CN112300242B - 一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法 - Google Patents
一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法公开了一种利用薤制备5α‑cholano‑22，16‑内酯‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑[β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→3)]‑β‑D‑吡喃葡萄糖基(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖苷的方法。以薤为原料，经有机溶剂提取、过滤、浓缩、浓缩液用水稀释后过大孔吸附树脂柱吸附，用低浓度有机溶剂的水溶液进行洗脱后得到含有上述化合物的呋甾总皂苷，取呋甾总皂苷进行硅胶、ODS柱层析分离后再利用高效制备液相进行纯化，得到纯度大于98％的单体。
Description
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，涉及薤中一种新的呋甾皂苷类化合物的制备方法。
背景技术
薤(Allium chinenseG.Don)，别名藠头，是百合科葱属植物，为多年生草本植物，广泛种植于我国安徽、广东、福建等地。薤以其独特的风味，常被腌渍制成副食食用，具有健脾胃，助消化等保健功效。薤的干燥鳞茎是中药薤白的来源之一，具有通阳散结，行气导滞等功效，常用于治疗胸痹心痛，皖腹痞满胀痛，泻痢后重等疾病。
薤主要含有甾体皂苷类化合物、含氮化合物、含硫化合物、脂肪酸类化合物和多糖类化合物，其中甾体皂苷类化合物是薤中主要化学成分。甾体皂苷类化合物由甾体皂苷元和糖基组成，皂苷元主要分为螺甾烷醇类、异螺甾烷醇类、呋甾烷醇类和变形呋甾烷醇类4种类型，其中甾体皂苷元主要包括tigogenin，laxogenin，smilagenin，sarsapogenin和gitogenin等五种类型，糖基中主要含有葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖等。迄今为止已有60余种甾体皂苷类化合物从薤中被分离鉴定，且包括新碳骨架在内的新化合物仍在被发现。
现代药理学研究表明薤中甾体皂苷类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、降脂、抑制血小板凝集、抑菌、抑制动脉粥样硬化、解痉平喘等作用。
发明内容
本发明致力于从天然产物中发现甾体皂苷类化合物，经过不断努力，从药用植物薤中提取分离得到了一种新的甾体皂苷类化合物，并找到了其制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的，具体内容包括：一种新甾体皂苷类化合物的提取分离、结构鉴定及制备方法的完善。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
以鲜薤为原料用有机溶剂的水溶液进行提取、过滤、浓缩、浓缩液用水稀释后过大孔吸附树脂柱吸附，用低浓度有机溶剂的水溶液洗脱后，TLC跟踪监测，得到呋甾总皂苷。取呋甾总皂苷进行硅胶、ODS柱层析分离，再利用高效制备液相进行纯化，最终得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体。
所述鲜薤的提取方法为：取将鲜薤搅碎，用有机溶剂浸提3次，合并三次提取液，回收溶剂，所述有机溶剂为丙酮、甲醇或者乙醇。
所述的大孔吸附树脂选自AB-8、D101、HP20的一种或它们的两种或两种以上的混合树脂。
所述的洗脱用有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮或它们的两种或两种以上混合溶剂。
所述的低浓度有机溶剂的水溶液是体积百分比浓度小于等于40％的水溶液。
所述的将鲜薤提取物用大孔吸附树脂吸附后，是先用体积百分比浓度小于15％有机溶剂的水溶液洗脱，然后用大于15％至小于40％的有机溶剂的水溶液洗脱得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的呋甾总皂苷。
呋甾总皂苷柱层析是以乙酸乙酯：乙醇：水为洗脱剂，优选体积比为6：1.5：0.2的乙酸乙酯：乙醇：水为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分A；将组分A以二氯甲烷：甲醇：水为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分B，优选流动相体积比为8：2：0.2。将组分B以丙酮：水为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C，优选流动相体积比为2:1。最后将组分C用乙腈：水为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体，优选流动相体积比为87：13(简称化合物1)。本发明制备方法得到的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷纯度高达98％。
所述的薤可以是鲜薤，也可以是将薤蒸透或置沸水中烫透后晒干的干燥薤。
本发明获得的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体可用于制备药物组合物及其他产品。
附图说明
图1.化合物1的质谱图
图2.化合物1的1H-NMR图
图3.化合物1的13C-NMR图
图4.化合物1的DEPT90图
图5.化合物1的DEPT135图
图6.化合物1的1H-1H COSY图
图7.化合物1的HMBC图
图8.化合物1的HMQC图
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明。应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
