间(min) 5
静态循环次数 3
冲洗体积(％) 60
吹扫时间(s) 60
分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)
b)色谱柱：ThermoAccucoreC1850mm×2.1mm2.6μm即碳18色谱柱，直径2.1mm长度50mm粒径2.6微米；
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-水(体积比49:51)
f)检测波长：246nm
色谱分析有效性验证：
取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得补骨脂素、异补骨脂素对照品。
取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加1甲醇制成每1ml含补骨脂素14.722μg、异补骨脂素11.472μg的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、2μl、5μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得补骨脂素回归方程：y＝12154.8147x+10.3900，R2＝0.9996；异补骨脂素回归方程：y＝13087.1681x-1.6855，R2＝1.0000。补骨脂素在7.361～73.61μg/ml范围内呈良好的线性关系；异补骨脂素在5.736～57.36μg/ml范围内呈良好的线性关系。详见图1～2和表2和3。图1和2的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。图1和表2对应，图2和表3对应；图3为采用实施例1的LC液相色谱法检测得到的图谱，其中补骨脂素出峰时间为3.420min，异补骨脂素出峰时间为3.910min。
表2补骨脂素线性试验结果
表3异补骨脂素线性试验结果
1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
取相同批号的样品(批号：1511073)0.5g，共4份，精密称定，按实施例1的ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中补骨脂素、异补骨脂素的含量见表三，RSD为3.5％，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表4
表4
1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对补骨脂进行萃取，补骨脂为3批，批号分别为1511073(河南)，150601(江西),20150601(云南)；
实施例1的ASE萃取方法对同一批次的补骨脂采用具有相同规格的两套设备平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
图4为样品150601按照药典所记载的方法得到的色谱图；
图5是样品150601按照本发明的ASE萃取方法和LC液相色谱法测试(ASE2)得到的色谱图。
具体测试结果见下表5；
表5
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将补骨脂粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
步骤2：将萃取液稀释离心分离后抽取上清液；
步骤3：将上清液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：50mm×2.1mm2.6μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：：甲醇-水(体积比49:51)
f)检测波长：246nm。
2.根据权利要求1所述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，其特征在于，所述的步骤1具体为：
S11：将补骨脂粉碎后，过筛；
S12：称取0.5重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度90℃；静态萃取时间5min；冲洗体积60％；静态循环次数3次。
3.根据权利要求2所述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，其特征在于，所述的萃取池的体积为10ml。
4.根据权利要求2所述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的压力为1500psi。
5.根据权利要求4所述的补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
6.根据权利要求1所述的采用ASE提取补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的方法，其特征在于，所述的步骤2具体为将萃取液稀释后在15000r/min的条件下离心3min，取上清液。
7.根据权利要求1所述的采用ASE提取补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的方法，其特征在于，所述的双三元液相色谱仪为ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。
8.根据权利要求7所述的采用ASE提取补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的方法，其特征在于，所述的色谱柱为ThermoAccucoreC18色谱柱。
9.根据权利要求8所述的采用ASE提取补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的方法，其特征在于，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
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