CN106674299B - 聚炔苷类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种聚炔苷类化合物及其制备方法和应用，先取兴安独活的干燥根进行回流提取和萃取，得到正丁醇萃取层；将正丁醇萃取层上样于硅胶柱，以氯仿‑甲醇系统作为洗脱液，进行梯度洗脱，对流出液进行检测，将洗脱液体积比为5:1的流份合并，除去溶剂，得到第一次过柱部分；将第一次过柱部分上样于反相硅胶层析柱，以甲醇‑水系统作为洗脱液，进行梯度洗脱，将洗脱液体积比为45:55的流份合并，除去溶剂，得到第二次过柱部分；将第二次过柱部分上样于高效液相色谱分离柱，用流动相进行等度洗脱，得到聚炔苷类化合物。本发明能够从兴安独活中提取出聚炔苷类化合物，该化合物能够促进细胞对葡萄糖的摄入和转化。

Description

聚炔苷类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
本发明属于医药及保健食品领域，具体涉及一种聚炔苷类化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
目前我国的糖尿病患者超过1亿，而糖尿病前期患者数量超过1.5亿，这为数众多的糖尿病前期患者中每年有10％的人转变为真正的糖尿病，形势十分严峻。外周组织对胰岛素的抵抗是糖尿病发生发展的前期阶段，在这一阶段，肌肉、脂肪或肝脏细胞对胰岛素产生抵抗，可发生在受体前、受体或受体后。如果有某种物质能够恢复或促进靶细胞对胰岛素的敏感性，能够促进细胞对葡萄糖的摄入和转化，则该物质可能就具有很好的抗糖尿病作用。
增加胰岛素敏感性的抗糖尿病药物有双胍类和噻唑烷二酮类，但一方面这些药物都有不同程度的副作用，比如噻唑烷二酮类容易引起血液稀释，因引起心血管疾病风险等。另一方面，更重要的是这些药物均会随着用药时间的延长而出现继发性失效，无论是单一疗法还是联合治疗，都没能取得令人满意的结果，我国有三分之二以上二型糖尿病患者的长期血糖控制不达标。因此，仍然需要不断地寻找改善胰岛素敏感性的抗糖尿病药物。
兴安独活(Heracleum dissectum)属菊科多年生草本，是东北鄂伦春族药食两用的野生植物，春夏季节其幼嫩的茎叶被当地人用作美味的蔬菜食用，其根作为传统的鄂族药材用于祛风除湿、止痛止泻等，但对其化学成分和药理活性的研究报道极少。
【发明内容】
本发明的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种聚炔苷类化合物及其制备方法和应用，能够从兴安独活中提取出聚炔苷类化合物，该化合物能够促进细胞对葡萄糖的摄入和转化。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明聚炔苷类化合物分子式为C28H44O16或C28H42O16。
进一步地，C28H44O16的结构式为：
进一步地，C28H42O16的结构式为：
本发明制备方法，包括以下步骤：
1)取兴安独活的干燥根进行回流提取若干次，将提取液减压浓缩，得到总浸膏或浓缩液；
2)将总浸膏混悬于水中，得到浸膏液，浸膏液或浓缩液经乙酸乙酯萃取若干次后分离出有机层，剩余水层通过正丁醇萃取若干次后合并萃取液，去除合并后萃取液中的正丁醇得到正丁醇萃取层；
3)将正丁醇萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇系统作为洗脱液，按体积比(100:0)～(0:100)进行梯度洗脱，对流出液进行检测，将洗脱液体积比为5:1的流份合并，除去溶剂，得到第一次过柱部分；
4)将第一次过柱部分上样于反相硅胶层析柱，以甲醇-水系统作为洗脱液，按体积比(0:100)～(100:0)进行梯度洗脱，将洗脱液体积比为45:55的流份合并，除去溶剂，得到第二次过柱部分；
5)将第二次过柱部分上样于高效液相色谱分离柱，用流动相进行等度洗脱，得到聚炔苷类化合物。
进一步地，步骤1)的回流提取中采用甲醇、水或体积分数10～95％的乙醇作为提取剂，兴安独活的干燥根与提取剂的质量体积比为1kg：(1～8)L；步骤1)中提取次数为1～6次，每次1～4小时；当提取剂为甲醇或体积分数10～95％的乙醇时，将得到的提取液中溶剂回收得到总浸膏；当提取剂为水时，将提取液的体积浓缩至六分之一到十分之一，得到浓缩液。
进一步地，步骤2)中总浸膏和水的体积比为1:1～1:5。
