CN104857006A - 白头翁皂苷a在治疗白血病中的药物用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医学领域，公开了白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途。所述的白头翁皂苷A化学结构式如下：，所述的药物含有制剂允许的药物赋形剂或载体。通过白头翁皂苷A（PsA）对K562细胞诱导红系分化作用的研究，进一步的证实白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。白头翁皂苷A单体分子具有诱导K562细胞株向红系分化的能力。因此，在治愈白血病，尤其是AML上，具有非常好的治疗效果。

Description

白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种皂苷在治疗白血病中的药物用途，特别是涉及白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途。

背景技术

AML是一种细胞分化障碍性疾病，其核心问题是正常细胞的分化过程被阻断。目前AML的治疗主要采用传统的大剂量联合化疗，但此疗法副作用较大，复发率较高，且对机体的免疫及造血系统有极大损害。因此，促白血病细胞分化成为白血病治疗的又一方向。

1986年, 我国学者在国际上首次用全反式维甲酸（ATRA）治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）获得成功, 完全缓解率达85 % 以上。ATRA的显著疗效及新一代诱导分化剂三氧化二砷（ATO）在临床上的应用，均极大的推动了诱导分化治疗的相关研究进展。然而随着ATRA的使用，关于其毒副作用及耐药性的报道屡见不鲜。其他的诱导分化剂如邻苯二甲酸酯、DMSO等也由于其毒副作用甚大，无法应用于临床。

中药以攻补兼施、毒副作用小、应用范围广等优越性得到了广泛认可和重视，因此从中药中寻找和提取有效的诱导分化剂成为治疗白血病的希望和重要途径。现已发现多种中药成分可作为红系诱导分化剂诱导K562细胞向红系分化，如三尖杉酯碱、长春新碱、苦参碱、土贝母苷、人参皂甙等。

现代药理研究发现，白头翁皂苷及其复合物具有抗肿瘤作用。其主要抗肿瘤活性的有效成分为白头翁皂苷A（PsA）。研究发现PsA可通过诱导肿瘤细胞DNA损伤、诱导其发生G2期阻滞及凋亡以发挥其抗肿瘤作用。 目前PsA对K562细胞红系诱导分化作用未见报道。

发明内容

要解决的技术问题：本发明通过白头翁皂苷A（PsA）对K562细胞诱导红系分化作用的研究，明确白头翁皂苷A在治疗白血病上的显著作用。

技术方案：白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，所述的白头翁皂苷A化学结构式如下：

，所述的药物含有制剂允许的药物赋形剂或载体。

进一步的，所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，所述的白血病为急性髓细胞性白血病。

进一步的，所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，所述的白血病为慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴系白血病或急性淋巴系白血病。

进一步的，以上任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，所述的药物通过静脉途径或口腔途径进行给药。

进一步的，以上任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，所述的药物的制剂形式包括液体制剂、颗粒剂、缓释剂、冲击、片剂或胶囊。

进一步的，以上任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为0.1wt%-99.9wt%。

更进一步的，任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为1wt%-99wt%。

更进一步的，任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为10wt%-90wt%。

有益效果：本发明通过白头翁皂苷A（PsA）对K562细胞诱导红系分化作用的研究，进一步的证实白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。白头翁皂苷A单体分子具有诱导K562细胞株向红系分化的能力。因此，在治愈白血病，尤其是AML上，具有非常好的治疗效果。

附图说明

图1为经过不同浓度的PsA诱导72小时后，GPA的荧光指数情况。

图2为经过不同浓度的PsA诱导72小时后，CD71的荧光指数情况。

具体实施方式

试剂与仪器：

IMDM培养基为美国Hyclone公司；胎牛血清为美国Gibco公司；鼠抗人CD71-FITC单抗、小鼠抗人GPA-PE单抗、IgG1 Mouse-PE单抗、IgG1 Mouse-FITC单抗均为美国Beckman-Coulter公司；全细胞蛋白裂解液为碧云天公司； FC 500流式细胞仪为美国Beckman-Coulter公司；Air Tech超净工作台为苏州净化设备厂；CO2培养箱为美国Thermo公司；倒置相差显微镜为日本OLYMPUS公司。

