CN103113439A

CN103113439A - 从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法

Info

Publication number: CN103113439A
Application number: CN2013100616150A
Authority: CN
Inventors: 阿布拉江·克依木; 阿瓦罕·苏来曼; 外塔尼古丽·卡米力
Original assignee: Xinjiang University
Current assignee: Xinjiang University
Priority date: 2013-02-27
Filing date: 2013-02-27
Publication date: 2013-05-22

Abstract

从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法采用常用的提取方法和柱层析分离技术对对叶大戟的化学成份进行了研究，得到了一种化合物，并经¹HNMR、¹³CNMR、ESI-MS等波谱技术确定该化学成分为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。本发明原料利用率高，制备过程安全，成本低，周期短，操作简单，设备要求低，制的产品纯度高等优点。

Description

从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法

技术领域

本发明涉及天然产物分离领域，具体涉及采用常用的提取方法和柱层析分离技术从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离，利用1H NMR、13C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。

背景技术

对叶大戟(Euphorbia sororia A.)为大戟科大戟属植物，以全草入药和果实入药，是一年生草本，维吾尔名为“苏孜阿甫”。主要分布于中亚和我国新疆和田等地区。功能主治为利水消肿、降压清脑、泻下杂虫，用于大便秘结、尿频、高血压头痛、肝硬化、水肿以及疥疮肿痛。

据文献报道，对叶大戟中含有萜类、黄酮类、生物碱类、脂肪油、甾醇类、酯类等多种生物活性的成分。

本发明中，我们采用常用的提取方法和柱层析分离技术对“对叶大戟”化学成分进行了提取与分离，利用¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。该成分为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

对叶大戟中黄酮类化合物的生理活性作用主要体现在具有生物抗氧化性、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂、降血压、降低血糖作用、抗肿瘤作用等。新疆具有丰富的药用植物资源，为了有效、合理地利用药用植物资源，对天然药物有效成分的提取分离及分析研究十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法。

本发明的目的是通过下述方案实现：一种从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法，其特征在于包含以下步骤：

1、提取与分离

将10 kg对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。其残渣用70 % 乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并，加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，对萃取物进行减压浓缩，得到四个部分的浸膏物。

用大孔树脂分离：将正丁醇萃取部分加入至大孔树脂中吸附，先用少量水洗，然后依次用20 % 、50 % 、80 % 乙醇进行洗脱，分别收集下柱洗脱液，浓缩，薄层色谱检测，合并相同部分，在流动相为50 % 的流分中得到了粗提取物。

用硅胶吸附树脂分离：将上述粗提取物以适量硅胶拌样，上硅胶柱，进行硅胶色谱层析分离，分别用氯仿—甲醇 ( 20:1, 10:1, 6:1, 2:1, ) 为流动相进行梯度洗脱，薄层色谱检测，合并相同部分，在流动相氯仿—甲醇为 2:1 的流分中得到了粗提取物。

用葡萄糖凝胶（Sephadex HL-20）纯化：将上述粗提取物上凝胶柱，进行凝胶色谱层析分离，用氯仿—甲醇 2:1 为流动体系进行梯度洗脱，薄层色谱检测，合并相同部分，流分中得到了纯度很高的黄酮类成分，即山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

附图说明

图1为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的¹H- NMR谱图。

图2为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的¹³C-NMR谱图。

图3为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的MS谱图。

具体实施方式

实施方式1

将10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。其残渣用70 %乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并，加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、葡萄糖凝胶柱层析等分离方法对正丁醇萃取部分进行分离，得到山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷,测定其含量为 98.5%。

实施方式2:

将10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得 95 % 乙醇浸膏物。其残渣用 70 % 乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物。提取物用乙酸乙酯萃取，将其水层用5 % NaHCO₃处理后用正丁醇萃取，将其水层过滤后加 HCl 至 pH 6 ~ 7，抽滤，，，，，得到的黄色固体重新溶解于10倍量热水中，采用大孔吸附树脂柱层析进一步纯化，依次用水、30% 乙醇和 50%乙醇洗脱。50%乙醇洗脱下来的部分为浓缩后得到纯度为 97% 以上的产物—山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，测定其含量为 96% 。

实施方式 3:

