CN101955479A

CN101955479A - 一种从竹叶中提取荭草苷的方法

Info

Publication number: CN101955479A
Application number: CN2010105108993A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-10-19
Filing date: 2010-10-19
Publication date: 2011-01-26

Abstract

本发明提供一种竹叶中具有营养心肌作用的活性化合物荭草苷的提取方法，其特征在于，将竹叶原料粉碎，加入8～12倍量含硼砂的碱性水加热提取2～3次，酸化提取液，加入聚酰胺色谱柱，用乙醇-水混合溶剂洗脱，洗脱液浓缩，用正丁醇萃取2～3次，再用ODS硅胶柱分离，用甲醇-水-醋酸混合溶剂加压洗脱，薄层监测，收集荭草苷流分，真空干燥得产品。本方法操作简单，产品含量高，重现性好。

Description

一种从竹叶中提取荭草苷的方法

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种从竹叶中提取荭草苷的方法。

背景技术：

荭草苷，属于黄酮苷类化合物，易溶于水、乙醇，难溶于苯、氯仿、乙醚等有机溶剂中。

荭草苷是竹叶黄酮的主要成分，黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用。

竹叶在我国具有悠久的药用历史，是一味著名的清热解毒良药。竹叶提取物的功能因子主要是黄酮苷，竹叶黄酮具有多方面的生物活性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、阻断亚硝基化、降低血脂及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒，增强免疫功能，抑制移植性肿瘤在宿主体内的生长等方面的作用。竹叶黄酮以其巨大的资源优势，良好的药理活性已成为一种非常有前途的天然药物，是具有广阔开发前景的新型药用资源。

现有荭草苷的提取工艺多是微波提取、大孔树脂分离、硅胶柱分离、微孔滤膜分离等。如薛月芹等发表的“淡竹叶中荭草苷的微波萃取-HPLC法测定”，该文献公开了含醇溶液微波提取的工艺。此外还有孙武兴等公开的“毛金竹叶提取物化学成分的分离与鉴定”，该文献公开的方法是水提、正丁醇萃取、大孔吸附树脂、反复硅胶柱色谱、Sephadex LH 20柱色谱、开放ODS柱色谱等多种方法进行分离纯化，该方法操作繁琐。专利200610026825.6“化合物(2S)-5，7，2’，6’-四羟基-6，8-二异戊烯基-二氢黄酮的提取工艺及其应用”，公开的方法是从白花酱草中通过醇提、有机溶剂萃取、硅胶柱层析等工序得到产品。而现有文献中对从竹叶中提取分离荭草苷的研究较少。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种荭草苷的制备方法。该方法操作简单，产品含量高，重现性好。

本发明之所以采用聚酰胺柱色谱联合ODS中压柱色谱进行分离，是因为聚酰胺对荭草苷具有较好的分离效果，且容量比较大，节省ODS硅胶的用量。与大孔树脂相比，聚酰胺色谱柱分离效果更好；ODS硅胶柱相对凝胶柱分离时分辨率更高，可以反复使用。

本发明是采用以下技术方案实现的：

1.一种从竹叶中提取荭草苷的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：将竹叶原料粉碎，加入8～12倍量石灰水与硼砂混合均匀后，加热提取2～3次，提取液加入盐酸溶液调节至酸性，得荭草苷粗提液。

2)聚酰胺柱分离：将上述粗提液加入聚酰胺色谱柱，用乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液至无醇味，得浓缩液。

3)正丁醇萃取：将上述浓缩液用正丁醇萃取2～3次。合并萃取液，挥干正丁醇，得浓缩液。

4)硅胶柱层析：将上述浓缩液与硅胶拌匀，烘干，干法上柱，密封，加压用甲醇-水-醋酸混合溶液洗脱，薄层监测，收集荭草苷流分，真空干燥得产品。

所述步骤1)中硼砂的用量是竹叶的1％～2％，加入饱和石灰水碱化溶液，pH控制在8～9，提取时间为2～4小时，提取温度控制在60～80℃，用盐酸溶液酸化时，pH控制在4～6。

