CN104610401A - 一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法 - Google Patents
一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法,包括:将黄芩水提、浓缩,得浓缩液;将浓缩液上大孔吸附树脂柱,水洗至无色,然后依次用体积分数60-70%的乙醇、75-80%的乙醇进行洗脱,分别收集洗脱液;将含黄芩苷的洗脱液减压浓缩,调pH、保温、静置、过滤,得黄芩苷纯品;将含黄芩素和汉黄芩素的洗脱液蒸干,上凝胶柱,以甲醇洗脱,收集黄芩素流份和汉黄芩素流份,将流份中的甲醇除去,得黄芩素纯品、汉黄芩素纯品。本发明提取率高,减少了有效成分的损失,提高了黄芩资源利用率。
Description
技术领域
本发明涉及中药中多种有效成分的提取方法,具体涉及一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法,属于中药提取技术领域。
背景技术
黄芩(拉丁学名:Scutellaria baicalensis Georgi),别名山茶根、土金茶根,是唇形科黄芩属多年生草本植物,有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。黄芩中含有黄芩苷(baicalin)、黄芩素(baicalein)、汉黄芩素(wogonin)、汉黄芩苷(wogonoside)、黄芩新素(neobaicalein)、等黄酮类化合物。
目前对黄芩有效成分的提取工艺研究较多,但多是仅针对黄芩中的一种成分进行提取,如酸沉碱溶法提取黄芩苷、酶解法提取黄芩素等,在提取一种成分的同时,其他的成分则损失掉了。同时,因为每种有效成分的提取方法都有差异,因此无法将几种提取不同黄芩有效成分的方法进行简单的组合来达到同时从黄芩中提取多种有效成分的目的。
此外,药典中收录的黄芩提取物的纯化方法中,采用水提酸沉的方法来纯化,目的是提高黄芩苷的含量,纯化后最终所得提取物中黄芩苷含量不低于85%,但纯化过程中黄芩素、汉黄芩素、汉黄芩苷等成分均损失,从而造成资源的浪费。
发明内容
本发明针对现有技术中没有同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法的不足,提供了一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法,该方法能够实现这三种有效成分的同时高效提取和分离纯化,减少了资源的浪费,提高了黄芩的利用率。
本发明具体技术方案如下:
一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法,包括以下步骤:
(1)将黄芩加入水中回流提取,所得提取液浓缩,得浓缩液;
(2)将浓缩液上大孔吸附树脂柱,先以水洗脱至无色,然后依次用体积分数60-70%的乙醇、75-80%的乙醇进行洗脱,收集60-70%的乙醇洗脱液,得黄芩苷粗提液(主要为黄芩苷),收集75-80%的乙醇洗脱液,得黄芩素和汉黄芩素的粗提液;
(3)将黄芩苷粗提液减压浓缩,所得浓缩液调pH为2~2.5,在70~80℃保温0.5~1 h,然后常温静置10~24 h,静置后过滤,所得沉淀洗涤、干燥,得黄芩苷纯品;
(4)将黄芩素和汉黄芩素的粗提液蒸干,所得黄芩素和汉黄芩素的混合物用甲醇溶解,上凝胶柱,以甲醇洗脱,按照液相色谱结果分别收集黄芩素流份和汉黄芩素流份,将流份中的甲醇除去,得黄芩素纯品、汉黄芩素纯品。
上述步骤(1)中,将黄芩用水提取2-3次,每次提取时黄芩与水的质量比为1:8-20。
上述步骤(1)中,每次提取黄芩的时间为1.5-2h。
上述步骤(1)中,提取液减压浓缩至每1 mL含0.2~0.5 g生药。
上述步骤(2)中,所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂或HPD-100型大孔吸附树脂。
上述步骤(2)中,浓缩液与大孔吸附树脂的用量关系为:每mL大孔吸附树脂的上样相当于0.1~0.3 g黄芩生药的浓缩液。
上述步骤(2)中, 体积分数60-70%的乙醇洗脱液用量为8~10 BV(BV为树脂柱床体积),体积分数75-80%的乙醇洗脱液用量为4~6 BV。
上述步骤(3)中,黄芩苷粗提液减压浓缩至每1 mL含0.5~2 g生药。
步骤(4)中,所述凝胶柱为sephadex LH-20凝胶柱。
上述步骤(4)中,黄芩素和汉黄芩素的混合物与凝胶的用量关系为:每mL凝胶上样20~50 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%。
上述方法所得黄芩苷纯度≥95%,黄芩素、汉黄芩素纯度均≥97%。
本发明的优点是:1、本发明实现了黄芩中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的同时高效提取,通过简单的步骤将三者有效分离,提取率分别达到85%、88%和90%,减少了有效成分的损失,提高了黄芩资源利用率。2、本方法所获得的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的纯度都较高,其中黄芩苷纯度≥95%,黄芩素、汉黄芩素纯度均高于97%。3、本方法大孔吸附树脂分离及凝胶柱纯化步骤所用的乙醇和甲醇均可回收再利用,节约了有机溶剂;且黄芩苷粗提液采用酸沉法纯化,与药典黄芩提取物制法相比,只经过一次酸沉,废液量少,比较环保。
附图说明