取鲜薤10Kg搅碎，用90％乙醇溶液常温浸提三次，乙醇溶液用量分别为10、8、6倍(W/V)，时间分别为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无乙醇味。浓缩液加水稀释，稀释液过D-101大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用氯仿-甲醇-水(8：5：1)为展开剂进行薄层层析检验(分别用A试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和E试剂(1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸(4；1)显色)，结果显示此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷。
取呋甾总皂苷50g，以乙酸乙酯：乙醇：水＝6：1.5：0.2(体积比)为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A 30.5g；将组分A以二氯甲烷：甲醇：水(8：2：0.2，体积比)为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B10.2g。将组分B以丙酮：水(2：1，体积比)为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C3.4g，最后将组分C用乙腈：水(87：13，体积比)为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体5mg。
纯化得到的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体HPLC-ELSD检测其纯度为99.3％。
分离得到的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体(化合物1)用13C NMR确定了结构。
化合物1为白色粉末(乙腈-水)，熔点m.p.242-244℃，Liebermann-Burchard和Molish反应阳性，与E试剂反应显粉红色，提示该化合物可能为呋甾皂苷类化合物。电喷雾质谱(ESI-MS)给出m/z 995.4689[M+H]+，提示化合物1的分子量为994.4689，推测化合物1的分子式为C46H74O23。
化合物1的13C NMR(C5D5N，150MHz)谱共给出46个碳信号，其中包括22个皂苷元碳信号和24个糖基碳信号。结合无畸变极化转移增强谱(DEPT谱)可知，低场区δc181.26为羰基碳信号，δc105.21，105.04，104.68，102.50推测为糖的端基碳信号，δc70.95～88.65共给出18个连氧叔碳信号，推测为糖基C-2～C-5或甾体皂苷苷元上的连氧碳信号，δc18.01，13.91，12.34为3个甲基碳信号。化合物1的1HNMR(C5D5N，600MHz)谱中，高场区出现了3组甲基质子信号，分别为δH 0.57(3H，s)，δH 0.48(3H，s)，δH 1.12(3H，d，J＝7.2Hz)，根据异核单量子相关谱(HSQC)以及异核多键相关谱(HMBC)，可将这3组甲基碳信号分别归属为C-18(δc13.91)，C-19(δc12.34)和C-21(δc18.01)。由于C18质子信号(δH0.57，3H)处于低场而C19质子信号(δH0.48，3H)处于高场，可确认甾体皂苷元5位氢为α构型[20]。
由HMBC谱可知，δH1.12(3H，d，J＝7.8Hz，H-21)分别与δc59.11，δc36.40，δc181.26存在C-H远程相关，可将这三组碳信号分别归属为C-17，C-20和C-22。δH0.57(3H，s，H-18)分别与δc38.29，δc41.87，δc54.53，δc59.11存在C-H远程相关，可将这4组碳信号分别归属于C-12，C-13，C-14和C-17。δH0.48(3H，s，H-19)分别与δc37.27，δc44.69，δc54.50和δc35.87存在C-H远程相关，可将该4组信号分别归属为C-1，C-5，C-9和C-10。在同核化学位移相关谱(1H-1H COSY)中，δH4.77(H-16)与δH 1.28，1.98(H-15)存在1H-1H相关，再结合HSQC谱，可归属δc82.82为C-16信号，归属δc33.3为C-15信号。δH0.64，1.32(H-1)与δH1.48，1.91(H-2)存在1H-1H相关，故将δc29.96归属为C-2，同时δH1.48，1.91(H-2)又与δH3.77(H-3)存在1H-1H相关，故将δc77.34(连氧叔碳)其归属为C-3信号，并推测其与糖基相连形成糖苷键。将化合物1的13C NMR数据与3-羟基-5α-cholano-22，16-内酯对照，发现皂苷元的数据基本一致，只是A环C-2，C-3，C-4化学位移发生了变化，由于C-3连糖，导致C-3化学位移向低场移动6.24ppm，进而导致其周围的C-2，C-4的化学位移分别向高场移动了1.44ppm，3.25ppm。
在1H NMR(C5D5N，600MHz)谱中低场区出现4个糖的端基质子信号，分别为δH 4.76(1H，d，J＝7.8Hz)，δH 5.03(1H，d，J＝7.8Hz)，δH 5.19(1H，d，J＝7.8Hz)，δH5.47(1H，d，J＝7.8Hz)，提示化合物中存在4分子糖，由J＝7.8Hz可知4分子糖的端基质子均为β构型。酸水解结果表明分子中存在半乳糖和葡萄糖。由HMBC谱可知，半乳糖的端基质子信号(δH4.76，1H，d，J＝7.8Hz)与母核C-3(δc77.34)存在远程相关，因此推测该糖连接在皂苷元母核C-3位，内侧葡萄糖的端基质子信号(δH 5.03，1H，d，J＝7.8Hz)与半乳糖的C-4′(δc80.36)存在远程相关，推测其连接方式为1→4。外侧葡萄糖端基质子信号(δH5.19，1H，d，J＝7.8Hz和δH5.47，1H，d，J＝7.8Hz)分别与内侧葡萄糖的C-3″(δc88.65)和C-2″(δc81.59)存在远程相关，推测两分子葡萄糖与内侧葡萄糖的连接方式分别为1→3和1→2。
综上所述，最终确认化合物1(分子式C46H74O23)为5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖。5α-cholano-22,16-lactone-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-D-glu copyranosyl-(1→4)-β-D-galacopyranoside。经文献检索，确认其为新化合物。化合物1的化学结构式见Fig.1。详细13C NMR数据见Tab.1，Tab.1为化合物1的13C NMR数据(600MHz，C5D5N)。
Fig.1HMBC and COSY correlations ofcompound 1
