CN109293726A

CN109293726A - 二醇型人参皂苷提取物及其制备方法

Info

Publication number: CN109293726A
Application number: CN201811282722.5A
Authority: CN
Inventors: 朴明贯; 叶超; 滕聪
Original assignee: Yanbian University
Current assignee: Yanbian University
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2018-10-31
Publication date: 2019-02-01

Abstract

本发明公开了一种二醇型人参皂苷提取物的制备方法，包括：将人参粗粉与pH为11～13的Ca(OH)₂水溶液按料液比g:mL＝1:10～15的比例混合，在提取温度为20℃～35℃，超声功率120w～160w的条件下进行提取，提取液过滤，得人参皂苷提取液的步骤；将人参皂苷提取液通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱，然后用体积百分浓度为35％～85％的乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥得二醇型人参皂苷提取物的步骤。经浓缩、冻干得到的人参二醇型人参皂苷提取物的干燥品中，四种二醇型人参皂苷Rb₁，Rb₂，Rc，Rd的含量之和不低于38％。本发明方法简便易行，成本低廉，质量可控，适用于工业化生产。

Description

二醇型人参皂苷提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法，具体涉及二醇型人参皂苷提取物及其制备方法。

背景技术

人参是五加科多年生草本植物(Panax ginseng，C.A.Mey.)，味甘，微苦，性平和。人参皂苷是人参主要的活性成分，其种类和含量是评价人参及其产品质量的重要指标。按照人参皂苷苷元的差别，将人参皂苷分成齐墩果酸型皂苷、原人参三醇型皂苷和原人参二醇型皂苷。二醇型人参皂苷含有多种人参皂苷，如Rb₁、Rb₂、Rc、Rd、Rg、Re等，是人参的主要活性成分，具有补元气、补脾益肺、安神生津、抗衰老等显著功能。

提取人参皂苷的传统方法有煎煮法，回流法，但存在着提取效率低，提取时间长，有机溶剂用量大的缺点。近些年来，提取人参皂苷的新方法也不断地出现，例如，超临界流体萃取法、泡沫提取法、超声提取法等等。其中，超声提取法便捷、效率高，广泛应用于人参皂苷的提取。提取所用溶剂有水、甲醇、乙醇和正丁醇等，目前多以甲醇、乙醇为主，但醇类对各种物质都有较高的溶解度，使得提取液中杂质较多，特别是脂溶性色素较多，导致所制备的总皂苷纯度低，外观颜色深。二醇型人参皂苷含有丙二酰基，故极性较大，甲醇和乙醇等中等极性的溶剂对极性较大的丙二酰基系列的人参皂苷的提取率较低。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种五加科多年生草本植物(Panax ginseng，C.A.Mey.)人参的二醇型人参皂苷提取物及其制备方法。本发明方法制备的二醇型人参皂苷提取物干燥品中的四种主要二醇型人参皂苷Rb₁，Rb₂，Rc，Rd的含量之和不低于38％。

本发明的技术方案如下：

一种二醇型人参皂苷提取物，提取物中含二醇型人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rc 和Rd的含量之和不低于38％；

所述二醇型人参皂苷提取物的制备方法包括如下步骤：

(1)将人参粗粉与pH为11～13的Ca(OH)₂水溶液按料液比g:mL ＝1:10～15的比例混合，在提取温度为20℃～35℃，超声功率120w～160w的条件下进行提取，提取液过滤，得人参皂苷提取液；

(2)将步骤(1)得到的人参皂苷提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，然后用35％～85％的乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥。

在上述技术方案中，在步骤(2)中，先用3～6倍柱体积的水洗脱，然后依次用3～6倍柱体积的35％乙醇、3～6倍柱体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，经浓缩、冷冻干燥得二醇型人参皂苷提取物的干燥品。

在上述技术方案中，在步骤(2)中，先用3～6倍柱体积的水洗脱，然后依次用3～6倍柱体积的35％乙醇、3～6倍柱体积的60～70％乙醇、3～6倍柱体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，经浓缩、冷冻干燥得二醇型人参皂苷提取物的干燥品。

本发明中所述乙醇百分浓度(％)是指体积百分浓度。

本发明中，将步骤(1)得到的人参皂苷提取液通过大孔吸附树脂柱吸附，静置2h以上，使人参皂苷等非极性以及弱极性成分充分吸附于大孔吸附树脂，之后，先用水洗脱，以除去未吸附的大部分极性杂质；然后用35％乙醇洗脱，以除去三醇型人参皂苷和少部分杂质；之后再用60～70％乙醇洗脱，进一步除去其它型人参皂苷和杂质，以提高提取物中的二醇型人参皂苷的纯度，本发明中该步骤可省略；最后用85％乙醇洗脱，以收集二醇型人参皂苷，主要含有Rb₁、Rb₂、Rc和Rd四种，其含量之和不低于总提取物量的38％。

