CN105031178A - 一种高效利用知母的提取精制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高效利用知母的提取精制方法，属中药及天然药物技术领域，采用聚酰胺-大孔树脂联用技术同时精制了知母黄酮苷(芒果苷、新芒果苷)、知母总皂苷及知母总多糖。本发明工艺路线简单，不需要使用有毒试剂，生产过程绿色、安全、快速，适宜于规模化生产，可大大提高知母药材的利用度，提升中药产品价值，产生良好的社会效益和经济效益。

Description

一种高效利用知母的提取精制方法

技术领域

本发明属于中药及天然药物技术领域，具体涉及一种从知母中同时提取精制高纯度知母黄酮苷(芒果苷、新芒果苷)、知母总皂苷及知母总多糖的制备方法。

背景技术

知母为百合科植物知母(Anemarrhenaasphodeloides)的根茎，具有滋阴降火，润燥滑肠的功效。作为一种常用的中药，知母资源越来越宝贵，因此针对知母的高效综合利用是保护其资源的有效途径之一。

现代化学研究表明，知母中主要含有黄酮苷类成分(新芒果苷、芒果苷等)和甾体皂苷类成分(知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ等)，此外知母中还含有多糖类成分。

现代药理研究表明，知母具有抗病原微生物、抗血小板聚集、降血糖、解热、抗炎、降低转氨酶等多种药理活性。其中，知母皂苷类成分具有降血糖、治疗老年性痴呆、抗血凝、抗动脉粥样硬化及抗骨质疏松等药理作用，经水解后还形成的菝葜皂苷元，亦是一种十分重要天然药物成分，可用于激素等药物合成的原料药。而知母中黄酮类成分芒果苷及新芒果苷等具有降血糖的作用，可用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病，其作用机制为：保护、修复胰岛内分泌细胞而增加血清胰岛素浓度，并竞争性地抑制小肠上皮α-葡萄糖苷酶的活性，从而延缓肠道对糖的吸收，起到降糖的作用；还可能通过增加靶细胞胰岛素受体数目，改善靶细胞对胰岛素敏感性，减轻胰岛素抵抗，等途径降低血糖；并且对白内障、高血脂等糖尿病并发症有防治作用。而知母多糖有文献报道，具有免疫调节、抗炎等多种活性。

目前，已有专利“知母化学成分群提取物及其制备工艺”(申请号：201310430996.5)，公开了一种同时分离制备知母三种化学成分群提取物的制备工艺，采用溶剂法提取后，再经大孔树脂富集、酸水解、有机溶剂萃取及醇沉等方法进行知母总皂苷、知母皂苷元及知母多糖成分的分离制备。但该方案在实施时存在一个缺陷：由于知母中除了知母皂苷、知母多糖外，还含有大量的黄酮苷(芒果苷、新芒果苷等)，且这些黄酮苷的极性和知母皂苷相近，都属中等极性成分，因此，方案中采用75～95％乙醇加热回流提取时，极性相近的知母黄酮苷和知母皂苷均会被提取出来，在大孔树脂上也能同时被吸附和解吸附，因而采用这一方案分离制备获得的知母总皂苷中必会含有大量的黄酮苷类成分，从而影响知母总皂苷的纯度。同时，在实施过程中还采用氯仿或乙酸乙酯萃取，有毒有机溶剂的使用会带来溶剂残留而影响其品质。

专利“一种知母总黄酮提取物及其同时制备知母总黄酮提取物及总皂苷提取物的方法”(申请号201310332999.5)也公开了一种知母综合制备方法，与上述制备工艺类似，采用溶剂回流提取，再通过大孔树脂分离纯化。但实际上，知母黄酮苷和知母皂苷的极性接近，30％～90％乙醇提取后，采用单一树脂大孔树脂(或聚酰胺)为吸附剂，以一定浓度范围的乙醇溶液洗脱，获得知母总黄酮或知母总皂苷或两者的混合部位。这一方法主要存在以下两个问题，一是浪费了知母多糖活性部位，二是知母黄酮苷和知母总皂苷在单一树脂上的分离专属性较差，不能够获得真正纯度好的有效部位或成分。

综上，目前已有的报道或专利实施方案中，均没有解决高效综合利用知母的提取精制方法，方案仅针对其中的一类或两类成分进行制备，或者分离方案未有考虑到其成分结构的特殊性，无法达到各部位(活性成分)的高效分离。因此，如何通过绿色、便捷、有效的方案，综合制备获得知母药材中主要活性部位或成分，是解决知母资源高效利用的关键。

