CN102477040A

CN102477040A - 一种石斛碱的制备方法

Info

Publication number: CN102477040A
Application number: CN2010105578429A
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-11-25
Filing date: 2010-11-25
Publication date: 2012-05-30

Abstract

本发明涉及一种石斛碱的制备方法，其特征在于，将石斛药材粉碎，用少量氨水浸润，再加入高浓度乙醇液超声提取2～3次，提取液用超滤膜加压过滤，再经纳滤膜浓缩，浓缩液用酸水萃取2～3次，取酸水层碱化，过滤，沉淀物用乙醚溶解，与少量硅胶拌匀后，挥干溶剂，上样，采用分配色谱分离，薄层监测，收集洗脱液，减压浓缩蒸干即得产品。本工艺操作简单，制备过程能耗低，设备投入小，产品含量高、质量好。

Description

一种石斛碱的制备方法

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种石斛碱的制备方法。

背景技术：

石斛碱，是一种四氢吡咯类生物碱，为疏水性弱碱。

分子式：C₁₆H₂₅NO₂。分子量：263.27。

《中国药典》中记载：中药石斛原植物为兰科石斛属(Dendrobium)植物的茎；性味甘、淡、微咸、寒；入胃、肺、肾经；功效：益胃生津，滋阴清热。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。历代本草对它的功效也都有详细记载，《本经》曰：“主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴，久服疗肠胃。”现代药效研究证明，石斛具有增强人体免疫力，消除肿瘤，抑制癌症，恢复嗓音，抗声带疲劳等作用。传统认为质重、嚼之粘牙、味甘、无渣者为优质石斛，也有将石斛碱的含量作为衡量石斛药材质量的标准。

生物碱是石斛药材中最重要的活性成分之一，也是最早分离并进行结构确认的化合物，1932年铃木秀干等从金钗石斛中首次获得生物碱，命名为石斛碱。石斛碱具有止痛、解热、抗肿瘤等作用，可降低心率、血压、减慢呼吸，并可解巴比妥中毒，具有较高的研究开发价值。

石斛属不同的植物生物碱含量差别较大，其中金钗石斛的生物碱含量最高。现有工艺也多是从金钗石斛中提取，如华茉莉等发表的“自动电位滴定法测定金钗石斛药材中总生物碱的含量”，该文献公开的方法是高醇回流提取，浓缩至浸膏，盐酸溶解后上强酸性阳离子树脂，5％氨水-50％乙醇液洗脱，洗脱液蒸干得产品，该方法仅制得石斛总生物碱，且制备过程中采用回流，浓缩等过程，能耗较大，氨水洗脱产生的废液难于处理；再如钱桂敏等发表的“金钗石斛鲜品闪式提取方法的工艺研究”，该文献采用的工艺是75％乙醇破碎提取，超滤，滤液浓缩至干，氯仿超声萃取，萃取液浓缩至干，该方法仅得到粗提物。

现有专利“从金钗石斛中提取纯化石斛碱的方法”(专利号：201010300497.0)采用的工艺是酸性醇溶液回流提取，过阳离子树脂吸附、洗脱，洗脱液用氯仿、乙醚萃取得石斛碱粗品，再经制备HPLC制得纯度较高的石斛碱。该工艺设备投资大，处理量小。现有工艺存在着，提取成本高，产品含量低、品质差等诸多缺点。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种质量好、设备投入小的石斛碱的制备方法

本发明的目的是采用以下技术方案实现的：

一种石斛碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：将石斛药材粉碎，用少量氨水浸润，再加入药材3～10倍量的高浓度乙醇超声提取2-3次，每次30～50分钟，合并得提取液；

2)膜浓缩：将上述提取液用超滤膜加压过滤，再经纳滤膜浓缩，得浓缩液；

3)萃取：上述滤液加入等量的酸性水溶液萃取2～3次，取酸水层碱化，过滤得石斛碱粗品；

4)分配柱色谱分离：石斛粗品用乙醚溶解，与少量硅胶拌匀后，挥干溶剂，固体上样，采用分配柱色谱分离，氯仿洗脱，薄层监测，收集洗脱液，蒸干即得产品。

所述步骤1)中的氨水用量是物料的1.5～3倍，浸润时间3～5h，高浓度乙醇是70～95％乙醇，提取温度为40～70℃。

所述步骤2)中的超滤膜是截留分子量6000～10000的中空纤维膜，加压控制在0.2～0.7Mpa，纳滤膜为截留分子量100-200的纳滤膜。

所述步骤3)中的酸性水溶液是pH2～3盐酸或者硫酸，碱化时采用10％NaOH或8％KOH，调节至pH910。

所述步骤4)中的分配柱分离的具体方法是：以60～100目的硅胶为支持剂，用量是上样量的30～50倍，以氯仿饱和的pH4.5缓冲液为固定相，用pH4.5缓冲液饱和的氯仿洗脱，洗脱液流速控制1～1.5BV/h，洗脱剂用量5～12BV。

所述步骤4)中pH4.5的缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

综上所述，本发明存在以下优点：氨水浸润，使生物碱游离，利于提取；高浓度醇超声提取，节约能耗，提取率高；膜浓缩，超滤膜滤去大分子物质，纳滤膜截留目标产物，操作简便且节约能耗，膜可重复利用；酸水萃取除去脂溶性杂质，碱液沉淀制得总生物碱；分配柱色谱分离纯化得到较纯净的石斛碱，工艺筒单易操作，能耗较低，设备投入小。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施实例中石斛碱的监测均采用薄层监测法(参照“中药活性成分分析手册”)，具体方法如下：