进一步地，步骤2)中浸膏液或浓缩液直接经过乙酸乙酯萃取；或者先依次经石油醚和氯仿萃取后，再经过乙酸乙酯萃取；每次萃取均是等体积萃取；每种溶剂分别萃取1～6次。
进一步地，步骤3)中梯度洗脱后每300～800mL收集一个流份；步骤4)中梯度洗脱后每200～500mL收集一个流份；步骤3)和步骤4)中对流出液均是进行TLC检测；步骤5)中等度洗脱的流速为3～6mL/min。
进一步地，步骤5)中流动相是甲醇-0.5％醋酸水系统或乙腈-0.5％醋酸水系统，甲醇-0.5％醋酸水系统中甲醇、水和醋酸的体积比为40：60：0.5；乙腈-0.5％醋酸水系统中乙腈、水和醋酸的体积比为37：63：0.5。
如上所述的聚炔苷类化合物在制备抗糖尿病药物和/或保健品方面的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明在对兴安独活进行化学成分和药理活性的研究中发现，从中分离得到的聚炔苷类化合物具有很好的改善脂肪细胞胰岛素敏感性的作用，对脂肪细胞的甘油三酯的蓄积有促进作用，意即有将细胞外葡萄糖摄入细胞内转化为甘油三酯的显著促进作用，因此可能具有很好的降血糖作用。试验证明，本发明化合物在10μM时对3T3-L1脂肪细胞开始有明显的促进作用，且具有浓度依赖关系；同时该化合物具有高效、低毒的特点，有望开发成新的抗糖尿病药物，或者用于制备具有预防和治疗糖尿病作用的保健食品。
本发明中分离得到的三个聚炔苷类化合物，是一类在自然界中很少见的化合物，结构较特殊，因连有三个葡萄糖，极性较大，且有顺反异构，因此很难分离纯化，采用常规的色谱方法难以将其分开。本发明中采用一种特殊的亲水色谱柱，并且在流动相中加有一定量的酸，能够很好地将其分开，具有快速、分离度高、得到的化合物纯度高(＞98％)的特点。
【附图说明】
图1为本发明化合物1的1H-NMR图谱；
图2为本发明化合物1的13C-NMR图谱；
图3为本发明化合物1的DEPT图谱；
图4为本发明化合物1的1H-1H COSY图谱；
图5为本发明化合物1的HMQC图谱；
图6为本发明化合物1的HMBC图谱；
图7为本发明化合物1的ROESY图谱；
图8为本发明化合物1的HR-ESIMS图谱；
图9为本发明化合物2的1H-NMR图谱；
图10为本发明化合物3的1H-NMR图谱。
【具体实施方式】
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
本发明聚炔苷类化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)取一定质量(kg)的兴安独活干燥根，用体积为兴安独活干燥根质量1～8倍量的甲醇、体积分数为10～95％的乙醇或水(L)在各自沸点附近加热回流提取1～6次，每次1～4小时，当提取剂为甲醇或体积分数10～95％的乙醇时，合并提取液减压回收除去溶剂，得到总浸膏，当提取剂为水时，合并提取液并将其体积浓缩至六分之一到十分之一，得到浓缩液；
2)将总浸膏混悬于水中，总浸膏和水的体积比为1:1～1:5，得到浸膏液，浸膏液或浓缩液分别依次用等体积的有机溶剂萃取，其中，第一次萃取时用石油醚对浸膏液或浓缩液进行等体积萃取，之后每次萃取均是分离出上一次萃取后的有机层，将剩余的水层用有机溶剂等体积进行下一次萃取；每种溶剂各萃取1～6次，合并萃取液，常压或减压蒸馏除去有机溶剂，分别得到各萃取层和水层。有机溶剂包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等，且萃取次序为先用极性小的溶剂，再用极性大的有机溶剂，石油醚和氯仿可以省去。
3)取正丁醇萃取层，通过采用柱层析纯化等分离方法，得到本发明的聚炔苷类化合物。
柱层析包括以下三个阶段：
第一阶段：将正丁醇萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇系统作为洗脱液，按体积比(100:0)～(0:100)进行梯度洗脱，每300～800mL收集一个流份，对流出液进行TLC检测，合并相同流份，共得到30个流份，分别命名为FrB1-FrB30；常压或减压蒸干溶剂，取其中的FrB27流份，即洗脱液体积比为5:1的流份，作为第一次过柱部分；
