CN113105465A - 一种石斛生物碱的提纯方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于天然药物提取纯化技术领域，公开了一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：(1)将石斛原料粉碎后，用碱水浸润、密封，加入二氯甲烷或氯仿作为提取溶剂进行超声提取，滤过，旋干，用甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；(2)将所述粗提液滤过，得到上样液；将所述上样液上样至已活化的阳离子交换固相萃取柱内，再依次采用酸和甲醇进行淋洗，最后采用碱性有机溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。所述提纯方法具有反应条件温和，提纯工艺简单，产品收率高和杂质少的突出优点，具备良好的实用价值。

Description

一种石斛生物碱的提纯方法
技术领域
本发明属于天然药物提取纯化技术领域，尤其涉及一种石斛生物碱的提纯方法。
背景技术
石斛是我国的一种名贵中药材，据《神农本草经》中记载，金钗石斛有养胃生津、滋阴清热、润肺止咳和平肝明目等功效。石斛生物碱是石斛药材中的主要活性成分，也是最早被分离提取并进行了结构确认的化合物，具有止痛、解热、抗肿瘤等作用，可降低心率和血压，具有较高的研究开发价值。由此可见，研究石斛生物碱的提取、纯化方法对于石斛这一中药材的开发具有中药意义。
然而，现有工艺中对于石斛生物碱的提取、纯化操作还面临工艺复杂、产品收率低以及杂质较多等缺陷。因此，希望提出一种操作更为简便、且纯化效果更好的石斛生物碱的提纯方法。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种石斛生物碱的提纯方法，具有反应条件温和，提纯工艺简单，产品收率高和杂质少(石斛生物碱纯度≥98％)的突出优点，具备良好的实用价值。
本发明提供了一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎后，用碱水浸润、密封，加入二氯甲烷或氯仿作为提取溶剂进行超声提取，滤过，旋干，用甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将所述粗提液滤过，得到上样液；将所述上样液上样至已活化的阳离子交换固相萃取柱内，再依次采用酸和甲醇进行淋洗，最后采用碱性有机溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。
采用本发明所述的提纯方法可以有效将杂质物质进行分离，纯化步骤简单易操作，提取效率高，最终洗脱出柱的石斛生物碱样品纯净，杂质含量较少。
优选的，步骤(1)中所述石斛原料粉碎后的粒度为20-80目。将石斛原料粉碎至合适的粒度，有助于后续对石斛生物碱的超声提取。
优选的，步骤(1)中所述超声提取的时间为0.5-2h。
优选的，步骤(1)中所述碱水的pH＝11.5-12.5。
优选的，步骤(1)中所述甲酸甲醇的体积浓度为0.2-1.0％。
优选的，步骤(2)中所述上样的速度为0.4-1.0mL/min。控制上样的速度有助于更好的使石斛生物碱离子与阳离子交换固相萃取柱发生交换。
优选的，步骤(2)中依次采用甲醇、纯水对所述阳离子交换固相萃取柱进行活化。
优选的，步骤(2)中所述阳离子交换固相萃取柱选自MCX型或PCX型。
优选的，步骤(2)中所述淋洗所用的酸为0.02-0.2mol/L的盐酸。
优选的，步骤(2)中所述碱性有机溶剂为5-10％氨水-乙醇。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
(1)本发明所述提纯方法步骤简单，方便操作，利于实际应用；
(2)采用本发明所述提纯方法对石斛生物碱进行提纯的效果优异，具有提取效率高、纯化效果好，杂质较少的突出优点(石斛生物碱纯度≥98％)。
附图说明
图1表示实施例1中将上样液上样至已活化的PCX阳离子交换固相萃取柱后流出液的色谱图；
图2表示实施例1中经盐酸淋洗后流出液的色谱图；
图3表示实施例1中经甲醇淋洗后流出液的色谱图；
图4表示实施例1中经氨水-乙醇溶剂洗脱后流出液的色谱图。
具体实施方式
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例仅为本发明的优选实施例，对本发明要求的保护范围不构成限制作用，任何未违背本发明的精神实质和原理下所做出的修改、替代、组合，均包含在本发明的保护范围内。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
实施例1
本实施例提供一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎至50目后，用pH＝12的氨水浸润、密封，加入二氯甲烷作为提取溶剂超声提取1.5h，滤过，旋干，用0.5％甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将步骤(1)中粗提液滤过，得到上样液；将上样液以1mL/min的上样速度上样至已活化(依次采用甲醇、纯水进行活化)的PCX阳离子交换固相萃取柱内，先用1mL的0.1mol/L的盐酸进行淋洗，再用甲醇溶液进行淋洗，最后采用3倍柱体积的5％氨水-乙醇溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。
