CN102180938A - 细梗香草皂苷的制备方法 - Google Patents

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田景奎
应弘梅
荣语媚
陈润泽
徐燕
刘小保
戚中杰
张琳
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本发明公开了一种细梗香草皂苷的制备方法。它的步骤如下：1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为50-80%的乙醇浸泡后，加热回流提取；2)浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为60-80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥；3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为40-65%甲醇多次洗脱纯化，得到80-90%的细梗香草皂苷B和80-90%的细梗香草皂苷C，并分别上SephadexLH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到95-100%的细梗香草皂苷B和95-100%的细梗香草皂苷C。本发明设计的方法简单，可重复性强，适用于工业化生产。通过该方法制备的细梗香草皂苷C和细梗香草皂苷B均具有显著的抗肿瘤活性，可以作为抗肿瘤药物的原料。

Description

细梗香草皂苷的制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物制备技术领域，尤其涉及一种细梗香草皂苷的制备方法。
背景技术
细梗香草为报春花科珍珠菜属植物Lysimachia capillipes Hemsl.的干燥全草。植物中含有丰富的皂苷类成分，其中含量较高的两个皂苷——细梗香草皂苷B、 C含量可达2-7%。其结构为13-28环氧齐墩果烷型三萜皂苷。
Figure 2011100775891100002DEST_PATH_IMAGE001
经药理学实验表明，细梗香草皂苷单体以及总皂苷均能明显抑制肿瘤细胞株的生长，可用于预防、治疗癌症，有望开发成新药或功能保健食品。以细梗香草皂苷B和细梗香草皂苷C为主的皂苷占总皂苷含量的70%以上，因此，以上述两个皂苷作为评价总皂苷的指标成分，具有一定的代表意义。
关于细梗香草皂苷的分离方法，仅见于植物化学研究中的常规硅胶柱色谱溶剂梯度洗脱分离，而对其中的皂苷B和皂苷C的定向制备分离，目前尚未见文献报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种细梗香草皂苷的制备方法。
细梗香草皂苷的制备方法的步骤如下：
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为50-80%的乙醇浸泡后，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，得到细梗香草提取液；
2)提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入3-6倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为60-80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为40-65%甲醇多次洗脱纯化，得到质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷C，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷C。
细梗香草皂苷的制备方法的步骤如下：
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为70%的乙醇浸泡后，加热回流提取3次，每次1.5小时，得到细梗香草提取液；
2) 提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入4倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为45%甲醇洗脱除去非皂苷类杂质，再以体积百分比浓度为52%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%细梗香草皂苷C，再以体积百分比浓度为60%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷B，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷C。
本发明以皂苷为目标物质，除去了大量干扰物质。通过反相硅胶梯度洗脱,分别制得较高纯度的细梗香草皂苷C和细梗香草皂苷B。本发明设计的方法简单，可重复性强，适用于工业化生产。通过该方法制备的细梗香草皂苷C和细梗香草皂苷B均具有显著的抗肿瘤活性，可以作为抗肿瘤药物的原料。
附图说明
图1是细梗香草皂苷C液相图谱;
图2是细梗香草皂苷B液相图谱。
具体实施方式
实施例1
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为50%的乙醇浸泡后，加热回流提取1次，每次1小时，得到细梗香草提取液；
2)提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入3倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为60%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为40%甲醇多次洗脱纯化，得到质量百分比含量为80%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为80%的细梗香草皂苷C，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为98%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95.6%的细梗香草皂苷C。
实施例2
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为80%的乙醇浸泡后，加热回流提取3次，每次2小时，得到细梗香草提取液；
2)提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入6倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为65%甲醇多次洗脱纯化，得到质量百分比含量为90%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为90%的细梗香草皂苷C，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为99.5%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为100%的细梗香草皂苷C。
实施例3
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为70%的乙醇浸泡后，加热回流提取3次，每次1.5小时，得到细梗香草提取液；
2) 提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入4倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为45%甲醇洗脱除去非皂苷类杂质，再以体积百分比浓度为52%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%细梗香草皂苷C，再以体积百分比浓度为60%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷B，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷C。
细梗香草皂苷B和细梗香草皂苷C通过液相检测纯度，色谱条件为：Agilent TC-C18柱，流动相为乙腈-水，乙腈梯度：0-30 min 40-50%；30-40 min 50-95%；40-45 min 95%。液相图谱见图1、图2。
法测定细梗香草皂苷C对肿瘤细胞增殖抑制作用
取对数生长期细胞制成细胞悬液，稀释至10×103～60×103·ml-1，接种于96孔培养板内，每孔100μL，24h后加入含不同浓度细梗香草皂苷C的培养液或等体积不含药物的培养液，培养48h后加入MTT溶液15μL，37 ℃孵育4 h后吸弃培养液,每孔加入150μL DMSO, 轻度振荡溶解结晶,在酶标仪上测定各孔A值，测定波长为570nm。按下列公式计算抑制率(IR)：IR= (对照组平均A值-给药孔平均A值／对照孔平均A值-空白A值) ×100％，计算得出不同给药的IC50值，见表1。
表1 细梗香草皂苷C对2种肿瘤细胞株生长的抑制作用(IC50)
Tab.1 Inhibitory efforts of capilliposide C to A549 and MCF7 cells
Figure 2011100775891100002DEST_PATH_IMAGE004
结果显示细梗香草皂苷C对人源肺癌细胞株A549以及乳腺癌细胞株MCF7均显示出了明显的生长抑制作用，这对进一步将皂苷单体开发为抗肿瘤药物提供了有力的依据。

Claims (2)

1.一种细梗香草皂苷的制备方法，其特征在于它的步骤如下：
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为50-80%的乙醇浸泡后，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，得到细梗香草提取液； 
2)提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入3-6倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为60-80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为40-65%甲醇多次洗脱纯化，得到质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷C，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷C。
2.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷的制备方法，其特征在于它的步骤如下：
1)将细梗香草药材加入体积百分比浓度为70%的乙醇浸泡后，加热回流提取3次，每次1.5小时，得到细梗香草提取液； 
2) 提取液浓缩离心，上清液加入大孔树脂柱，加入4倍柱体积蒸馏水洗脱除去糖类，再以体积百分比浓度为70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥后得细梗香草粗总皂苷；
3)细梗香草粗总皂苷用反相中压柱，以体积百分比浓度为45%甲醇洗脱除去非皂苷类杂质，再以体积百分比浓度为52%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%细梗香草皂苷C，再以体积百分比浓度为60%甲醇洗脱，得到质量百分比含量为80-90%的细梗香草皂苷B，并分别上Sephadex LH-20凝胶柱，除去杂质，收集洗脱液，得到质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷B和质量百分比含量为95-100%的细梗香草皂苷C。
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