CN101284861B

CN101284861B - 一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途

Info

Publication number: CN101284861B
Application number: CN2008100529749A
Authority: CN
Inventors: 苏艳芳; 郭成云; 解笑瑜; 杨凤英
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2008-05-04
Filing date: 2008-05-04
Publication date: 2010-08-18
Anticipated expiration: 2028-05-04
Also published as: CN101284861A

Abstract

本发明公开了一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途，化合物的结构式为：

Description

一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途

技术领域

本发明涉及天然产物化学领域，具体地说涉及一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途。

背景技术

白酒草[Conyza japonica(Thunb.)Less.]系菊科白酒草属植物白酒草的全草，又名白酒棵、白酒香、酒药草、银纽子，分布于浙江、福建、台湾、云南、贵州、湖南、广东、广西、西藏等省区。白酒草属(Conyza)植物全世界约有80-100种，主要分布于东、西半球的热带和亚热带地区。我国有10种1变种，其中白酒草根或全草药用，治疗小儿肺炎、肋膜炎、喉炎、角膜炎等症。

发明内容

本发明的目的是提供一种从植物白酒草中提取的一种三萜皂苷类化合物。

本发明的第二个目的是提供一种三萜皂苷类化合物在制备抗肿瘤药物的应用。

本发明的第三个目的是提供一种三萜皂苷类化合物的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种三萜皂苷类化合物，其结构式如下所示：

结构式(I)或(II)所示一种三萜皂苷类化合物在制备抗肿瘤药物的应用。

结构式(I)或(II)所示一种三萜皂苷类化合物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)将粉碎干燥的白酒草全草用乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取，提取液过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当膏状物质量5-15倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3-5次，每次乙酸乙酯的加入量为分散液体积的0.8-2倍，再加入正丁醇萃取3-5次，每次正丁醇的加入量为分散液体积的0.8-2倍，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当浓缩物质量8-12倍的水中，过大孔吸附树脂柱，用0％-60％的乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％的乙醇或甲醇洗脱液，减压浓缩得到总皂苷；

(4)将总皂苷进行硅胶柱层析，以体积比为7-4∶3-6∶0.3-0.6的氯仿-甲醇-水进行梯度洗脱，共收集75个流分，合并流分43-55和流分56-72；

(5)将流分43-55上反相ODS层析柱，用体积百分比为30％-100％的甲醇水溶液梯度洗脱，共收集20个流分，合并流分16-19，上反相ODS层析柱，用体积百分比为30％-100％的甲醇水溶液梯度洗脱，共收集20个流分，合并流分8-12，用硅胶柱色谱纯化，用体积比为81∶19∶2的乙酸乙酯-甲醇-水洗脱，得到化合物(I)；将流分56-72上反相ODS层析柱，用体积百分比为50％-70％的甲醇水溶液梯度洗脱，共收集32个流分，分离得到的流分29，析出结晶为化合物(II)。

步骤(1)较好的是以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料6-12质量倍的体积百分比浓度为50％-100％的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取2-5次，每次1-4小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物。

步骤(1)最佳的是以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料10质量倍的体积百分比浓度为60％-80％的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物。

步骤(3)中大孔树脂的型号可以选用AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。

本发明的优点在于所提取分离的一种三萜皂苷类化合物具有抗肿瘤活性，制备方法简单。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种三萜皂苷类化合物

分子式C₆₂H₉₈O₃₁，分子量1338。

化合物(I)的结构通过分析各种核磁共振谱(¹H NMR、¹³C NMR、DEPT、COSY、HMQC、HMBC、TOCSY、NOESY)和高分辨质谱数据等及与类似化合物的波谱数据比较得以鉴定。

化合物(I)的波谱数据如下：

[α]_D ²⁰-31.7(c0.66，MeOH).IR(KBr)v_max 3467，2944，1713，1073cm^-1.