第二阶段：将第一次过柱部分，上样于反相硅胶层析柱，以甲醇-水系统作为洗脱液，按体积比(0:100)～(100:0)进行梯度洗脱，每200～500mL收集一个流份，对流出液进行TLC检测，合并相同流份，减压除去溶剂，得到3个流份，分别命名为FrB27.1-FrB27.3，将FrB27.2流份，即洗脱液体积比为45:55的流份，作为第二次过柱部分；
第三阶段：将第二次过柱部分，上样于高效液相色谱分离柱，分离得到聚炔苷类化合物。其中，高效液相色谱分离柱为江苏汉邦的Megres C18柱，高效液相色谱分离是用示差折光检测器，以甲醇-0.5％醋酸水系统或乙腈-0.5％醋酸水系统作为流动相，按3～6mL/min进行等度洗脱。甲醇-0.5％醋酸水系统中甲醇、水和醋酸的体积比为40：60：0.5；乙腈-0.5％醋酸水系统中乙腈、水和醋酸的体积比为37：63：0.5。
本发明中所得到的聚炔苷类化合物，其结构式为：
本发明中的聚炔苷类化合物在制备抗糖尿病类药物和/或保健品中的应用：本发明在对其进行化学成分和药理活性的研究中发现，从中分离得到的三个聚炔苷类化合物具有很好的改善脂肪细胞胰岛素敏感性的作用，能够显著促进脂肪细胞摄入葡萄糖并转化为甘油三酯，因此，有望将其开发成具有改善胰岛素抵抗的抗糖尿病药物和/或保健品。
实施例1
1、聚炔苷类化合物的提取和分离
1)取坎库拉干燥根6kg，用体积量为坎库拉干燥根质量5倍的甲醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；
2)将总浸膏混悬于4倍量水中，用石油醚等体积萃取4次，然后经氯仿，乙酸乙酯和正丁醇等体积萃取4次，每种溶剂的萃取层分别合并后减压除去溶剂后分别得到石油醚层，氯仿层，乙酸乙酯层，正丁醇层以及剩下的水层。
3)取正丁醇萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每500mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到30个流份(FrB1-FrB30)。
4)其中第27个流份FrB27(3.3g)经反相硅胶柱色谱分离，用MeOH/H2O按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每200mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到3个流份(FrB27.1-FrB27.3)。然后FrB27.2用半制备高效液相色谱纯化，示差折光检测器，采用Megres C18柱，流动相是MeOH/H2O/HAC(40:60:0.5,v/v)，流速为3.0mL/min，得到化合物1(tR 22min)、2(tR 11min)和3(tR 15min)。
本发明通过理化常数和现代波谱学技术手段(HR-ESI-MS，1D-NMR，2D-NMR)鉴定化合物的结构，化合物1为4,6-decadiyne-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside，化合物2为(8Z)-decaene-4,6-diyn-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside，化合物3为(8E)-decaene-4,6-diyn-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside。
化合物的结构鉴定过程如下所述。
2、聚炔苷类化合物的结构鉴定
1)化合物1为淡黄色油状物；其HR-ESI-MS m/z 659.2544[M+Na]+(calcd659.2522)(图8)，确定分子式为C28H44O16。
红外光谱显示有羟基吸收带(3400cm-1)，烷基吸收带(2934cm-1)，乙炔吸收带(2251，2160cm-1)等。在的1H-NMR谱(图1)中，化学位移δH 0.99(3H,t,J＝7.3Hz)的质子信号是一个甲基，结合1H-1H COSY谱(图4)，它与两个亚甲基相连δH 1.53(2H,sextet,J＝7.2Hz)，2.22(2H,t,J＝7.0Hz)。另外一个结构片段是两个依次相连的亚甲基δH 2.44(2H,t,J＝7.0Hz)，1.80(2H,quintet,J＝6.4Hz)与一个连氧亚甲基相连δH 3.96(1H,dt,J＝10.0,5.9Hz)，3.64(1H,m)。在图2的13C-NMR和图3的DEPT谱中，δC 77.9,77.8,66.6,66.6的四个季碳为炔碳。