图1为市售黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品的色谱图(1 黄芩苷,2 汉黄芩苷,3 黄芩素,4 汉黄芩素)。
图2为大孔吸附树脂黄芩苷类洗脱液的色谱图。
图3为大孔吸附树脂黄芩素、汉黄芩素混合洗脱液的色谱图。
图4为纯化得到的黄芩苷色谱图。
图5为纯化得到的黄芩素色谱图。
图6为纯化得到的汉黄芩素色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明。如无特别说明,下述实施例所用醇的浓度均为体积浓度。
下述实施例中,采用液相色谱面积归一化法测定产品的纯度,液相色谱条件如下:
固定相:十八烷基硅烷键和硅胶;
流动相:甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱:0~10 min,45%甲醇,10~55 min,45%~70%甲醇;
流速:1.0 mL/min;
柱温:30℃;
检测波长:274 nm;
进样量:l0 μL。
实施例1
步骤一、同时提取:取黄芩饮片,加12质量倍水加热回流提取2 h,提取液过滤,滤渣加10倍量水再提取2次,每次1.5 h,合并滤液,获得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的混合粗提液。
步骤二、分离:将上步粗提液减压浓缩至每1 mL含0.2 g生药,以4 BV/h的流速上样D101大孔吸附树脂柱,上样量为1BV,先以水洗脱至流出液无色,依次以10BV 60%乙醇,6BV 80%的乙醇分别洗脱,收集60%的乙醇洗脱液,主要成分为黄芩苷(见图2),收集80%的乙醇洗脱液,主要成分为黄芩素和汉黄芩素(见图3)。将黄芩苷类洗脱液浓缩成每mL含0.5 g生药,用2 mol/L盐酸调节pH值至2,80 ℃保温0.5 h,静置12 h,减压滤过,沉淀水洗至pH值至5.0,再用少量乙醇洗涤,挥尽乙醇,减压干燥,即得黄芩苷,液相色谱面积归一化法测得其纯度为95%(见图4),以黄芩中所含黄芩苷计提取率为87%。将黄芩素、汉黄芩素的混合洗脱液蒸干,所得黄芩素、汉黄芩素的混合物以少量无水甲醇溶解,上sephadex LH-20凝胶柱,每mL凝胶上样20~50 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%,以无水甲醇洗脱,待凝胶柱上黄色条带下移至柱底端开始分段接流分,每份10 mL,视液相色谱结果合并流分,挥干溶剂,即得黄芩素、汉黄芩素纯品,液相色谱面积归一化法测得他们的纯度分别为99%和97%(见图5-6),以黄芩中所含黄芩素计黄芩素提取率为88%,以黄芩中所含汉黄芩素计汉黄芩素的提取率为92%。
实施例2
步骤一、同时提取:取黄芩饮片,加15质量倍量加热回流提取1.8 h,提取液过滤,滤渣加15倍量水再提取1次,合并滤液,获得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的混合粗提液。
步骤二、分离:将上步粗提液减压浓缩至每1 mL含0.5 g生药,以4 BV/h的流速上样AB-8大孔吸附树脂柱,上样量为0.5BV,先以水洗脱至流出液无色,依次以8BV 70%乙醇,4BV 80%的乙醇分别洗脱,收集70%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩苷,收集80%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩素和汉黄芩素。将黄芩苷类洗脱液浓缩成每mL含1 g生药,用1 mol/L硫酸调节pH值至2.1,70 ℃保温1 h,静置24 h,减压滤过,沉淀水洗至pH值至5.0,再用少量乙醇洗涤,挥尽乙醇,减压干燥,即得黄芩苷,液相色谱面积归一化法测得其纯度为96%,以黄芩中所含黄芩苷计提取率为86%。将黄芩素、汉黄芩素的混合洗脱液蒸干,所得黄芩素、汉黄芩素的混合物以少量无水甲醇溶解,上sephadex LH-20凝胶柱,每mL凝胶上样30 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%,以无水甲醇洗脱,待凝胶柱上黄色条带下移至柱底端开始分段接流分,每份15 mL,视液相色谱结果合并流分,挥干溶剂,即得黄芩素、汉黄芩素单体,黄芩素纯度98%,以黄芩中所含黄芩素计黄芩素提取率为90%,汉黄芩素纯度98%,以黄芩中所含汉黄芩素计汉黄芩素的提取率为91%。
实施例3
步骤一、同时提取:取黄芩饮片,加20质量倍水加热回流提取1.5 h,提取液过滤,滤渣加15倍量水再提取1次,合并滤液,获得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的混合粗提液。
步骤二、分离:将上步粗提液减压浓缩至每1 mL含0.3 g生药,以4 BV/h的流速上样HPD-100型大孔吸附树脂柱,上样量为1BV,先以水洗脱至流出液无色,依次以9BV 60%乙醇,6BV 75%的乙醇分别洗脱,收集60%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩苷,收集75%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩素和汉黄芩素。将黄芩苷粗提液减压浓缩成每mL含1.5 g生药,用0.5 mol/L磷酸调节pH值至1.8,75 ℃保温0.8 h,静置18 h,减压滤过,沉淀水洗至pH值至5.0,再用少量乙醇洗涤,挥尽乙醇,减压干燥,即得黄芩苷,纯度95%,以黄芩中所含黄芩苷计提取率86%。将黄芩素、汉黄芩素的混合洗脱液蒸干,所得黄芩素、汉黄芩素的混合物以少量无水甲醇溶解,上sephadex LH-20凝胶柱,每mL凝胶上样20 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%,以无水甲醇洗脱,待凝胶柱上黄色条带下移至柱底端开始接流分,每份8 mL,视液相色谱结果合并流分,挥干溶剂,即得黄芩素、汉黄芩素单体,黄芩素纯度99%,以黄芩中所含黄芩素计黄芩素提取率为88%,汉黄芩素纯度98%,以黄芩中所含汉黄芩素计汉黄芩素的提取率为91%,。