¹H NMR(C₅D₅N)：苷元部分1.94(s，H₃-24)，1.51(s，H₃-25)，1.08(s，H₃-26)，1.21(s，H₃-27)，0.88(s，H₃-29)，0.97(s，H₃-30)，5.42(br s，H-12)，3.26(br d，J＝12.5Hz，H-18)；糖部分，28位糖链：阿拉伯糖6.47(br s，H-1)，鼠李糖5.62(br s，H-1)，1.69(d，J＝6.0Hz，H₃-6)，木糖5.24(d，J＝7.5Hz，H-1)，芹糖6.17(br s，H-1)，支链芹糖5.90(d，J＝4.5Hz，H-1)；3位糖链：葡萄糖5.08(d，J＝7.5Hz，H-1)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：苷元部分44.3(C-1)，70.3(C-2)，86.1(C-3)，52.9(C-4)，52.5(C-5)，21.1(C-6)，33.2(C-7)，40.3(C-8)，48.7(C-9)，36.8(C-10)，24.0(C-11)，123.0(C-12)，144.3(C-13)，42.2(C-14)，28.2(C-15)，23.1(C-16)，47.3(C-17)，41.6(C-18)，46.2(C-19)，30.9(C-20)，34.1(C-21)，32.7(C-22)，181.0(C-23)，14.3(C-24)，17.5(C-25)，16.9(C-26)，26.2(C-27)，176.3(C-28)，33.2(C-29)，23.7(C-30)。糖部分，28位糖链：阿拉伯糖93.2(C-1)，75.2(C-2)，69.3(C-3)，65.4(C-4)，62.6(C-5)，鼠李糖101.0(C-1)，71.6(C-2)，82.3(C-3)，77.8(C-4)，68.6(C-5)，18.6(C-6)，木糖104.9(C-1)，75.5(C-2)，84.6(C-3)，69.6(C-4)，66.6(C-5)，芹糖111.2(C-1)，77.8(C-2)，80.4(C-3)，75.0(C-4)，65.4(C-5)，支链芹糖111.8(C-1)，77.8(C-2)，79.8(C-3)，74.5(C-4)，64.4(C-5)；3位糖链：葡萄糖105.1(C-1)，75.0(C-2)，78.2(C-3)，71.5(C-4)，78.3(C-5)，62.6(C-6)。

High resolution ESIMS：m/z[M+Na]⁺ 1361.5990(calcd for C₆₂H₉₈O₃₁Na，1361.5984).

实施例2

一种三萜皂苷类化合物

分子式C₆₈H₁₀₈O₃₆，分子量1500。

化合物(II)的结构通过分析各种核磁共振谱(¹H NMR、¹³C NMR、DEPT、COSY、HMQC、HMBC、TOCSY、NOESY)和高分辨质谱数据等及与类似化合物的波谱数据比较得以鉴定。

化合物(II)的波谱数据如下：

[α]_D ²⁰-38.2(c0.50，MeOH).IR(KBr)v_max 3416，2943，1717，1069cm^-1.

¹H NMR(C₅D₅N)：苷元部分1.96(s，H₃-24)，1.53(s，H₃-25)，1.10(s，H₃-26)，1.23(s，H₃-27)，0.89(s，H₃-29)，1.00(s，H₃-30)，5.44(br s，H-12)；糖部分，28位糖链：阿拉伯糖6.53(br s，H-1)，鼠李糖5.55(br s，H-1)，1.71(d，J＝6.0Hz，H₃-6)，木糖5.25(d，J＝8.0Hz，H-1)，芹糖6.17(d，J＝2.0Hz，H-1)，4.75(d，J＝2.0Hz，H-2)，4.70(d，J＝9.0Hz，Ha-4)，4.26(d，J＝9.0Hz，Hb-4)，支链芹糖5.88(d，J＝4.5Hz，H-1)，4.78(d，J＝4.5Hz，H-2)，4.55(d，J＝9.0Hz，Ha-4)；3位糖链：葡萄糖5.06(d，J＝7.5Hz，H-1)，末端葡萄糖5.17(d，J＝7.5Hz，H-1)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：苷元部分44.2(C-1)，70.3(C-2)，86.1(C-3)，52.8(C-4)，52.5(C-5)，21.1(C-6)，33.0(C-7)，40.3(C-8)，48.7(C-9)，36.8(C-10)，24.0(C-11)，123.0(C-12)，144.2(C-13)，42.2(C-14)，28.1(C-15)，23.1(C-16)，47.3(C-17)，41.6(C-18)，46.2(C-19)，30.9(C-20)，34.1(C-21)，32.7(C-22)，180.5(C-23)，14.2(C-24)，16.9(C-25)，17.5(C-26)，26.1(C-27)，176.3(C-28)，33.1(C-29)，23.7(C-30)。糖部分，28位糖链：阿拉伯糖93.0(C-1)，75.6(C-2)，68.5(C-3)，65.1(C-4)，61.8(C-5)，鼠李糖100.9(C-1)，71.5(C-2)，82.5(C-3)，77.7(C-4)，68.7(C-5)，18.6(C-6)，木糖105.0(C-1)，75.0(C-2)，84.3(C-3)，69.6(C-4)，66.7(C-5)，芹糖111.2(C-1)，77.7(C-2)，80.4(C-3)，75.1(C-4)，65.6(C-5)，支链芹糖111.9(C-1)，77.5(C-2)，79.8(C-3)，74.6(C-4)，64.3(C-5)；3位糖链：葡萄糖105.1(C-1)，73.7(C-2)，88.4(C-3)，69.8(C-4)，77.9(C-5)，62.3(C-6)，末端葡萄糖105.9(C-1)，75.6(C-2)，78.2(C-3)，71.6(C-4)，78.6(C-5)，62.5(C-6)。High resolution ESIMS：m/z[M+Na]⁺ 1523.6566(calcd for C₆₈H₁₀₈O₃₆Na，1523.6512).