因此，苷元部分为上述两个结构片段中间由两个直接相连的乙炔连接。在图1的1H-NMR中，化学位移δH4.39(1H,d,J＝7.5Hz)，4.58(1H,d,J＝7.8Hz)，4.45(1H,d,J＝7.8Hz)以及他们相应的碳信号δC 103.1,105.0,104.6说明分子中存在三个糖单位，酸水解后GC-MS分析得知这三个糖均为葡萄糖，且均为β构型，因为糖端基质子偶合常数分别为7.5,7.8和7.8Hz。结合该化合物的其他谱图，如HMQC(图5)、HMBC(图6)和ROESY(图7)谱，将化合物1鉴定为4,6-decadiyne-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside，即4,6-十二炔-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，该化合物是一个未见文献报道的新化合物。其结构式如下：
其核磁数据见下表1。
表1本发明中化合物1的1H NMR和13C NMR数据
2)化合物2为淡黄色油状物；其HR-ESI-MS m/z 657.2369[M+Na]+(calcd657.2365)，确定分子式为C28H42O16。
红外光谱显示有羟基吸收带(3412cm-1)和乙炔的吸收带(2231，2236cm-1)。其氢谱与化合物1相似，只是在1H-NMR谱(图9)中，δH 6.13(1H,dq,J＝10.8,6.9Hz)，5.51(1H,dd,J＝10.7,1.4Hz)多出两个烯氢，高场区少了两个亚甲基质子信号，碳谱中相应多出δC143.0和110.1的两个烯碳信号，结合1H-1H COSY谱得知，甲基δH 1.88(3H,dd,J＝6.9,1.6Hz)与这个双键相连。由双键的偶合常数得知，该双键的构型为Z式，因其偶合常数为10.8Hz。糖部分仍然是三分子β构型葡萄糖，整个分子的连接通过深入解析HMBC谱得以确定，因此化合物2鉴定为(8Z)-decaene-4,6-diyn-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D–glucopyranoside，(8Z)-十烯-4,6-二炔-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，也是一个未见文献报道的新化合物。其结构式如下：
化合物2的核磁数据见表2。
表2本发明中化合物2的1H NMR和13C NMR数据
3)化合物3为淡黄色油状物；其HR-ESI-MS m/z 657.2364[M+Na]+(calcd657.2365)，确定分子式为C28H42O16。
其氢谱和碳谱与化合物2高度相似，只是在1H-NMR谱(图10)中，两个烯氢的偶合常数较大，δH 6.28(1H,dq,J＝15.8,6.9Hz)，5.54(1H,d,J＝15.8Hz)，说明该化合物中的双键为E型。其连接通过深入解析1D-NMR和2D-NMR，尤其是1H-1H COSY和HMBC谱得以确定，化合物3鉴定为(8E)-decaene-4,6-diyn-1-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside，即(8E)-十烯-4,6-二炔-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，该化合物也是一个未见文献报道的新化合物，其结构如下。
其核磁数据见表3。
表3本发明中化合物3的1H NMR和13C NMR数据
下面对本发明中所分离鉴定的化合物1-3进一步做药理活性检测。
脂肪细胞甘油三酯脂肪蓄积实验
实验方法：
3T3-L1细胞(5.0×104cells/well)接种于48孔板中，24小时后，加入分化培养基(含有10％FBS的DMEM(high glucose:4500mg/L，1μM的地塞米松，0.5mM的IBMX和5μg/mL的胰岛素)培养3天，然后培养基换成维持培养基(含有10％FBS的DMEM(high glucose:4500mg/L和5μg/mL的胰岛素)再培养2天后，更换新鲜维持培养基继续培养2天，在第8天，吸去培养基，每孔加入200μL蒸馏水，超声破碎，用甘油三酯液体试剂盒测定细胞破碎液中的TG含量。样品溶于DMSO，在每次更换培养基时加入，其中DMSO的终浓度为0.1％，Troglitazone用作阳性对照化合物。数值表示为与对照组相比的TG含量增加值MEAN±SEM(n＝4).*p<0.05,**p<0.01(与对照组相比)。