从成分极性上看，知母中的三类活性成分具有一定的差异，知母多糖为大极性类成分，而知母黄酮苷(芒果苷、新芒果苷等)及知母皂苷类成分极性相似，均为中等极性成分，因此仅从极性上来进行分离显然是具有一定的困难。但这三类成分的结构差异较大：黄酮苷类成分含酚羟基，可以与聚酰胺形成氢键而被特异性吸附；黄酮苷和皂苷均为糖苷类成分，可被大孔树脂吸附；而多糖类成分不具有以上两类特征，聚酰胺及大孔树脂均无法将其吸附。因此，考虑到知母中各类成分的特性及不同树脂的性质，若采用单一树脂(大孔树脂)进行分离，其分离效果往往不太理想，因此可采用聚酰胺-大孔树脂联用分离技术对知母中各类型成分进行精制分离，从而获得不同的活性部位，实现知母资源的综合利用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题，是提供一种综合利用知母的提取精制方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高效利用知母的提取精制方法，它包括如下步骤：

a.取知母药材，经0～50％乙醇提取，减压回收提取液，再加水使药液中每毫升含生药量0.1～1.0g，调节药液pH至2～6，依次通过聚酰胺色谱柱和大孔树脂色谱柱；

b.知母总多糖制备：收集通过大孔树脂后的流出液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.08～1.22，加乙醇至醇浓度为50～90％，放置，析出沉淀，滤过，干燥，即得知母总多糖；

c.芒果苷和新芒果苷的制备：聚酰胺色谱柱先以1～3倍柱体积去离子水洗脱，再依次以1～3倍柱体积的10～30％乙醇和40～80％乙醇洗脱，收集10～30％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，0～10℃冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集40～80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，0～10℃冷藏放置，析晶，即得芒果苷；

d.知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以1～3倍柱体积去离子水洗脱，再以2～6倍柱体积的50～90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。

以上所述的高效利用知母的提取制备方法，所用聚酰胺的规格为30-100目，与知母药材的重量比为3：1～4；所用大孔树脂的类型为非极性或弱极性型大孔树脂，与知母药材的重量比为2：1～4。

以上所述的高效利用知母的提取精制方法，芒果苷和新芒果苷的制备方法为：聚酰胺色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再依次以2倍柱体积20％乙醇和60％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至洗脱液10％体积，4℃冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，4℃冷藏放置，析晶，即得芒果苷。

以上所述的高效利用知母的提取制备方法，知母总皂苷的制备方法为：大孔树脂色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以4倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。

以上所述的高效利用知母的提取制备方法，所述减压回收乙醇的条件为：压力为-0.01～-0.12MPa，温度为60～80℃。

以上所述的高效利用知母的提取制备方法，聚酰胺与知母药材的重量比为2：1；大孔树脂与知母药材的重量比为1：1。

有益效果：本发明与现有技术相比具有如下优点：

(1)本发明的特点在于充分考虑了知母所含化学成分类型特征，并利用聚酰胺对知母黄酮苷吸附的专属性、大孔树脂对知母皂苷的吸附特性以及各类树脂对知母多糖均不能吸附的性质，建立了知母综合利用提取分离和精制方案，工艺过程中避免了有毒试剂的使用，与现有技术相比更为简单、绿色和安全。

(2)本发明聚酰胺及大孔树脂可重复使用，因此成本相对较低，适宜于规模化生产，可大大提高知母的综合利用度，节省中药资源，产生良好的社会效益和经济效益。

(3)本发明工艺路线绿色、简单，适宜于规模化生产，所制备的知母黄酮苷(芒果苷、新芒果苷)、知母总皂苷和知母总多糖的含量较高。

(4)为了更好地理解本发明的有益效果，下面用聚酰胺和大孔树脂吸附实验作为进一步的说明。

a.聚酰胺对不同pH知母提取液中知母黄酮苷、知母皂苷及知母多糖类成分的静态吸附实验

目的：聚酰胺吸附的原理主要是氢键吸附，对于含有酚羟基的黄酮类成分吸附具有专属性，且结构中酚羟基数目的多少决定了聚酰胺吸附力的强弱。由于酚羟基在不同pH值时，其存在状态会存在不同，会影响其吸附效果，因此为了优选知母提取液中黄酮苷的吸附条件，以总多糖、代表性黄酮苷及皂苷类成分为指标，对不同pH知母提取液各类型成分的聚酰胺吸附进行了考察。