Table 1Chemical shifts of13C NMR(600MHz)for compounds 1(δ/ppm，C5D5N)
HPLC-ELSD色谱条件如下
色谱柱：AgilentEclipse XAmide(4.6x250mm，5μm)
流动相：乙睛-水(80：20)；流速：1L/min；
柱温：30℃进样量：20μL；
ELSD检测器漂移管温度80℃；撞击器状态：关闭。
载气压力：0.45Mpa雾化器流速：2.1L/min放大倍数：1.0倍
实施例2
取干燥薤1Kg粉碎，用90％乙醇溶液回流提取三次，乙醇溶液用量分别为10、8、6倍(W/V)，回流时间分别为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无乙醇味。浓缩液加水稀释，稀释液过HP20大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用氯仿-甲醇-水(8：5：1)为展开剂进行薄层层析检验(分别用A试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和E试剂(1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸(4；1)显色)，结果表明此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷。
取呋甾总皂苷50g，以乙酸乙酯：乙醇：水＝6：1.5：0.2(体积比)为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A21g；将组分A以二氯甲烷：甲醇：水(8：2：0.2，体积比)为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B 9.5g。将组分B以丙酮：水(2:1，体积比)为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C 3.6g，最后将组分C用乙腈：水(87：13，体积比)为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体4.1mg。
得到的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体HPLC-ELSD检测其纯度为98.3％。
实施例3
取鲜薤10Kg粉碎，用90％丙酮溶液浸提提取三次，丙酮溶液用量分别为10、8、6倍(W/V)，回流时间为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无丙酮味。浓缩液加水稀释，稀释液过AB-8大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用氯仿-甲醇-水(8：5：1)为展开剂进行薄层层析检验(分别用A试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和E试剂(1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸(4；1)显色)，结果表明此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷。
取呋甾总皂苷50g，以乙酸乙酯：乙醇：水＝6：1.5：0.2(体积比)为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A34g；将组分A以二氯甲烷：甲醇：水(8：2：0.2，体积比)为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B12.9g。将组分B以丙酮：水(2:1，体积比)为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C 4.6g，最后将组分C用乙腈：水(87：13，体积比)为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体4.9mg。
得到的5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体HPLC-ELSD检测其纯度为99.0％。
上述实施例仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种从薤中提取分离5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的方法，其特征在于以薤为原料经有机溶剂提取、过滤、浓缩、浓缩液用水稀释后过大孔吸附树脂柱吸附，用体积百分比浓度小于等于40％的乙醇、甲醇或丙酮水溶液进行洗脱得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的呋甾总皂苷，大孔吸附树脂选自AB-8、D101、HP20的一种或它们的两种或两种以上的混合树脂；呋甾总皂苷柱层析是以体积比为6：1.5：0.2的乙酸乙酯：乙醇：水为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D- 吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分A；将组分A以二氯甲烷：甲醇：水为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D- 吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分B，流动相体积比为8：2：0.2；将组分 B以丙酮：水为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D- 吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C，流动相体积比为2:1；最后将组分C用乙腈：水为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体，流动相体积比为87：13。
2.权利要求1所述的一种从薤中提取分离5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的方法，其特征在于：所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮或它们的两种或两种以上混合溶剂。
