CN101531659B - 一种夏蜡梅碱对照品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种夏蜡梅碱对照品的制备方法，步骤为：取山蜡梅药材粉碎成粗粉，用乙醇回流提取，回收溶剂，得流浸膏，加酸溶解，过滤，酸水液加碱碱化，再用氯仿萃取，回收溶剂得淡黄色浸膏，硅胶柱层析，sephadex LH-20凝胶柱层析，反复重结晶，即得夏蜡梅碱对照品。与现有技术相比，本发明工艺简单、成本低廉、适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种夏蜡梅碱对照品的制备方法，属于药材中指标成分的提取技术领域。
背景技术
山蜡梅药材为蜡梅科Calycanthaceae植物Chimonanthus nitens.Oliv的叶。又名香风茶(安徽)，毛山茶、秋蜡梅(江西)，铁筷子(贵州)，性凉、味辛微苦。具有解表祛风、清热解毒之功效，对于防治感冒、流行性感冒有良好的疗效。山蜡梅所含生物碱类成分为有效成分之一，《中国药典》(1977年版)就有记载，《江西省药品标准》1982年记载了山蜡梅制剂“山蜡梅片”和“山蜡梅冲剂”，临床上应用于防治感冒和流行性感冒。目前江西天佑药业有限公司生产的“山蜡梅颗粒”应用在临床上，也是用于防治感冒。山蜡梅制剂的药效明确，但有关山蜡梅的质量标准中定性、定量指标性成分的研究未见有报道，因此寻找山蜡梅叶中的对照品及其制备方法对该药材资源的开发及其制剂的质量控制具有重要的意义。
目前在国内尚未有可提供夏蜡梅碱对照品的单位和机构，也未见有关夏蜡梅碱对照品的制备方法的相关报道。于是，申请人在山蜡梅药材化学成分的研究中对夏蜡梅碱对照品的制备方法进行了相关研究。
发明内容
本发明目的在于：提供一种夏蜡梅碱对照品的制备方法。本发明是这样实现的：
(1)山蜡梅药材粉碎成粗粉，加3～20倍量20～95％的乙醇或甲醇回流提取1～6次，每次0.5～5小时，合并各次提取液，回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述流浸膏中加入1％～5％酸溶液溶解，过滤，得酸水液；
(3)将上述的酸水液加入碱，调节pH 3～14；
(4)将上述pH 3～14的溶液，加入氯仿萃取，所用的氯仿量∶水溶液量＝1∶1～8的体积比例进行萃取1～10次，将各次萃取液合并，回收溶剂，得淡黄色浸膏；
(5)将上述淡黄色浸膏用甲醇或乙醇溶解，层析硅胶拌样，柱层析，用氯仿-甲醇组成的流动相梯度洗脱，氯仿与甲醇的比例依次为100∶1、100∶2、100∶5、100∶10、100∶20、100∶100，柱层析的次数1～10次，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱的流份合并，回收溶剂得到夏蜡梅碱粗品；
(6)将上述夏蜡梅碱粗品用填料为sephadex LH-20的凝胶层析，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱为单一点的柱层析流份合并，回收溶剂后，即得夏蜡梅碱粗品，柱层析的洗脱溶剂为氯仿-甲醇，比例为1∶1；
(7)将上述夏蜡梅碱粗品用氯仿-甲醇重结晶1～10次，即得到夏蜡梅碱精品，置于干燥器24小时以上，即得到纯度≥98％的夏蜡梅碱对照品，其中甲醇-氯仿的比例为1∶1～10。
所用的原料为蜡梅科蜡梅属(Chimonanthus)、夏蜡梅属(Sinocalycanthus)植物中的任何一个种。
硅胶薄层层析TLC的展开系统为氯仿∶甲醇＝6∶1～10。
硅胶薄层层析TLC检查时所用的显色剂为硅钨酸试剂。
柱层析所用的硅胶为100～400目。
本发明有如下显著优点：本发明的制备方法对该药材资源的开发及其制剂的质量控制具有重要的意义；与现有技术相比，本发明工艺简单、成本低廉、适于工业化生产。
具体实施方式：
下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。
实施例1：
(1)将山蜡梅药材粉碎成粗粉，加6倍量80％的乙醇回流提取4次，每次1小时，合并各次提取液，回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述流浸膏中加入3％HCl溶液溶解，过滤，得酸水液；
(3)将上述的酸水液加入氨水，调节至pH＝8；
(4)将上述pH＝8的溶液，加入相当于溶液体积的1/3的氯仿萃取，萃取5次，将各次萃取液合并，回收溶剂，得淡黄色浸膏；
(5)将上述淡黄色浸膏用甲醇溶解，层析硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，依次用氯仿-甲醇比例为100∶1、100∶2、100∶5、100∶10、100∶20、100∶100的溶剂洗脱，柱层析1次，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱的流份合并，回收溶剂得到夏蜡梅碱粗品；
(6)将上述夏蜡梅碱粗品用填料为sephadex LH-20的凝胶层析，洗脱剂为氯仿-甲醇(1∶1)，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱为单一点的柱层析流份合并，回收溶剂后，即得夏蜡梅碱粗品；
(7)将上述夏蜡梅碱粗品用氯仿-甲醇重结晶3次，其中甲醇-氯仿的比例为1∶1，即得到夏蜡梅碱精品，置于干燥器24小时以上，用高效液相色谱仪测定，即得到纯度为99％的夏蜡梅碱对照品。
实施例2：
(1)将山蜡梅药材粉碎成粗粉，加8倍量90％的乙醇回流提取3次，每次1小时，合并各次提取液，回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述流浸膏中加入2％HCl溶液溶解，过滤，得酸水液；
(3)将上述的酸水液加入Na2CO3，调节至pH＝9；
(4)将上述pH＝9的溶液，加入相当于溶液体积的1/3的氯仿萃取，萃取3次，将各次萃取液合并，回收溶剂，得淡黄色浸膏；
(5)将上述淡黄色浸膏用甲醇溶解，层析硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，依次用氯仿-甲醇比例为100∶1、100∶2、100∶5、100∶10、100∶20、100∶100的溶剂洗脱，柱层析2次，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱的流份合并，回收溶剂得到夏蜡梅碱粗品；