实验结果：见表4。
表4.化合物1-3对3T3-L1脂肪细胞的TG蓄积作用
结果分析：表4中的数据表明，本发明中的化合物1-3均具有很好的促进脂肪细胞蓄积甘油三酯的作用，化合物3在1μM时就有显著性促进作用(p<0.05)，化合物1、2和3从10μM开始均开始具有明显的促进作用(p<0.01)，且具有浓度依赖关系。
结合以上实验及其实验结果，表明本发明中的聚炔苷类化合物具有极强的改善脂肪细胞对胰岛素的敏感性，促进对葡萄糖的摄入和转化，因此有望开发为新的抗糖尿病药物；或者用于制备预防和治疗糖尿病的保健食品。并且，化合物在30μM时没有显示出任何细胞毒活性，否则，细胞将脱落坏死，细胞内的甘油三酯含量也会剧烈降低甚至低至接近没有的状态。可见，该类化合物是安全的。
实施例2
1)取坎库拉干燥根6kg，用体积量为坎库拉干燥根质量5倍的95％乙醇加热回流提取6次，每次1小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；
2)将总浸膏混悬于2倍量水中，用乙酸乙酯等体积萃取1次，然后经正丁醇等体积萃取6次，每种溶剂的萃取层分别合并后减压除去溶剂后分别得到乙酸乙酯层，正丁醇层以及剩下的水层。
3)取正丁醇萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每500mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到30个流份(FrB1-FrB30)。
4)其中第27个流份FrB27(3.3g)经反相硅胶柱色谱分离，用MeOH/H2O按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每200mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到3个流份(FrB27.1-FrB27.3)。然后FrB27.2用半制备高效液相色谱纯化，示差折光检测器，采用Megres C18柱，流动相是MeOH/H2O/HAC(40:60:0.5,v/v)，流速为3.0mL/min，得到化合物1(tR 22min)、2(tR 11min)和3(tR 15min)。
实施例3
1)取坎库拉干燥根6kg，用体积量为坎库拉干燥根质量8倍的水加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；
2)将总浸膏混悬于1倍量水中，用乙酸乙酯等体积萃取2次，然后经正丁醇等体积萃取3次，每种溶剂的萃取层分别合并后减压除去溶剂后分别得到乙酸乙酯层，正丁醇层以及剩下的水层。
3)取正丁醇萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每800mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到30个流份(FrB1-FrB30)。
4)其中第27个流份FrB27(3.3g)经反相硅胶柱色谱分离，用MeOH/H2O按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每500mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到3个流份(FrB27.1-FrB27.3)。然后FrB27.2用半制备高效液相色谱纯化，示差折光检测器，采用Megres C18柱，流动相是乙腈-0.5％醋酸水系统(37:63:0.5,v/v)，流速为5.0mL/min，得到化合物1(tR 26min)、2(tR 15min)和3(tR 19min)。
实施例4
1)取坎库拉干燥根6kg，用体积量为坎库拉干燥根质量4倍的10％乙醇加热回流提取4次，每次2小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；
2)将总浸膏混悬于5倍量水中，用石油醚等体积萃取2次，然后经氯仿，乙酸乙酯和正丁醇等体积萃取2次，每种溶剂的萃取层分别合并后减压除去溶剂后分别得到石油醚层，氯仿层，乙酸乙酯层，正丁醇层以及剩下的水层。