在上述技术方案中，在步骤(1)中，所述的提取步骤中，提取次数为 1～3次，每次提取时间为20～60min，优选为20min。

在上述技术方案中，在步骤(1)中，所述的Ca(OH)₂水溶液的pH为13。

在上述技术方案中，在步骤(1)中，将人参粗粉与pH为13的Ca(OH)₂水溶液按料液比g:mL＝1:10的比例混合，在提取温度为20℃，超声功率160w 的条件下进行提取。

在上述技术方案中，在步骤(2)中，将所述的人参皂苷提取液，过滤，滤液浓缩至浸膏，加入80％乙醇溶解，经过滤得人参皂苷滤液；人参皂苷滤液浓缩除去乙醇，加入蒸馏水溶解，得人参皂苷水溶液；人参皂苷水溶液以流速0.2～0.3mL/s的速率通过预先用水洗至无乙醇味的大孔吸附树脂柱，上柱结束后可放置2h或以上，以使滤液中的人参皂苷等成分充分吸附于大孔吸附树脂上。

在上述技术方案中，所述的大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂。优选的，所述大孔吸附树脂可采用大孔吸附树脂D101以及与D101相似性能的大孔吸附树脂，如HPD-100。

本发明采用强碱(pH为11-13，优选为13)水溶液，以碱水超声法提取，由于原二醇型皂苷在弱碱性环境中能脱去酰基，使其变成相应的人参皂苷，极性变小，使人参皂苷提取率大大增加；又由于提取液为碱性，故提取过程中提取液不易发霉变质。本发明采用Ca(OH)₂溶液作为碱性提取剂，植物中存在的大量黏液、果胶和酸性多糖等水溶性物质可与Ca(OH)₂溶液中的钙离子生成难溶于水的沉淀而被除去，有利于二醇型人参皂苷的提取和分离，人参中二醇型人参皂苷的提取率大大增加。

本发明采用大孔吸附树脂柱进一步精制分离碱水超声法提取得到的人参皂苷提取液，通过对大孔吸附树脂分离条件的选择和优化，最终提取物中四种主要二醇型人参皂苷Rb₁，Rb₂，Rc，Rd的含量之和达38％以上。

本发明的制备方法成本低，操作简单，易于控制，适于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但本发明并不局限于这些实施方式。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学公司购买。

实施例采用的材料以及二醇型人参皂苷提取率测定方法：

人参粗粉：五年生干燥人参，粉碎，粉末过四号筛，得粒径约250μm的粗粉，用于提取。

二醇型人参皂苷提取率测定：将提取液过滤，注入高效液相色谱进行含量测定，以二醇型人参皂苷Rc、Rd、Rb₁、Rb₂的标准曲线回归方程计算四种皂苷在提取液中含量，计算二醇型人参皂苷的提取率，提取率计算公式如下：

高效液相色谱条件：色谱柱Hypersil Gold C18(250mm×4.6μm,5μm)，检测波长为203nm，进样量为10μL，柱温为40℃，流速为1.000mL/min，梯度洗脱如下表：

表1梯度洗脱表

实施例1

将人参粗粉10g与pH＝11的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:15(g:mL)的比例混合，在提取温度为35℃，超声功率为120w，提取时间40min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.338％。

实施例2

将人参粗粉10g与pH＝13的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:15(g:mL)的比例混合，在提取温度为35℃，超声功率为120w，提取时间40min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.627％。

实施例3

将人参粗粉10g与pH＝11的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:10(g:mL)的比例混合，在提取温度为35℃，超声功率为120w，提取时间40min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.363％。

实施例4

将人参粗粉10g与pH＝11的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:15(g:mL)的比例混合，在提取温度为20℃，超声功率为120w，提取时间40min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.374％。

实施例5

将人参粗粉10g与pH＝11的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:15(g:mL)的比例混合，在提取温度为35℃，超声功率为160w，提取时间40min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.342％。

实施例6

将人参粗粉10g与pH＝11的Ca(OH)₂水溶液按料液比＝1:15(g:mL)的比例混合，在提取温度为35℃，超声功率为120w，提取时间60min的条件下进行提取，提取完成后将药物残渣过滤，得人参皂苷提取液。经HPLC方法进行含量测定，二醇型人参皂苷的提取率为0.338％。

