CN105929073A - 一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法 - Google Patents

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韦日伟
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Abstract

本发明公开了一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，包括以下步骤：步骤1：将黄芩粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；其中，步骤1具体包括：S11：将0.3重量份黄芩粉碎后与1重量份石英砂混合均匀；S12：将混合物加入到铺设有滤膜的萃取池中，然后继续加入石英砂直至达到萃取池池口，盖上萃取池的盖子，采用ASE萃取法进行萃取；步骤2：将萃取液离心，对离心后的液体取上清液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析。本发明提供了一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，该方法检测精度高，萃取和检测效果速度快，用时短。

Description

一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法
技术领域
本发明涉及实验室检测领域，特别是一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法。
背景技术
2010年药典记载了黄芩中黄芩苷的提取和检测方法：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70％乙醇40ml,加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。。
液相色谱法分离条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
药典未记载如何高效的同时提取和检测黄芩苷和黄芩素的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，该方法检测精度高，萃取和检测效果速度快，用时短。
本发明提供的技术方案为：一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将黄芩粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
其中，步骤1具体包括：
S11：将0.3重量份黄芩粉碎后与1重量份石英砂混合均匀；
S12：将混合物加入到铺设有滤膜的萃取池中，然后继续加入石英砂直至达到萃取池池口，盖上萃取池的盖子，采用ASE萃取法进行萃取；
萃取条件为：萃取溶剂为体积比为7：3的乙醇和甲醇的混合物，萃取温度120℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数3次；静态萃取的压力为1500psi；吹扫时间为100s；
步骤2：将萃取液离心，对离心后的液体取上清液；
步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：碳18色谱柱，100×3mm3μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-0.1％磷酸；甲醇和质量百分数0.1wt％的磷酸的体积比为47:53；
f)检测波长：280nm。
在上述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
在上述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法中，所述的步骤2具体为将萃取液用甲醇和乙醇的混合溶液稀释后，以15000r/min的速度离心3min；取上清液。
在上述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法中，所述的双三元液相色谱仪为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪，所述的色谱柱为Thermo Syncronis C18色谱柱，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
本发明的检测方法能够同时检测黄芩苷和黄芩素，并且两者能够非常准确的检测，检测精度高，萃取简单，用时短。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.3g，精密称定，与1g石英砂混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的10ml萃取池中再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用体积比为7：3的乙醇和甲醇混合溶液稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。
萃取条件(见表1)为：
表1
分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)
b)色谱柱：Thermo Syncronis C18 3μm 100×3mm，即碳18色谱柱的直径3mm，长度100mm，粒径3μm；
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-0.1％磷酸；甲醇和质量百分数0.1wt％的磷酸在20℃的条件下的体积比为47:53；
f)检测波长：280nm
对比例1
步骤1：取黄芩中粉约0.1g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用；
步骤2：萃取池底部垫3～6张(商品化滤纸1张)自制圆形滤纸(直径27mm)，加入约1g硅藻土后加入步骤1所得到的混合均匀的样品、再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。
步骤3：ASE萃取，萃取参数如下表2
表1ASE萃取参数
步骤4：萃取结束后，把萃取液置于100ml容量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取2mL在15000r/min下离心3min，取上清液，待上机测定。本实施例中乙醇的浓度单位均为体积分数。
采用U-3000液相色谱仪进行检测，检测参数为：
色谱柱：Kinetex 2.6μXB-C18 100A 100×4.60mm、柱温：40℃、流速：0.8mL/min、流动相：甲醇-0.5％醋酸(25:75)、检测波长：280nm、进样量10μl。
实施例1的萃取方法的精确度测试
采用实施例1、对比例的ASE萃取方法和药典的萃取和检测方法对黄芩中黄芩苷和黄芩素进行萃取和检测，黄芩为3批，批号分别为1510077(云南)，151002(江西)，20150601(内蒙)；
具体测试结果见下表3；
表3
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将黄芩粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
其中，步骤1具体包括：
S11：将0.3重量份黄芩粉碎后与1重量份石英砂混合均匀；
S12：将混合物加入到铺设有滤膜的萃取池中，然后继续加入石英砂直至达到萃取池池口，盖上萃取池的盖子，采用ASE萃取法进行萃取；
萃取条件为：萃取溶剂为体积比为7：3的乙醇和甲醇的混合物，萃取温度120℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数3次；静态萃取的压力为1500psi；吹扫时间为100s；
步骤2：将萃取液离心，对离心后的液体取上清液；
步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：碳18色谱柱，100×3mm3μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.5mL/min
e)流动相：甲醇-0.1％磷酸；甲醇和质量百分数0.1wt％的磷酸的体积比为47:53；
f)检测波长：280nm。
2.根据权利要求1所述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，其特征在于，所述的萃取池的体积为10ml。
3.根据权利要求1所述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，其特征在于，所述的步骤2具体为将萃取液用甲醇和乙醇的混合溶液稀释后，以15000r/min的速度离心3min；取上清液。
4.根据权利要求1所述的同时检测黄芩中黄芩苷和黄芩素的方法，其特征在于，所述的双三元液相色谱仪为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪，所述的色谱柱为ThermoSyncronis C18色谱柱，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
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