薄层色谱条件：

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：氯仿-甲醇(10∶0.8)；

显色剂：改良碘化铋钾试液；

氨蒸气饱和下展开，展距10cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液，供试品在与对照品色谱相应的位置上，有一相同颜色的单一斑点。

实施例1：

将金钗石斛药材粉碎，取100g，加入200ml氨水浸润3个小时，再加入0.8L80％乙醇超声提取50分钟，提取温度为60℃，过滤，滤渣再加入0.5L80％乙醇超声提取30分钟，提取温度为50℃，过滤，合并滤液后，加压通过截留分子量10000的中空超滤膜，压力控制0.2Mpa左右，滤液再经纳滤膜浓缩至0.5L，取0.5LpH2的盐酸水溶液萃取两次，合并萃取液，用10％NaOH调节至pH9.5，滤出沉淀物干燥，得石斛碱粗品3.2g；取120980目硅胶加入100g的pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液(预先用氯仿饱和)，再加入缓冲液饱和的氯仿浸泡，调成稀糊，湿法装柱，将石斛碱粗品用20ml乙醚溶解，与15g硅胶拌匀，挥干乙醚，上柱，用缓冲液饱和的氯仿洗脱，薄层监测，收集高浓度洗脱液，蒸干即得产品0.53g。

实施例2：

将金钗石斛药材粉碎，取500g，加入900ml氨水浸润4个小时，再加入4L85％乙醇超声提取70分钟，提取温度为60℃，过滤，滤渣再加入3L80％乙醇超声提取40分钟，提取温度为55℃，过滤，合并滤液后，加压通过截留分子量8000的中空超滤膜，压力控制0.3Mpa左右，滤液再经纳滤膜浓缩至2L，取2LpH2的盐酸水溶液萃取两次，合并萃取液，用8％KOH调节至pH10，滤出沉淀物干燥，得石斛碱粗品11.8g；取400g60目硅胶加入300g的pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液(预先用氯仿饱和)，再加入缓冲液饱和的氯仿浸泡，调成稀糊，湿法装柱，将石斛碱粗品用90ml乙醚溶解，与40g硅胶拌匀，挥干乙醚，上柱，用缓冲液饱和的氯仿洗脱，薄层监测，收集高浓度洗脱液，蒸干即得产品2.7g。

实施例3：

将金钗石斛药材粉碎，取1kg，加入1.5L氨水浸润5个小时，再加入9L75％乙醇超声提取80分钟，提取温度为70℃，过滤，滤渣再加入7L75％乙醇超声提取50分钟，提取温度为50℃，过滤，合并滤液后，加压通过截留分子量7000的中空超滤膜，压力控制0.4Mpa左右，滤液再经纳滤膜浓缩至4L，取4LpH2的硫酸水溶液萃取两次，合并萃取液，用10％NaOH调节至pH9，滤出沉淀物干燥，得石斛碱粗品24.7g；取800g60目硅胶加入550g的pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液(预先用氯仿饱和)，再加入缓冲液饱和的氯仿浸泡，调成稀糊，湿法装柱，将石斛碱粗品用200ml乙醚溶解，与70g硅胶拌匀，挥干乙醚，上柱，用缓冲液饱和的氯仿洗脱，薄层监测，收集高浓度洗脱液，蒸干即得产品3.9g。

实施例4：

将金钗石斛药材粉碎，取1kg，加入2L氨水浸润5个小时，再加入10L85％乙醇超声提取50分钟，提取温度为60℃，过滤，滤渣再加入8L85％乙醇超声提取40分钟，提取温度为60℃，过滤，合并滤液后，加压通过截留分子量9000的中空超滤膜，压力控制0.5Mpa左右，滤液再经纳滤膜浓缩至4L，取4LpH2的盐酸水溶液萃取两次，合并萃取液，用8％KOH调节至pH10，滤出沉淀物干燥，得石斛碱粗品23.1g；取850g60目硅胶加入300g的pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液(预先用氯仿饱和)，再加入缓冲液饱和的氯仿浸泡，调成稀糊，湿法装柱，将石斛碱粗品用180ml乙醚溶解，与90g硅胶拌匀，挥干乙醚，上柱，用缓冲液饱和的氯仿洗脱，薄层监测，收集高浓度洗脱液，蒸干即得产品4.7g。

Claims

1.一种石斛碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

4)分配柱色谱分离：石斛粗品用乙醚溶解，与少量硅胶拌匀后，挥干溶剂，上样，采用分配柱色谱分离，氯仿洗脱，薄层监测，收集洗脱液，蒸干即得产品。

2.如权利要求1所述的一种石斛碱的制备方法，其特征在于所述步骤1)中的氨水用量是物料的1.5～3倍，浸润时间3～5h，高浓度乙醇为70～95％乙醇，提取温度为40～70℃。

3.如权利要求1所述的一种石斛碱的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的超滤膜为截留分子量6000～10000的中空纤维膜，过滤加压控制在0.2～0.7Mpa，纳滤膜为截留分子量100-200的纳滤膜。

4.如权利要求1所述的一种石斛碱的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的酸性水溶液是pH2～3盐酸或者硫酸，碱化时采用10％NaOH或8％KOH，调节至pH9～10。

5.如权利要求1所述的一种石斛碱的制备方法，其特征在于所述步骤4)中的分配柱分离的具体方法是：以60～100目的硅胶为支持剂，用量是上样量的30～50倍，以氯仿饱和的pH4.5缓冲液为固定相，用pH4.5缓冲液饱和的氯仿洗脱，洗脱液流速控制1～1.5BV/h，洗脱剂用量5～12BV。

6.如权利要求书1所述的一种石斛碱的制备方法，其特征在于所述步骤4)中pH4.5的缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。