材料：知母水提取液(含生药量为0.5g/mL)：取知母药材500g，加水4L提取2小时，再加水3L提取2小时，滤过，合并滤液浓缩至含生药量为0.5g/mL的药液。其中芒果苷含量5mg/mL，新芒果苷含量4mg/mL，知母皂苷BⅡ含量10mg/mL，知母皂苷BⅢ含量5mg/mL，糖类32mg/mL。聚酰胺(30-100目，国药集团化学试剂有限公司)

方法和结果：称取5g聚酰胺树脂9份，分别加入pH值为2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0的知母水提取液50mL，置25℃水浴振荡器中，吸附12小时，分别取吸附前药液和吸附后的药液，HPLC法对芒果苷、新芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ进行测定，硫酸蒽酮比色法测定糖类成分。计算其聚酰胺吸附率。

吸附率(％)＝(吸附前药液中含量-吸附后药液中含量)/吸附前药液中含量*100％

表1聚酰胺对不同pH知母提取液中黄酮苷、皂苷及多糖类成分的吸附

结果显示，不同pH对芒果苷和新芒果苷的吸附影响较大，当药液pH≤6时，由于芒果苷和新芒果苷结构中的酚羟基没有被离子化，因而聚酰胺吸附率较高(90％左右)；而知母皂苷BⅡ、BⅢ及多糖类成分结构中均不含酚羟基，且多糖类成分极性较大，在各pH值均只存在一些非异性吸附(吸附率＜3％)，可以认为均不被聚酰胺吸附。

结论：在pH值2.0-6.0时，聚酰胺对知母提取液中黄酮苷类成分(芒果苷、新芒果苷等)产生特异性吸附，而对知母皂苷(知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ等)及多糖类成分均不产生吸附。

b.不同醇浓度下知母总黄酮在聚酰胺上的解吸附实验

目的：考察不同醇浓度下芒果苷和新芒果苷在聚酰胺树脂上的解吸附情况。

材料：知母水提取液(含生药量为0.5g/mL)，聚酰胺(30-100目，国药集团化学试剂有限公司)，乙醇(食用级)。

方法和结果：称取5g聚酰胺树脂6份，分别加入pH＝4.0的知母水提取液50mL，置25℃水浴振荡器中，吸附12小时，分别取吸附前药液和吸附后的药液，HPLC法测定对芒果苷和新芒果苷的吸附量(mg)，再分别滤过，对各聚酰胺树脂中加入50mL不同浓度的乙醇水溶液，置25℃水浴振荡器中，解吸附12小时，测定药液中的解吸附量(mg)。计算其聚酰胺解吸附率。

解吸附率(％)＝知母黄酮解吸附量/知母黄酮吸附量*100％

表2不同醇浓度下知母总黄酮在聚酰胺上的解吸附

结果显示，不同浓度乙醇水溶液对芒果苷、新芒果苷的解吸附率差异较大，当醇浓度在10-30％时，芒果苷的基本上未能被解吸附，而新芒果苷则可被相应乙醇溶液解吸附下来；而当醇浓度大于40％时，两者均可被解吸附下来。

结论：若在制备过程中想获得知母总黄酮，可考虑采用大于40％-80％的乙醇进行洗脱即可获得总黄酮苷；若想获得相应的单一活性成分，则可采用10％-30％乙醇先行洗脱，可获得新芒果苷活性成分，再以40％-80％乙醇洗脱，可获得芒果苷类成分。

c.不同大孔树脂对聚酰胺吸附后知母药液中总皂苷及多糖类成分的吸附实验

目的：考察不同大孔树脂对知母药液中知母皂苷及糖类成分的吸附情况，优选合适的大孔树脂。

材料：聚酰胺吸附后知母水提取液(含生药量为0.5g/mL)：取知母水提取液(含生药量为0.5g/mL)1000mL，调节pH值至4.0，滤过，再通过聚酰胺色谱柱(聚酰胺干重200g)，收集流出液，流出液中不含有芒果苷和新芒果苷，知母皂苷类成分知母皂苷BⅡ含量9.36mg/mL，知母皂苷BⅢ含量4.65mg/mL，多糖类30.28mg/mL。

大孔树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)，类型如下：

表3不同大孔树脂类型理化性质

方法和结果：称取各类型大孔树脂5g，共8份，分别加入聚酰胺吸附后知母水提取液50mL，置25℃水浴振荡器中，吸附12小时，分别取吸附前药液和吸附后的药液，HPLC-ELSD法对其进行含量测定，硫酸蒽酮比色法测定糖类成分。计算其吸附率。