实施例7

上述实施例2制备得到的提取液为例，将提取得到的人参皂苷提取液采用大孔吸附树脂D101进行分离，经浓缩、干燥得二醇型人参皂苷提取物干燥品，具体步骤如下：

(1)将大孔吸附树脂装入分离柱中，用水洗柱子至无醇味；

(2)将人参皂苷提取液过滤，滤液浓缩至浸膏，加入80％乙醇溶解，经过滤得人参皂苷滤液；人参皂苷滤液浓缩除去乙醇，加入蒸馏水溶解，得人参皂苷水溶液；

(3)人参皂苷水溶液湿法上柱，流速为每秒0.2mL，静置2小时后用4 倍柱体积水洗柱，以除去大部分杂质，然后用3倍柱体积35％乙醇洗脱，除去三醇型人参皂苷和少部分杂质，再用3倍柱体积85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液；

(4)将85％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩液在-20℃下冷冻干燥72h，制得二醇型人参皂苷提取物的干燥品，将其溶于乙醇，经HPLC检测，二醇型人参皂苷Rb₁，Rb₂，Rc，Rd的含量之和占干燥品总质量的42％。

实施例8

上述实施例2制备得到的提取液为例，将提取得到的二醇型人参皂苷提取液采用大孔吸附树脂D101进行分离，经浓缩、干燥得二醇型人参皂苷提取物干燥品，具体步骤如下：

(1)将大孔吸附树脂装入分离柱中，用水洗柱子至无醇味；

(3)人参皂苷水溶液湿法上柱，流速为每秒0.2mL，静置2h后用4倍柱体积水洗柱，以除去大部分杂质，然后用3倍柱体积35％乙醇洗脱，除去三醇型人参皂苷和少部分杂质，接着用3倍柱体积60％乙醇洗脱，继续除去其它型人参皂苷和杂质，最后用3倍柱体积85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液。

(4)将85％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩液在-20℃下冷冻干燥72h，制得二醇型人参皂苷提取物的干燥品，将其溶于乙醇，经HPLC检测，二醇型人参皂苷Rb₁，Rb₂，Rc，Rd的含量之和占干燥品质量的46％。

以上仅为本发明的部分实施方式，其中在碱水超声提取二醇型人参皂苷过程中，提取温度，提取时间，提取功率，碱水pH和料液比仍有多种选择，柱分离精制纯化二醇型人参皂苷过程中，洗脱液乙醇浓度和流速也还有多种选择，只要使用了本发明所述工艺，均应落入本发明的保护范围。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims

1.一种二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，提取物中含二醇型人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rc和Rd的含量之和不低于38％；

所述二醇型人参皂苷提取物的制备方法包括如下步骤：

(1)将人参粗粉与pH为11～13的Ca(OH)₂水溶液按料液比g:mL＝1:10～15的比例混合，在提取温度20℃～35℃、超声功率120w～160w的条件下进行提取，提取液过滤，得人参皂苷提取液；

(2)将步骤(1)得到的人参皂苷提取液通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱，然后用35％～85％的乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(2)中，用3～6倍柱体积的水洗脱，然后依次用3～6倍柱体积的35％乙醇、3～6倍柱体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥。

3.根据权利要求1所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(2)中，用3～6倍柱体积的水洗脱，然后依次用3～6倍柱体积的35％乙醇、3～6倍柱体积的60～70％乙醇、3～6倍柱体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥。

4.根据权利要求1所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(1)中，所述的提取步骤中，提取次数为1～3次，每次提取时间为20～60min。

5.根据权利要求1所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(1)中，所述的Ca(OH)₂水溶液的pH为13。

6.根据权利要求5所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(1)中，将人参粗粉与pH为13的Ca(OH)₂水溶液按料液比g:mL＝1:10的比例混合，在提取温度为20℃，超声功率160w的条件下进行提取。

7.根据权利要求1所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，在步骤(2)中，将所述的人参皂苷提取液过滤后，滤液浓缩至浸膏，加入80％乙醇溶解，经过滤得人参皂苷滤液；人参皂苷滤液浓缩除去乙醇，加入蒸馏水溶解，得人参皂苷水溶液；人参皂苷水溶液以流速0.2～0.3mL/s的速率通过预先用水洗至洗脱液无乙醇味的大孔吸附树脂柱。

8.根据权利要求1～7的任一项所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂。

9.根据权利要求8所述的二醇型人参皂苷提取物，其特征在于，所述的非极性大孔吸附树脂为大孔吸附树脂D101。