CN110437151B - 采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，包括原料提取、萃取、氧化铝层析、重结晶四个步骤，利用生物碱易溶于酸性水溶液的特点，采用酸性水溶液对药材进行提取，减少了酯溶性杂质的提取率，有利于进一步的纯化，并且避免了有机试剂的使用，对环境友好；采用酸性水溶液除杂，碱性水溶液富集生物碱的工艺替代传统硅胶柱层析，进一步除掉非生物碱类杂质，且萃取溶剂可以反复回收利用，节约了成本；通过氧化铝柱层析代替其他制备液相等分离手段，减少了生物碱样品的吸附，极大的提高了收率；工艺步骤少，生产周期较短，操作简单，易于放大生产，且实验中使用的酸水和有机试剂均可回收再利用极大的降低了成本。

Description

采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法

技术领域

本发明属于中药药物提取技术领域，具体涉及一种采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法。

背景技术

草乌叶，中药名。其系蒙古族习用药材，为毛茛科植物北乌头的干燥叶。夏季叶茂盛花未开时采收，除去杂质，及时干燥。其味辛、涩，平；有小毒。有清热，解毒，止痛之功效。主要用于热病发热，泄泻腹痛，头痛，牙痛。据查蒙药近300中常用成方之中，应用草乌叶的高达二十多种，最早记载于一千多年前的《无误蒙药鉴》、《晶珠本草》等历代医学著作。收载于2015版《中国药典》及其《内蒙古药材标准》。但无论是《中国药典》，还是《内蒙古药材标准》，关于草乌叶的质量标准都只有性状和理化鉴别其中的生物碱反应，并未涉及对草乌叶中的主要生物碱成分去甲海罂粟碱和海罂粟碱进行分离纯化。

目前对于草乌叶研究较少，仅有少量文献报道其专有成分海罂粟碱和去甲海罂粟碱的制备，且制备量少，分离难度大，成本较高，无法为后续研究提供物质基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，通过酸水提取-萃取-氧化铝层析-重结晶的简单工艺制备得到克级至公斤级的海罂粟碱和去甲海罂粟碱，以解决现有技术中海罂粟碱和去甲海罂粟碱制备量少、分离难度大、成本较高的技术问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，包括如下步骤：

(1)原料提取：将草乌叶药材粉碎，加入酸性水溶液煎煮至少2次，过滤并合并滤液，采用AB-8大孔树脂富集，用醇溶液进行洗脱，收集醇洗液并浓缩得到原料提取液；

(2)萃取：取原料提取液，加水稀释后量取等体积乙酸乙酯萃取至少1次，弃乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8-9，再加入等体积二氯甲烷萃取至少2次，合并二氯甲烷层并浓缩备用；

(3)氧化铝层析：取浓缩后的二氯甲烷粗取液，加入氧化铝均匀拌样、烘干后，将样品加入氧化铝柱层析中，用60℃-90℃的石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集两个目标物流份，分别合并浓缩得到两个固态粗品；

(4)重结晶：将层析得到的两个固态粗品，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶，得到的晶体重复本步骤操作2-3次得呈无色颗粒状结晶的两个目标产物。

本发明目标产物为去甲海罂粟碱和海罂粟碱，其中去甲海罂粟碱的结构为：

海罂粟碱的结构为：

作为优选地，步骤(1)中，煎煮时酸性水溶液的质量浓度为0.5％，酸性水溶液的加入量为草乌叶药材质量的6-8倍。

作为优选地，步骤(1)中，所述酸性水溶液为盐酸或硫酸。

作为优选地，步骤(1)中，所述醇溶液为60％-90％甲醇或乙醇。

作为优选地，步骤(3)中，所述氧化铝柱层析装柱料为100-200目氧化铝。

作为优选地，步骤(3)中，拌样氧化铝与装柱氧化铝比例为1:3或1:5。

作为优选地，步骤(3)中，薄层色谱的薄层展开剂为6.4:3.6:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇，薄层色谱的显色剂为改良碘化铋钾。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、本发明通过酸水提取-萃取-氧化铝层析-重结晶的简单工艺制备得到克级至公斤级的海罂粟碱和去甲海罂粟碱，为草乌叶进一步研究提供大量的物质基础，也为草乌叶的质量控制提供了标准品；

2、本发明利用生物碱易溶于酸性水溶液的特点，采用酸性水溶液对药材进行提取，减少了酯溶性杂质的提取率，有利于进一步的纯化，并且避免了有机试剂的使用，对环境友好。

3、本发明采用酸性水溶液除杂，碱性水溶液富集生物碱的工艺替代传统硅胶柱层析，进一步除掉非生物碱类杂质，且萃取溶剂可以反复回收利用，节约了成本。

4、本发明通过氧化铝柱层析代替其他制备液相等分离手段，减少了生物碱样品的吸附，极大的提高了收率

5、本发明工艺步骤少，生产周期较短，操作简单，易于放大生产，且实验中使用的酸水和有机试剂均可回收再利用极大的降低了成本。

附图说明

图1为草乌叶提取液的HPLC检测图谱；

图2为本发明制得的海罂粟碱HPLC图谱；

图3为本发明制得的去甲海罂粟碱HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合各实施例对本发明作进一步说明，本发明的方式包括但不仅限于以下实施例。