3)取正丁醇萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每300mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到30个流份(FrB1-FrB30)。
4)其中第27个流份FrB27(3.3g)经反相硅胶柱色谱分离，用MeOH/H2O按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400mL收集一个流份，经TLC检识合并相同流份后共得到3个流份(FrB27.1-FrB27.3)。然后FrB27.2用半制备高效液相色谱纯化，示差折光检测器，采用Megres C18柱，流动相是乙腈-0.5％醋酸水系统(37:63:0.5,v/v)，流速为6.0mL/min，得到化合物1(tR 24min)、2(tR 12min)和3(tR 17min)。
对比例1
将步骤5)中的流动相换成其它流动相或不同比例的相同流动相(或者色谱柱替换成普通反相色谱柱)，其它步骤和条件与实施例1相同。发现无法分离出聚炔苷类化合物。
本发明公开了一类聚炔苷类化合物及其应用。所述的3种聚炔苷类化合物是从鄂伦春族药食两用的植物坎库拉中提取分离得到，经过实验研究发现该类化合物对3T3-L1脂肪细胞的甘油三酯蓄积有促进作用，意即对细胞摄入葡萄糖有促进作用，因此可能具有降低血糖的活性，且该类化合物从可食用野生植物中提取分离得到，具有高效低毒的特点，有望开发成具有抗糖尿病作用的药物和/或保健品。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种聚炔苷类化合物，其特征在于：其分子式为C28H44O16或C28H42O16；
C28H44O16的结构式为：
C28H42O16的结构式为：
2.如权利要求1所述的一种聚炔苷类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)取兴安独活的干燥根进行回流提取若干次，将提取液减压浓缩，得到总浸膏或浓缩液；
2)将总浸膏混悬于水中，得到浸膏液，浸膏液或浓缩液经乙酸乙酯萃取若干次后分离出有机层，剩余水层通过正丁醇萃取若干次后合并萃取液，去除合并后萃取液中的正丁醇得到正丁醇萃取层；
3)将正丁醇萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇系统作为洗脱液，按体积比(100:0)～(0:100)进行梯度洗脱，对流出液进行检测，将洗脱液体积比为5:1的流份合并，除去溶剂，得到第一次过柱部分；
4)将第一次过柱部分上样于反相硅胶层析柱，以甲醇-水系统作为洗脱液，按体积比(0:100)～(100:0)进行梯度洗脱，将洗脱液体积比为45:55的流份合并，除去溶剂，得到第二次过柱部分；
5)将第二次过柱部分上样于高效液相色谱分离柱，用流动相进行等度洗脱，得到聚炔苷类化合物；
步骤1)的回流提取中采用甲醇、水或体积分数10～95％的乙醇作为提取剂，兴安独活的干燥根与提取剂的质量体积比为1kg：(1～8)L；步骤1)中提取次数为1～6次，每次1～4小时；当提取剂为甲醇或体积分数10～95％的乙醇时，将得到的提取液中溶剂回收得到总浸膏；当提取剂为水时，将提取液的体积浓缩至六分之一到十分之一，得到浓缩液；
步骤2)中浸膏液或浓缩液直接经过乙酸乙酯萃取；或者先依次经石油醚和氯仿萃取后，再经过乙酸乙酯萃取；每次萃取均是等体积萃取；每种溶剂分别萃取1～6次；
步骤5)中流动相是甲醇-0.5％醋酸水系统或乙腈-0.5％醋酸水系统，甲醇-0.5％醋酸水系统中甲醇、水和醋酸的体积比为40：60：0.5；乙腈-0.5％醋酸水系统中乙腈、水和醋酸的体积比为37：63：0.5。
3.根据权利要求2所述的一种聚炔苷类化合物的制备方法，其特征在于：步骤2)中总浸膏和水的体积比为1:1～1:5。
4.根据权利要求2所述的一种聚炔苷类化合物的制备方法，其特征在于：步骤3)中梯度洗脱后每300～800mL收集一个流份；步骤4)中梯度洗脱后每200～500mL收集一个流份；步骤3)和步骤4)中对流出液均是进行TLC检测；步骤5)中等度洗脱的流速为3～6mL/min。
5.如权利要求1所述的聚炔苷类化合物在制备抗糖尿病药物和/或保健品方面的应用。
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