实施例3

化合物(I)和化合物(II)的抗肿瘤活性试验结果如下：

选择宫颈癌细胞HeLa，以紫杉醇为阳性药物，测试所获得单体化合物的抗肿瘤活性，结果表明：化合物(I)和化合物(II)均具有抗肿瘤活性，对HeLa细胞的IC₅₀分别为44.935×10^-6mol/L、18798×10^-6mol/L。

实施例4

一种三萜皂苷类化合物的制备方法，包括下列步骤：

(1)取白酒草干燥全草2.5kg，粉碎后加入25kg的体积百分比浓度90％乙醇水溶液和60％乙醇水溶液依次回流提取两次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当于膏状物质量10倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次3000ml，再加入正丁醇萃取4次，每次3000ml，正丁醇萃取液减压回收溶剂，得到浓缩物127g；

(3)将浓缩物溶解于相当于浓缩物质量10倍的水中溶解，上大孔吸附树脂D101柱，用水、10％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液、40％水溶液、60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％乙醇水溶液洗脱液回收溶剂，减压浓缩得到总皂苷50g；

(4)将总皂苷进行硅胶(100-200目)柱层析、以体积比分别以氯仿-甲醇-水为7∶3∶0.3→6.5∶3.5∶0.35→6∶4∶0.4→5.5∶4.5∶0.45→5∶5∶0.5→4∶6∶0.6梯度洗脱，每500mL收集一个流分，共收集75个流分，各流分经过硅胶薄层层析、反相ODS薄层层析检查后合并流分43-55和流分56-72；

(5)将流分43-55(13g)上反相ODS层析柱，用体积百分比为30％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液、100％甲醇梯度洗脱，每100mL收集一个流分，共收集20个流分，用分析高效液相色谱(甲醇-水、乙腈-水)检查各流分，根据高效液相色谱结果合并流分16-19，上反相ODS层析柱，用体积百分比为30％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液、100％甲醇梯度洗脱，每100mL收集一个流分，共收集20个流分，收集的各流分经分析高效液相色谱(甲醇-水、乙腈-水)检查后合并流分8-12，流分8-12用硅胶柱色谱纯化，用体积比为81∶19∶2乙酸乙酯-甲醇-水洗脱，得到化合物化合物(I)；将流分56-72(3.5g)经反相ODS柱层析，用体积百分比为50％甲醇水溶液、60％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液梯度洗脱，共收集32个流分，分离得到的流分29，结晶析出化合物(II)。

实施例5

一种三萜皂苷类化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料6质量倍的甲醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当膏状物质量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次乙酸乙酯的加入量为分散液体积的2倍，再加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的加入量为分散液体积的2倍，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当浓缩物质量10倍的水中，过大孔吸附树脂AB-8柱，用水，10％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液，40％甲醇水溶液、60％甲醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％甲醇水溶液洗脱液回收溶剂，减压浓缩得到总皂苷；

实施例6

一种三萜皂苷类化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料12质量倍的体积百分比浓度为50％的乙醇水溶液回流提取5次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当膏状物质量15倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯的加入量为分散液体积的0.8倍，再加入正丁醇萃取5次，每次正丁醇的加入量为分散液体积的0.8倍，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当浓缩物质量8倍的水中，过大孔吸附树脂HP20柱，用水，10％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液，40％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％乙醇水溶液洗脱液回收溶剂，减压浓缩得到总皂苷；

实施例7

一种三萜皂苷类化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料11质量倍的体积百分比浓度为80％的甲醇水溶液回流提取2次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当膏状物质量10倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯的加入量为分散液体积的2倍，再加入正丁醇萃取5次，每次正丁醇的加入量为分散液体积的2倍，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当浓缩物质量12倍的水中，过大孔吸附树脂HPD100柱，用水，10％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液，40％甲醇水溶液、60％甲醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％甲醇水溶液洗脱液回收溶剂，减压浓缩得到总皂苷；

实施例8

一种三萜皂苷类化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料10质量倍的体积百分比浓度为60％的乙醇水溶液回流提取5次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当膏状物质量12倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次乙酸乙酯的加入量为分散液体积的1倍，再加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的加入量为分散液体积的1倍，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当浓缩物质量10倍的水中，过大孔吸附树脂HPD100A柱，用水，10％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液，40％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集40％-60％乙醇水溶液洗脱液回收溶剂，减压浓缩得到总皂苷；

本实施例中的大孔吸附树脂的型号可以选用HPD300型、X-5型、NKA-II型或DA201型，组成新的实施例。

Claims

1.三萜皂苷类化合物，其结构式如下所示：

2.权利要求1所述的三萜皂苷类化合物在制备抗肿瘤药物的应用。

3.权利要求1所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，其特征是所述步骤(1)为以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料6-12质量倍的体积百分比浓度为50％-100％的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取2-5次，每次1-4小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物。

5.根据权利要求4所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，其特征是所述步骤(1)为以粉碎干燥的白酒草全草为原料，加入原料10质量倍的体积百分比浓度为60％-80％的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得膏状物。

6.根据权利要求3所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，其特征是所述步骤(3)中所述大孔吸附树脂的型号为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。