3.权利要求1所述的一种从薤中提取分离5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的方法，其特征在于：所述的薤是鲜薤或干燥的薤。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：取鲜薤10Kg搅碎，用90％乙醇溶液常温浸提三次，乙醇溶液用量分别为10、8、6倍(W/V)，时间分别为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无乙醇味；浓缩液加水稀释，稀释液过D-101大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用体积比8：5：1的氯仿-甲醇-水为展开剂进行薄层层析检验，分别用50ml 醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml和体积比4:1的1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸显色，结果显示此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷；取呋甾总皂苷50g，以体积比为6：1.5：0.2的乙酸乙酯：乙醇：水为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A 30.5g；将组分A以体积比为8：2：0.2的二氯甲烷：甲醇：水为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B10.2g；将组分B以体积比2：1的丙酮：水为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C3.4g，最后将组分C用体积比为87：13的乙腈：水为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体5mg。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：取干燥薤1Kg粉碎，用90％乙醇溶液回流提取三次，乙醇溶液用量分别为10、8、6 倍(W/V)，回流时间分别为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无乙醇味；浓缩液加水稀释，稀释液过HP20大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用体积比8：5：1的氯仿-甲醇-水为展开剂进行薄层层析检验，分别用50ml 醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml和体积比4:1的1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸显色，结果表明此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷；取呋甾总皂苷50g，以体积比6：1.5：0.2的乙酸乙酯：乙醇：水为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A21g；将组分A以体积比8：2：0.2的二氯甲烷：甲醇：水为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22， 16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B 9.5g；将组分B以体积比2:1的丙酮：水为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D- 吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C 3.6g，最后将组分C用体积比87：13的乙腈：水为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α- cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体4.1mg。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：取鲜薤10Kg粉碎，用90％丙酮溶液浸提提取三次，丙酮溶液用量分别为10、8、6倍(W/V)，回流时间为3h、2h、1h，合并三次提取液，回收溶剂至无丙酮味；浓缩液加水稀释，稀释液过AB-8大孔吸附树脂吸附，用去离子水洗至无色，用8倍柱体积的40％的丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后用体积比8：5：1的氯仿-甲醇-水为展开剂进行薄层层析检验，分别用50ml 醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml和体积比4:1的1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸显色，结果表明此时洗脱的成分是呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后减压回收溶剂，冷冻干燥，获得呋甾总皂苷；取呋甾总皂苷50g，以体积比6：1.5：0.2的乙酸乙酯：乙醇：水为流动相进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分A34g；将组分A以体积比8：2：0.2的二氯甲烷：甲醇：水为流动相再次进行硅胶柱层析分离，得到含有α-cholano-22， 16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体的组分B12.9g；将组分B以体积比2:1的丙酮：水为流动相进行ODS柱层析分离，得到含有5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷的组分C 4.6g，最后将组分C用体积比87：13的乙腈：水为流动相利用制备型高效液相色谱进行分离，得到5α-cholano-22，16-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷单体4.9mg。
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