图1为将上样液上样至已活化的PCX阳离子交换固相萃取柱后流出液的色谱图，从图1可知：上样液中多数物质不符合生物碱的特性，无法与PCX阳离子交换固相萃取柱进行交换，因而随上样液流出。
图2、图3分别为经盐酸、甲醇淋洗后流出液的色谱图，从图2、图3可知：所得流出液中可见多个杂质峰，表明多数干扰物质已随淋洗液被洗脱出柱。
图4为经氨水-乙醇溶剂洗脱后流出液的色谱图，从图4可知：所得的石斛生物碱样品纯净，在主峰石斛碱出峰位置(tR＝7.35min)附近无杂质干扰，以面积归一化法计算，本实施例所得石斛生物碱的纯度为98.2％。
实施例2
本实施例提供一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎至80目后，用pH＝12的氨水浸润、密封，加入二氯甲烷作为提取溶剂超声提取2h，滤过，旋干，用0.5％甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将步骤(1)中粗提液滤过，得到上样液；将上样液以0.8mL/min的上样速度上样至已活化(依次采用甲醇、纯水进行活化)的MCX阳离子交换固相萃取柱内，先用1mL的0.1mol/L的盐酸进行淋洗，再用甲醇溶液进行淋洗，最后采用3倍柱体积的5％氨水-乙醇溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。
实施例3
本实施例提供一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎至30目后，用pH＝11.5的氨水浸润、密封，加入二氯甲烷作为提取溶剂超声提取1.5h，滤过，旋干，用0.5％甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将步骤(1)中粗提液滤过，得到上样液；将上样液以1mL/min的上样速度上样至已活化(依次采用甲醇、纯水进行活化)的MCX阳离子交换固相萃取柱内，先用2mL的0.1mol/L的盐酸进行淋洗，再用甲醇溶液进行淋洗，最后采用3倍柱体积的8％氨水-乙醇溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。
实施例4
本实施例提供一种石斛生物碱的提纯方法，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎至50目后，用pH＝12的氨水浸润、密封，加入二氯甲烷作为提取溶剂超声提取2h，滤过，旋干，用0.8％甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将步骤(1)中粗提液滤过，得到上样液；将上样液以0.6mL/min的上样速度上样至已活化(采用甲醇水溶液进行活化)的MCX阳离子交换固相萃取柱内，先用2mL的0.2mol/L的盐酸进行淋洗，再用甲醇溶液进行淋洗，最后采用5倍柱体积的5％氨水-乙醇溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。

Claims (10)

1.一种石斛生物碱的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将石斛原料粉碎后，用碱水浸润、密封，加入二氯甲烷或氯仿作为提取溶剂进行超声提取，滤过，旋干，用甲酸甲醇进行溶解，得到粗提液；
(2)将所述粗提液滤过，得到上样液；将所述上样液上样至已活化的阳离子交换固相萃取柱内，再依次采用酸和甲醇进行淋洗，最后采用碱性有机溶剂进行洗脱，得到含石斛生物碱的洗脱液。
2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(1)中所述石斛原料粉碎后的粒度为20-80目。
3.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(1)中所述超声提取的时间为0.5-2h。
4.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(1)中所述碱水的pH＝11.5-12.5。
5.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(1)中所述甲酸甲醇的体积浓度为0.2-1.0％。
6.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(2)中所述上样的速度为0.4-1.0mL/min。
7.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(2)中依次采用甲醇、纯水对所述阳离子交换固相萃取柱进行活化。
8.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(2)中所述阳离子交换固相萃取柱选自MCX型或PCX型。
9.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(2)中所述淋洗所用的酸为0.02-0.2mol/L的盐酸。
10.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，步骤(2)中所述碱性有机溶剂为5-10％氨水-乙醇。
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