CN102233013A

CN102233013A - 白头翁总皂苷的制备方法

Info

Publication number: CN102233013A
Application number: CN2011101175724A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2011-05-06
Filing date: 2011-05-06
Publication date: 2011-11-09

Abstract

白头翁总皂苷的制备方法，属于天然药物提取技术领域，方法步骤为：(1)将白头翁根粉碎成粗粉，用水或甲醇微波提取，得到提取液；(2)加入硅藻土搅拌，过滤，滤液减压浓缩，得到白头翁提取浓缩液；(3)上述浓缩液用水饱和正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)将正丁醇浸膏通过聚酰胺树脂柱，用去离子水和含水醇作为洗脱剂，收集洗脱液；(5)将上述洗脱液通过中性氧化铝柱，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到白头翁总皂苷。本发明实现后与现有技术相比具有成本低，杂质含量少，生产过程对环境污染少等优点。

Description

白头翁总皂苷的制备方法

技术领域：

本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种白头翁总皂苷的制备方法。

背景技术：

白头翁又名老翁花，白头草，为多年生草本植物白头翁Pulsatilla Chinensis(Bge.)Regel.的干燥根，具有清热解毒、凉血止痢的功效，临床用于阿米巴痢疾、细菌性痢疾和阴道滴虫等疾病。分布于东北、华北、西北、华东以及朝鲜和俄罗斯西伯利亚等地。始载于《神农本草经》。白头翁的活性成分主要是皂苷类，包括白头翁皂苷A、B、C、D，皂苷1，皂苷2，白桦酯酸，白桦酯酸-3-O-α-L阿拉伯吡喃糖苷，3-氧代白桦酯酸，胡萝卜苷，原白头翁素，白头翁素，白头翁灵，白头翁英等。许多研究发现，白头翁在医疗方面具有抗肿瘤活性及抗肝损伤，抗生育，抗炎抑菌，治疗慢性结肠炎和溃疡性结肠炎等作用；在兽医临床上可用于治疗多种牛、羊疾病；在农业上，白头翁对小麦赤霉病菌和水稻白叶枯病菌等均表现出很好的抑制活性，并具有杀虫活性，石宝俊等采用不同色谱技术对白头翁地上部分乙醇提取物的正丁醇部位进行分离纯化，得到7个三萜皂苷类化合物。钟邱等的研究表明，白头翁的皂苷组分有明显的体外抑瘤活性，且不同分子量的皂苷组分的活性不尽相同。潘晓茹应用微量量热法研究大肠埃希菌在白头翁总皂苷液中的代谢作用，发现白头翁皂苷具有明显的抑菌作用。时维静等的研究发现白头翁及白头翁皂苷对鸡免疫有一定的促进作用。据最新研究表明，将白头翁五个糖基的皂苷改变成低糖基皂苷，有利于人体吸收，并且白头翁皂苷的酶解产物明显促进皮肤纤维芽细胞的胶原蛋白合成，该物质和化妆品中常用物质混合制备皮肤抗老化化妆品，使皮肤中胶原蛋白量明显增多，有效改善皮肤弹性，抗皱纹抗老化。

现有白头翁皂苷提取技术主要采用醇提、大孔树脂柱层析等方法，如刘琳等发表的文献“白头翁皂苷的分离提纯”，采用酒精溶剂浸提得到较粗的白头翁总皂苷，脱脂后，经大孔树脂层析得到白头翁总皂苷，该方法所得白头翁总皂苷杂质较多。