将粉碎的1 kg 对叶大戟地上部分投入 8 倍量沸水中，煮沸30 分钟后，经棉花过滤得到滤液。用6倍量水同法提取2次，过滤。滤液用乙酸乙酯萃取三次后，向水层中加浓盐酸调pH 2。冷却后抽滤，用水洗2次。该粗产物悬浮于8倍量水中，用 10 % NaHCO₃ 溶液 pH 6 ~ 7，加入样品量2% 活性炭，45 ℃保温30分钟。过滤，滤液再用浓盐酸调pH 2。冷却后过滤，少量 95% 乙醇洗涤，抽干，干燥得到纯度为60% 以上的产物。产物重新溶解于10倍量热水中，采用大孔吸附树脂柱层析进一步纯化，依次用水、30% 乙醇和 50%乙醇洗脱。50%洗脱下来的部分为浓缩后得到纯度为98 % 以上的产物—山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

2、结构鉴定

综合分析上述化合物的¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS 等波谱数据，鉴定该化合物为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

上述技术方案可以看出，由于本发明实施例采用常用的提取方法和柱层析分离技术对“对叶大戟”的化学成分进行了提取与分离，利用¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。因此得到单体化合物：山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

山奈酚-3-O-β-D葡萄糖醛酸苷的化学结构式为：

Figure DEST_PATH_411781DEST_PATH_IMAGE001

本发明提供一种从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法

，包括以下步骤。

提取与分离：将10 kg对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。其残渣用70 % 乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并，加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、葡萄糖凝胶（Sephadex HL-20）柱层析等分离方法对正丁醇萃取部分进行分离，并经¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定该化学成分的结构。该化合物为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

结构与鉴定：化合物为黄色晶体, m.p186～189℃，可溶于甲醇、水，TLC展开，紫外（254nm）下显暗黑色，喷5 % AlCl₃溶液显为黄色，初步确定该化合物是黄酮类成分；

¹H- NMR谱中表现出经典的黄酮苷类的氢谱特征，δ ppm：8.01(2H, d , J = 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.85 (2H, d , J = 2.0, 8.8 Hz, H-3′,5′), 说明B环上位4′ 位被取代；10.92 (1H, s, H-5), 10.2 (1H, s, H-7,4′), 6.34 (1H, d , J = 1.4 Hz, H-8), 6.15 (1H, d , J = 1.4 Hz, H-6), 说明A环5,7位被羟基取代；5.46(1H , d , J = 7.2 Hz, H-1″)，12.53(1H, s, H-6″),说明羧基上的质子信号，根据偶合情况可以确定苷元为山奈酚，糖部分为葡萄糖醛酸；

¹³C-NMR谱中观察到结构中有21个碳，从71.9 ppm至98.5 ppm左右的碳信号均为葡萄糖分子中与氧原子连接的6个碳信号，其中98.5ppm处出现的信号为端基碳的信号；177.3ppm处出现的信号为黄酮苷元上的羰基，172.2ppm出现的信号为葡萄糖分子中的羰基。

质谱图中观察到(-)ESI-MS , m/z:461.0789(M-H)- ，HMRS给出该化合物的分子式为C₂₁H₁₈O₁₂。

综合分析以上数据，确认该化合物为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

Claims

1.一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其提取步骤如下：

a.将10 kg对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次，过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物，其残渣用70 % 乙醇超声波再次提取三次，过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并；

b.加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

c.将正丁醇萃取物经填充吸附材料的吸附柱，用乙醇洗脱，分别收集下柱夜并用旋转蒸发仪旋干；

d.洗脱前，用体积分数为95 % 乙醇将层析柱浸泡24小时，然后用蒸馏水淋洗吸附柱至流出液为无乙醇味；

e.将上述浓缩物上葡萄糖凝胶吸附，用甲醇洗脱，浓缩；

f.将上述浓缩物经重结晶得黄酮单体。

2. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于所述的对叶大戟是一种全草入药和果实入药的一年生草本植物。

3. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于所述步骤 c 中的吸附材料先选用大孔树脂AB-8，后用硅胶吸附树脂。

4. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于所述步骤 c 中的乙醇浓度为20 % ~ 80 % 。

5. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于所述步骤 e 中的甲醇浓度为20 % 。

6. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于所述步骤 f 中可以用甲醇和二氯甲烷作为溶剂。