表4不同大孔树脂对知母药液中总皂苷及糖类成分的吸附

结果显示，糖类成分极性很大，各类大孔树脂均不产生特异性吸附；而不同大孔树脂对知母皂苷BⅡ、BⅢ的吸附影响较大，其中以D101和AB-8的吸附效果最佳，HPD300、HPD722次之，其余各类型树脂吸附效率不高；而对于知母多糖，各类型大孔树脂有仅少量的非特异性吸附，可以认为对多糖类成分基本不吸附。

结论：从吸附效率上看，可选用非极性及弱极性树脂对知母皂苷进行吸附。

d.不同醇浓度下知母总皂苷在大孔树脂上的解吸附实验

目的：考察不同醇浓度下知母皂苷BⅡ、BⅢ在D101和AB-8大孔树脂上的解吸附情况，优选合适的洗脱溶剂。

材料：聚酰胺吸附后知母水提取液(含生药量为0.5g/mL)，D101和AB-8大孔树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)，乙醇(食用级)。

方法和结果：称取大孔树脂(D101和AB-8)5份，分别加入聚酰胺吸附后知母水提取液50mL，置25℃水浴振荡器中，吸附12小时，分别取吸附前药液和吸附后的药液，HPLC法测定对甘草苷的吸附量(mg)，再分别滤过，在各大孔树脂中加入50mL不同浓度的乙醇水溶液，置25℃水浴振荡器中，解吸附12小时，测定药液中的解吸附量(mg)。计算其解吸附率。

解吸附率(％)＝知母皂苷解吸附量/知母皂苷吸附量*100％

表5不同醇浓度下知母总皂苷在大孔树脂上的解吸附率(％)

结果显示，不同醇浓度下知母皂苷BⅡ、BⅢ的解吸附率差异较大，当醇浓度在大于50％时，知母皂苷BⅡ、BⅢ即可被解吸附下。

结论：知母皂苷BⅡ、BⅢ类成分在大孔树脂柱上的洗脱溶剂选择为50-90％乙醇。

附图说明

图1为本发明的制备工艺流程图

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

取知母5kg，回流提取两次，第一次加8倍量50％乙醇，回流提取2h，第二次加6倍量50％乙醇，回流提取2h，合并提取液，滤过，滤液在-0.12MPa、60℃下减压回收乙醇，再加水至10L(生药量0.5g/mL)，调节pH至6.0，依次通过30-100目聚酰胺(干重为5kg)色谱柱和AB-8大孔树脂(干重为5kg)色谱柱；

知母总多糖制备：收集流出液，浓缩至65℃时相对密度为1.15，加95％(v/v)乙醇使含醇量达80％(v/v)，搅拌，静置，过滤，干燥，即得知母总多糖306.0g，含量为73.8％；

芒果苷及新芒果苷制备：聚酰胺色谱柱先以3倍柱体积去离子水洗脱，再以3倍柱体积的10％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至1.5L，冷藏放置12小时，析晶，过滤，干燥，即得新芒果苷42.4g，含量为93.2％；聚酰胺色谱柱继以再以3倍柱体积的40％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至1.5L，冷藏放置12小时，析晶，过滤，干燥，即得芒果苷33.4g，含量为89.6％；

知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以3倍柱体积去离子水洗脱，再以6倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷226.5g，含量为79.6％；

实施例2

取知母2kg，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的10倍量，煎煮2h，第二次加水为药材重量的8倍量，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液在-0.07MPa、80℃下减压浓缩至10L(生药量0.2g/mL)，调节pH至4.0，依次通过30-100目聚酰胺(干重为4kg)色谱柱和D101大孔树脂(干重为4kg)色谱柱；

知母总多糖制备：收集流出液，浓缩至50℃时相对密度为1.15，加95％(v/v)乙醇至醇浓度为70％，放置，析出沉淀，滤过，干燥，即得知母多糖108.2g，含量为78.8％；

芒果苷及新芒果苷制备：聚酰胺色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以2倍柱体积的20％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至0.5L，冷藏放置12小时，析晶，过滤，干燥，即得新芒果苷15.6g，含量为89.4％；聚酰胺色谱柱继以再以2倍柱体积的50％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至0.5L，冷藏放置24小时，析晶，过滤，干燥，即得芒果苷13.7g，含量为92.6％；