发明内容：

本发明的目的是提供所述白头翁总皂苷的制备方法。

本发明的技术方案是提供一种白头翁总皂苷，以白头翁根为原料提取得到，皂苷含量为60-80％。

本发明提供了所述白头翁总皂苷的制备方法，包括以下步骤：

(1)将白头翁根粉碎成粗粉，用水或甲醇微波提取，得到提取液；

(2)加入硅藻土搅拌，过滤，滤液回收甲醇，得到白头翁提取浓缩液；

(3)上述浓缩液用水饱和正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇浸膏；

(4)将正丁醇浸膏通过聚酰胺树脂柱，用去离子水和含水醇作为洗脱剂，收集洗脱液；

(5)将上述洗脱液通过中性氧化铝柱，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到白头翁总皂苷。

所述步骤(1)中甲醇体积百分比为60-95％，提取溶剂用量为药材重量的5-15倍，提取2-3次。

所述步骤(2)中硅藻土加入量与提取液质量体积比为2～8∶100。

所述步骤(3)中水饱和正丁醇萃取，加入与浓缩液等体积的水饱和正丁醇。

所述步骤(4)中含水醇为体积百分比为50-80％的乙醇水溶液。

本发明的有益效果是：

(1)采用正丁醇从提取浓缩液中抽提白头翁总皂苷，避免了提取物中糖类的干扰；

(2)通过聚酰胺柱层析方法除去提取物中的水溶性色素及鞣质等杂质；

(3)本发明提供的制备方法，操作简单、成本低，杂质含量少，生产过程对环境无污染。

下面结合实施例对本发明作进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。

具体实施方式：

下述实施例中白头翁总皂苷的成分鉴定采用薄层色谱法(参照刘琳等发表的文献“白头翁皂苷的分离提纯”)，具体方法如下：

薄层层析板：硅胶-0.3％CMC-Na(1∶2.5)铺板，室温晾干，110℃活化30min；

展开剂：氯仿-甲醇-水＝7∶3∶0.5；

显色剂：10％硫酸水溶液。

下述实施例中含量测定采用HPLC法测定白头翁总皂苷的含量。以白头翁皂苷B₄为对照品(色谱条件参照现行2010年《中华人民共和国药典》白头翁含量测定项下)，具体方法如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(64∶36)为流动相；检测波长为201nm。理论塔板数按白头翁皂苷B₄峰计算应不低于3000。

实施例一：

将1kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用10L70％(v/v)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入总液量5％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏350g；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有500g聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以60％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到101g白头翁总皂苷，总皂苷含量为73％。

实施例二：

将2kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用30L80％(v/v)的甲醇微波提取2次，合并提取液，加入总液量4％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏720g；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有800g聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以50％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到198g白头翁总皂苷，总皂苷含量为64％。

实施例三：

将5kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用25L75％(v/v)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入总液量8％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏1.7kg；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有2500g聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以70％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到454g白头翁总皂苷，总皂苷含量为68％。

实施例四：

将5kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用35L60％(v/v)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入总液量6％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取3次，得正丁醇浸膏1.7kg；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有2500g聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以75％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到462g白头翁总皂苷，总皂苷含量为71％。

实施例五：

将10kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用120L95％(v/v)的甲醇微波提取2次，合并提取液，加入总液量2％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取3次，得正丁醇浸膏3kg；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有5kg聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以65％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到1.1kg白头翁总皂苷，总皂苷含量为69％。

实施例六：

将20kg白头翁根粉碎成粗粉末，采用160L水微波提取3次，合并提取液，加入总液量7％的硅藻土，搅拌，过滤，滤液于55℃减压浓缩至总体积的1/4，得到提取浓缩液；加入等体积的水饱和正丁醇萃取，分离出正丁醇层，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取5次，得正丁醇浸膏7kg；将正丁醇浸膏用水溶解后通过装有10kg聚酰胺树脂柱，先以水洗至糖反应为阴性，再以80％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液再通过中性氧化铝柱，收集下注液，减压回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到2.3kg白头翁总皂苷，总皂苷含量为75％。

Claims

1.白头翁总皂苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(2)加入硅藻土搅拌，过滤，滤液减压浓缩，得到白头翁提取浓缩液；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中甲醇体积百分比为60-95％，提取溶剂用量为药材重量的5-15倍，提取2-3次。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中硅藻土加入量与提取液质量体积比为2～8∶100。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中水饱和正丁醇萃取，加入与浓缩液等体积的水饱和正丁醇。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中含水醇为体积百分比为50-80％的乙醇水溶液。