所述步骤2)中的聚酰胺树脂为200～400目，乙醇水是60％～80％的乙醇溶液，用量是2～3BV。

所述步骤4)中的硅胶采用20μm粒径的ODS型硅胶，流动相是乙醇-水-醋酸(30～45∶65∶1)，硅胶柱加压控制流速在100～150ml/min。

综上所述，本发明存在以下优点：石灰水提取，硼酸保护荭草苷不被破坏，除去鞣质，果胶，粘液质等水溶性杂质，调节酸后除去了疏水性黄酮物质，更有利聚酰胺柱的分离，ODS硅胶对极性产品的分离效果较好；采用中压柱保证了洗脱剂的流速，加强了分离效果，与开放性ODS硅胶柱相比，周期短。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施实例中荭草苷的监测采用薄层色谱法(参照赵平等“荭草素和异荭草素对照品的制备”文献)，具体方法如下：

薄层色谱条件：

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水(10∶0.5∶0.5)；

显色剂：2％的FeCl₃乙醇液；

展开后，取出，晾干，喷以2％FeCl₃乙醇液，在日光下检视，供试品在与对照品色谱相应的位置上(Rf＝0.68)，有一相同颜色的单一斑点。

实施例1：

取竹叶粉碎物2kg，加入18L石灰水(控制pH在8～9)与30g硼砂混合均匀后，加热至75℃提取3个小时，过滤，滤渣按上述条件再提取一次，合并滤液，滤液中加入8％的盐酸溶液调节pH至5，过200目筛的聚酰胺色谱柱吸附，用3BV的65％的乙醇溶液洗脱，浓缩洗脱液，再用正丁醇萃取3次，挥干正丁醇，与40g粒径为50μm的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上硅胶柱，用乙醇-水-醋酸混合溶液梯度洗脱，加压控制流速30ml/min，薄层监测，收集荭草苷流分，浓缩回收乙醇，真空干燥得产品6.8g，含量97.1％。

实施例2：

取竹叶粉碎物2kg，加入20L石灰水(控制pH在8～9)与25g硼砂混合均匀后，加热至70℃提取3个小时，过滤，滤渣按上述条件再提取一次，合并滤液，滤液中加入5％的盐酸溶液调节pH至4.5，过200目筛的聚酰胺色谱柱吸附，用2BV的70％的乙醇溶液洗脱，浓缩洗脱液，再用正丁醇萃取2次，挥干正丁醇，与35g粒径为50μm的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上硅胶柱，用乙醇-水-醋酸溶液梯度洗脱，加压控制流速50ml/min，薄层监测，收集荭草苷流分，浓缩回收乙醇，真空干燥得产品7.4g，含量97.5％。

实施例3：

取竹叶粉碎物5kg，加入60L石灰水(控制pH在8～9)与60g硼砂混合均匀后，加热至65℃提取3个小时，过滤，滤渣加入50L石灰水(控制pH8～9)与50g硼砂混合均匀后，加热至60℃提取2个小时，过滤，合并滤液，滤液中加入8％盐酸溶液调节pH至5，过300目筛的聚酰胺色谱柱吸附，用2.5BV的75％的乙醇溶液洗脱，浓缩洗脱液，再用正丁醇萃取3次，挥干正丁醇，与70g粒径是50μm的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上硅胶柱，用乙醇-水-醋酸混合溶液梯度洗脱，加压控制流速40ml/min，薄层监测，收集荭草苷流分，浓缩回收乙醇，真空干燥得产品16.2g，含量95.3％。

Claims

1)提取：将竹叶原料粉碎，加入8～12倍量石灰水与硼砂混合均匀后，加热提取2～3次，提取液加入盐酸溶液调节至酸性，得荭草苷粗提液；

2)聚酰胺柱分离：将上述粗提液加入聚酰胺色谱柱，用乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液至无醇味，得浓缩液；

3)正丁醇萃取：将上述浓缩液用正丁醇萃取2～3次。合并萃取液，挥干正丁醇，得浓缩液；

2.如权利要求1所述的从竹叶中提取荭草苷的方法，其特征在于所述步骤1)中硼砂的用量是竹叶的1％～2％，加入饱和石灰水碱化溶液，pH控制在8～9，提取时间为2～4小时，提取温度控制在60～80℃，用盐酸溶液酸化时，pH控制在4～6。

3.如权利要求1所述的从竹叶中提取荭草苷的方法，其特征在于所述步骤2)中的聚酰胺树脂为200～400目，乙醇水是60％～80％的乙醇溶液，用量是2～3BV。

4.如权利要求1所述的从竹叶中提取荭草苷的方法，其特征在于所述步骤4)中的硅胶采用20μm粒径的ODS型硅胶，流动相是乙醇-水-醋酸(30～45∶65∶1)，硅胶柱加压控制流速在30-60ml/min。