知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以4倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，得知母总皂苷111.3g，含量为87.6％。

实施例3

取知母4kg，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8倍量，煎煮2h，第二次加水为药材重量的6倍量，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液在-0.10MPa、70℃下减压浓缩至40L(生药量0.1g/mL)，调节pH至5.0，依次通过30-100目聚酰胺(干重为2.5kg)色谱柱和AB-8大孔树脂(干重为2.5kg)色谱柱；

甘草总多糖制备：收集流出液，浓缩至65℃时相对密度为1.08，加95％(v/v)乙醇使含醇量达60％(v/v)，搅拌，静置12小时，过滤，干燥，即得知母多糖203.3g，含量为82.2％；

芒果苷及新芒果苷制备：聚酰胺色谱柱先以1.5倍柱体积去离子水洗脱，再以1.5倍柱体积的30％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至1.0L，冷藏放置12小时，析晶，过滤，干燥，即得新芒果苷31.7g，含量为88.1％；聚酰胺色谱柱继以再以1.5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至1.0L，冷藏放置24小时，析晶，过滤，干燥，即得芒果苷25.3g，含量为84.3％；

知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以2.5倍柱体积去离子水洗脱，再以2倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷222.6g，含量为75.1％。

实施例4

取知母10kg，回流提取两次，第一次加8倍量25％乙醇，回流提取2h，第二次加6倍量25％乙醇，回流提取2h，合并提取液，滤过，滤液在-0.08MPa、70℃下减压回收乙醇，再加水至10L(生药量1.0g/mL)，调节pH至3，依次通过30-100目聚酰胺(干重为7kg)色谱柱和D101大孔树脂(干重为7kg)色谱柱；

知母总多糖制备：收集流出液，浓缩至65℃时相对密度为1.22，加95％(v/v)乙醇使含醇量达85％(v/v)，搅拌，静置12小时，过滤，干燥，即得知母多糖567.7g，含量为67.9％；

芒果苷及新芒果苷制备：聚酰胺色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以2倍柱体积的20％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至2.0L，冷藏放置12小时，析晶，过滤，干燥，即得新芒果苷80.6g，含量为87.7％；聚酰胺色谱柱继以再以1.5倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至2.0L，冷藏放置24小时，析晶，过滤，干燥，即得芒果苷75.4g，含量为88.1％；

知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以1倍柱体积去离子水洗脱，再以2倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷478.0g，含量为70.6％。

Claims (6)

1.一种高效利用知母的提取精制方法，其特征在于，它包括如下步骤：

a.取知母药材，经0～50％乙醇提取，减压回收提取液，再加水使药液中每毫升含生药量0.1～1.0g，调节药液pH至2～6，依次通过聚酰胺色谱柱和大孔树脂色谱柱；

b.知母总多糖制备：收集通过大孔树脂后的流出液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.08～1.22，加乙醇至醇浓度为50～90％，放置，析出沉淀，滤过，干燥，即得知母总多糖；

c.芒果苷和新芒果苷的制备：聚酰胺色谱柱先以1～3倍柱体积去离子水洗脱，再依次以1～3倍柱体积的10～30％乙醇和40～80％乙醇洗脱，收集10～30％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，0～10℃冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集40～80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，0～10℃冷藏放置，析晶，即得芒果苷；

d.知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以1～3倍柱体积去离子水洗脱，再以2～6倍柱体积的50～90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。

2.根据权利要求1所述的高效利用知母的提取制备方法，其特征在于，所用聚酰胺的规格为30-100目，与知母药材的重量比为3：1～4；所用大孔树脂的类型为非极性或弱极性型大孔树脂，与知母药材的重量比为2：1～4。

3.根据权利要求1所述的高效利用知母的提取精制方法，其特征在于，芒果苷和新芒果苷的制备方法为：聚酰胺色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再依次以2倍柱体积20％乙醇和60％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至洗脱液20％体积，4℃冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，4℃冷藏放置，析晶，即得芒果苷。

4.根据权利要求1所述的高效利用知母的提取制备方法，其特征在于，知母总皂苷的制备方法为：大孔树脂色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以4倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。

5.根据权利要求1所述的高效利用知母的提取制备方法，其特征在于，所述减压回收乙醇的条件为：压力为-0.01～-0.12MPa，温度为60～80℃。

6.根据权利要求2所述的高效利用知母的提取制备方法，其特征在于，聚酰胺与知母药材的重量比为2：1；大孔树脂与知母药材的重量比为1：1。