实施例1

本实施例提供一种采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，包括如下步骤：

1)提取：将草乌叶10kg粉碎成1mm-5mm直径粗粉，加入10倍量的0.5％H₂SO4水溶液，煎煮3次，每次2小时，合并提取液，过AB-8大孔树脂，分别用水和60％甲醇洗脱，收集醇洗液，浓缩至10L。

2)萃取：取步骤1)中浓缩后的提取液10L，加2倍水分散，加入等体积乙酸乙酯萃取3次，弃去乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8-9，加入等体积二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷层，浓缩至1.5L。

3)氧化铝柱层析：取二氯甲烷萃取液1.5L，加入1kg氧化铝均匀拌样，烘干。将拌样后的样品加入100-200目氧化铝柱层析中，用石油醚(60℃-90℃)-乙酸乙酯体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集两个目标物流份，分别合并浓缩。本方法中使用的拌样氧化铝与装柱氧化铝比例为1:5，所用薄层展开剂为正己烷：乙酸乙酯：甲醇(6.4:3.6:1)，氨蒸气饱和环境下，喷以改良碘化铋钾显色。

4)取上述步骤中的浓缩后两种固体，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶。晶体重复上述操作2次得两种无色颗粒状结晶，其中晶体1海罂粟碱0.5g，晶体2去甲海罂粟碱1.2g。

实施例2

本实施例提供一种采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，包括如下步骤：

1)提取：将草乌叶100kg粉碎成1mm-5mm直径粗粉，加入6倍量的0.5％HCl水溶液，煎煮4次，每次2小时，合并提取液，过AB-8大孔树脂，分别用水和95％乙醇醇洗脱，收集醇洗液，浓缩至120L。

2)萃取：取步骤1)中浓缩后的提取液120L，加2倍水分散，加入等体积乙酸乙酯萃取3次，弃去乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8-9，加入等体积二氯甲烷萃取4次。合并二氯甲烷层，浓缩至30L。

3)氧化铝柱层析：取二氯甲烷萃取液30L，加入20kg氧化铝均匀拌样，烘干。将拌样后的样品加入100-200目氧化铝柱层析中，用石油醚(60℃-90℃)-乙酸乙酯体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集两个目标物流份，分别合并浓缩。本方法中使用的拌样氧化铝与装柱氧化铝比例为1:3，所用薄层展开剂为正己烷：乙酸乙酯：甲醇(6.4:3.6:1)，氨蒸气饱和环境下，喷以改良碘化铋钾显色。

4)取上述步骤中的浓缩后两种固体，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶。晶体重复上述操作2次得无色颗粒状结晶，其中晶体1海罂粟碱6.5g，晶体2去甲海罂粟碱8.8g。

实施例1和实施例2中制得的去甲海罂粟碱与海罂粟碱产品混合即为草乌叶中指标成分去甲海罂粟碱和海罂粟碱的对照品，可用于草乌叶的质量控制。

采用HPLC检测分析实施例2得到的去甲海罂粟碱与海罂粟碱，分析图谱如图2、图3所示，HPLC液相检测面积归一化法均大于98％，草乌叶提取液的HPLC检测图谱如图1所示。其中HPLC检测条件：乙腈-三乙胺-磷酸缓冲盐(30:70)，λ＝302nm，本实施例所使用的液相检测方法，使用三乙胺磷酸盐(0.05mol/L的三乙胺，加磷酸调节pH至5-6)代替常规磷酸二氢钾或十二烷基磺酸钠等试剂，减小了对色谱柱的损伤，改善了峰型。

上述实施例仅为本发明的优选实施方案之一，不应当用于限制本发明的保护范围，但凡在本发明的主题设计思想和精神上做出毫无意义的改动或润色，其所解决的技术问题仍然与本发明一致的，均应当包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.采用蒙药草乌叶提取去甲海罂粟碱和海罂粟碱的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)原料提取：将草乌叶药材粉碎，加入酸性水溶液煎煮至少2次，过滤并合并滤液，采用AB-8大孔树脂富集，用醇溶液进行洗脱，收集醇洗液并浓缩得到原料提取液；

(2)萃取：取原料提取液，加水稀释后量取等体积乙酸乙酯萃取至少1次，弃乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8-9，再加入等体积二氯甲烷萃取至少2次，合并二氯甲烷层并浓缩备用；

(3)氧化铝层析：取浓缩后的二氯甲烷粗取液，加入氧化铝均匀拌样、烘干后，将样品加入氧化铝柱层析中，用60℃-90℃的石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集两个目标物流份，分别合并浓缩得到两个固态粗品；

(4)重结晶：将层析得到的两个固态粗品，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶，得到的晶体重复本步骤操作2-3次得呈无色颗粒状结晶的两个目标产物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，煎煮时酸性水溶液的质量浓度为0.5％，酸性水溶液的加入量为草乌叶药材质量的6-8倍。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酸性水溶液为盐酸或硫酸。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醇溶液为60％-90％甲醇或乙醇。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述氧化铝柱层析装柱料为100-200目氧化铝。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，拌样氧化铝与装柱氧化铝比例为1:3或1:5。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，薄层色谱的薄层展开剂为6.4:3.6:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇，薄层色谱的显色剂为改良碘化铋钾。

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