对比例
步骤一、同时提取:取黄芩饮片,加15质量倍量加热回流提取1.8 h,提取液过滤,滤渣加15倍量水再提取1次,合并滤液,获得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的混合粗提液。
步骤二、分离:将上步粗提液减压浓缩至每1 mL含0.5 g生药,以4 BV/h的流速上样DA-201大孔吸附树脂柱,上样量为0.5BV,先以水洗脱至流出液无色,依次以8BV 70%乙醇,6BV 80%的乙醇分别洗脱,收集70%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩苷,收集80%乙醇洗脱液,主要成分为黄芩素和汉黄芩素。将70%乙醇洗脱液浓缩成每mL含1 g生药,用1 mol/L硫酸调节pH值至2.1,70 ℃保温1 h,静置24 h,减压滤过,沉淀水洗至pH值至5.0,再用少量乙醇洗涤,挥尽乙醇,减压干燥,即得黄芩苷,液相色谱面积归一化法测得其纯度为96%,但以黄芩中所含黄芩苷计提取率仅为56%。将黄芩素、汉黄芩素的混合洗脱液蒸干,所得黄芩素、汉黄芩素的混合物以少量无水甲醇溶解,上sephadex LH-20凝胶柱,每mL凝胶上样50 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%,以无水甲醇洗脱,待凝胶柱上黄色条带下移至柱底端开始分段接流分,每份15 mL,视液相色谱结果合并流分,挥干溶剂,即得黄芩素、汉黄芩素单体,黄芩素纯度98%,以黄芩中所含黄芩素计黄芩素提取率为70%,汉黄芩素纯度98%,以黄芩中所含汉黄芩素计汉黄芩素的提取率为75%。
从此实例立刻看出,采用DA-201大孔树脂,所得黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的提取率较低,这主要因为DA-201大孔树脂对黄芩黄酮的吸附性较差,不利于黄芩苷类及苷元类成分的富集和分离。
Claims (10)
1.一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法,其特征是包括以下步骤:
(1)将黄芩加入水中回流提取,所得提取液浓缩,得浓缩液;
(2)将浓缩液上大孔吸附树脂柱,先以水洗脱至无色,然后依次用体积分数60-70%的乙醇、75-80%的乙醇进行洗脱,收集60-70%的乙醇洗脱液,得黄芩苷粗提液,收集75-80%的乙醇洗脱液,得黄芩素和汉黄芩素的粗提液;
(3)将黄芩苷粗提液减压浓缩,所得浓缩液调pH为2~2.5,在70~80℃保温0.5~1 h,然后常温静置10~24 h,静置后过滤,所得沉淀洗涤、干燥,得黄芩苷纯品;
(4)将黄芩素和汉黄芩素的粗提液蒸干,所得黄芩素与汉黄芩素的混合物用甲醇溶解,上凝胶柱,以甲醇洗脱,按照液相色谱结果分别收集黄芩素流份和汉黄芩素流份,将流份中的甲醇除去,得黄芩素纯品、汉黄芩素纯品。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(1)中,将黄芩用水提取2-3次,每次提取时黄芩与水的质量比为1:8-20。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征是:步骤(1)中,每次提取黄芩的时间为1.5-2h。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(1)中,提取液减压浓缩至每1 mL含0.2~0.5 g生药。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(2)中,所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂或HPD-100型大孔吸附树脂;步骤(4)中,所述凝胶柱为sephadex LH-20凝胶柱。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(2)中,浓缩液与大孔吸附树脂的用量关系为:每mL大孔吸附树脂的上样相当于0.1~0.3 g黄芩生药的浓缩液。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(2)中, 体积分数60-70%的乙醇洗脱液用量为8~10 BV,体积分数75-80%的乙醇洗脱液用量为4~6 BV。
8.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(3)中,黄芩苷粗提液减压浓缩至每1 mL含0.5~2 g生药。
9.根据权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(4)中,黄芩素与汉黄芩素的混合物与凝胶的用量关系为:每mL凝胶上样20~50 mg混合物,上样体积为凝胶柱体积的3~5%。
10.根据权利要求2所述的制备方法,其特征是:黄芩苷纯度≥95%,黄芩素、汉黄芩素纯度均≥97%。
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