白头翁皂苷A制备方法及来源参见CN 102133220 A。

细胞培养：

K562细胞培养于含20%胎牛血清、100U/ml的青霉素及100mg/ml的链霉素的IMDM培养基，置于37°C、5% CO2饱和湿度的培养箱中培养，每2-3天换液。取对数生长期的细胞进行各项实验。

联苯胺染色观察：

取对数期生长的K562细胞，计数后以6×105/ml密度铺入6孔细胞培养板中，使得K562细胞实验分为3组：对照组、3μg/ml、4μg/ml，收集培养48h~72h后的各组细胞，PBS洗涤2次，调整细胞密度一致后，取50μl细胞悬液进行联苯胺染色，室温避光静置25~30min后，于倒置显微镜下进行观察，计数200个细胞，染为蓝色的细胞即为联苯胺染色阳性细胞，未染色的为阴性细胞。

血红蛋白含量测定：

取对数期生长的K562细胞，计数后以5×104/ml密度铺入24孔细胞培养板中，使得K562细胞实验分为4组：对照组、3μg/ml、4μg/ml，每2天半量换液，并补充所需白头翁皂苷A，培养4~7d。

独立收集各孔细胞，PBS充分洗涤3次，计数，采用全细胞蛋白裂解法提取蛋白，每孔200ul接种于96孔板，每个浓度平行接种3孔；用酶标仪于波长414nm处测定光密度值；根据414nm时等于1.0的溶液中血红蛋白浓度为0.13mg/ml，计算细胞平均血红蛋白含量。

流式细胞技术检测白头翁皂苷A处理K562细胞后细胞膜CD71、GPA分化抗原的表达：

取对数期生长的K562细胞，计数后以6×105/ml密度铺入24孔细胞培养板中，使得K562细胞实验分为：对照组、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml，培养72小时后收集细胞，将各组细胞均分为两管，用预冷的PBS洗涤2次，倒掉上清后，向残留的细胞悬液中分别加入5μl CD71-FITC单抗、GPA-PE单抗、IgG1(Mouse)-PE和IgG1(Mouse)-FITC同型对照，冰上避光孵育20~30 min后，再用预冷的PBS洗涤2次，最后分别加入500μl PBS重悬，流式细胞仪检测。分析CD71+、GPA+细胞的荧光指数。

在经不同浓度的PsA处理K562细胞5~7天后， 联苯胺染色阳性K562细胞明显增加（表1）。细胞内的血红蛋白含量明显增加（表2），提示白头翁皂苷A可能诱导K562细胞向红系分化。GPA及CD71均为红系细胞的特异性抗原，本专利亦通过流式细胞学的方法检测了经PsA诱导后的K562细胞表面抗原的变化，如图 1和图2所示，在经过不同浓度的PsA诱导72小时后，GPA及CD71的荧光指数均较未处理组有所提高，且具有剂量依赖效应，再次证实白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。

综上所述，白头翁皂苷A单体分子具有诱导K562细胞株向红系分化的能力。

表 1.  PsA处理后联苯胺染色阳性的细胞数（±S，次数=3）

*P＜0.05，与对照组比

表 2.  PsA 处理后K562细胞内血红蛋白含量 （±S，次数=3）

*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与控制组比。

Claims (8)

1.白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，所述的白头翁皂苷A化学结构式如下：

，所述的药物含有制剂允许的药物赋形剂或载体。

2.根据权利要求1所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，所述的白血病为急性髓细胞性白血病。

3.根据权利要求1所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，所述的白血病为慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴系白血病或急性淋巴系白血病。

4.根据权利要求1至3任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，所述的药物通过静脉途径或口腔途径进行给药。

5.根据权利要求1至3任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，所述的药物的制剂形式包括液体制剂、颗粒剂、缓释剂、冲击、片剂或胶囊。

6.根据权利要求1至3任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为0.1wt%-99.9wt%。

7.根据权利要求1至3任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为1wt%-99wt%。

8.根据权利要求1至3任一所述的白头翁皂苷A在治疗白血病中的药物用途，其特征在于，白头翁皂苷A在药物中的重量比例为10wt%-90wt%。