(6)将上述夏蜡梅碱粗品用填料为sephadex LH-20的凝胶层析，洗脱剂为氯仿-甲醇(1∶1)，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱为单一点的柱层析流份合并，回收溶剂后，即得夏蜡梅碱粗品；
(7)将上述夏蜡梅碱粗品用氯仿-甲醇重结晶5次，其中甲醇-氯仿的比例为1∶2，即得到夏蜡梅碱精品，置于干燥器24小时以上，用高效液相色谱仪测定，即得到纯度为99％的夏蜡梅碱对照品。
实施例3：
(1)将山蜡梅药材粉碎成粗粉，加15倍量95％的乙醇回流提取2次，每次2小时，合并各次提取液，回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述流浸膏中加入2％HCl溶液溶解，过滤，得酸水液；
(3)将上述的酸水液加入氨水，调节至pH＝10；
(4)将上述pH＝10的溶液，加入相当于溶液体积的1/5的氯仿萃取，萃取5次，将各次萃取液合并，回收溶剂，得淡黄色浸膏；
(5)将上述淡黄色浸膏用甲醇溶解，层析硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，依次用氯仿-甲醇比例为100∶1、100∶2、100∶5、100∶10、100∶20、100∶100的溶剂洗脱，柱层析2次，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱的流份合并，回收溶剂得到夏蜡梅碱粗品；
(6)将上述夏蜡梅碱粗品用填料为sephadex LH-20的凝胶层析，洗脱剂为氯仿-甲醇(1∶1)，经硅胶薄层层析TLC检测，将具有夏蜡梅碱为单一点的柱层析流份合并，回收溶剂后，即得夏蜡梅碱粗品；
(7)将上述夏蜡梅碱粗品用氯仿-甲醇重结晶5次，其中甲醇-氯仿的比例为1∶2，即得到夏蜡梅碱精品，置于干燥器24小时以上，用高效液相色谱仪测定，即得到纯度为99％的夏蜡梅碱对照品。
Claims (4)
1.一种夏蜡梅碱对照品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)山蜡梅药材粉碎成粗粉，加3～20倍量20～95％的乙醇或甲醇回流提取1～6次，每次0.5～5小时，合并各次提取液，回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述流浸膏中加入1％～5％酸溶液溶解，过滤，得酸水液；
(3)将上述的酸水液加入碱，调节pH 8～14；
(4)将上述pH 8～14的溶液，加入氯仿萃取，所用的氯仿量∶水溶液量＝1∶1～8的体积比例进行萃取1～10次，将各次萃取液合并，回收溶剂，得淡黄色浸膏；
(5)将上述淡黄色浸膏用甲醇或乙醇溶解，层析硅胶拌样，柱层析，用氯仿-甲醇组成的流动相梯度洗脱，氯仿与甲醇的比例依次为100∶1、100∶2、100∶5、100∶10、100∶20、100∶100，柱层析的次数1～10次，经硅胶薄层层析检测，将具有夏蜡梅碱的流份合并，回收溶剂得到夏蜡梅碱粗品；
(6)将上述夏蜡梅碱粗品用填料为sephadex LH-20的凝胶层析，经硅胶薄层层析检测，将具有夏蜡梅碱为单一点的柱层析流份合并，回收溶剂后，即得夏蜡梅碱粗品，柱层析的洗脱溶剂为氯仿-甲醇，比例为1∶1；
(7)将上述夏蜡梅碱粗品用氯仿-甲醇重结晶1～10次，即得到夏蜡梅碱精品，置于干燥器24小时以上，即得到纯度≥98％的夏蜡梅碱对照品，其中甲醇-氯仿的比例为1∶1～10。
2.根据权利要求1所述夏蜡梅碱对照品的制备方法，其特征在于：硅胶薄层层析的展开系统为氯仿∶甲醇＝6∶1～10。
3.根据权利要求1所述夏蜡梅碱对照品的制备方法，其特征在于：硅胶薄层层析检查时所用的显色剂为硅钨酸试剂。
4.根据权利要求1所述夏蜡梅碱对照品的制备方法，其特征在于：柱层析所用的硅胶为100～400目。
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Legal Events
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: JIANGXI YOUMEI PHARMACEUTICAL CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: BENCAO TIAN'GONG SCIENCE + TECH. CO., LTD., JIANGXI Effective date: 20140512 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 330006 NANCHANG, JIANGXI PROVINCE TO: 330013 NANCHANG, JIANGXI PROVINCE |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140512 Address after: 330013 No. 701 Ju Lin Road, Nanchang economic and Technological Development Zone, Jiangxi, China Patentee after: JIANGXI YOUMEI PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Address before: 330006 No. 56 Yangming Road, Jiangxi, Nanchang Patentee before: JIANGXI HERBFINE HI-TECH Co.,Ltd. |
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| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 333,200 Caishi Avenue, Ecological Industrial Park, Wuyuan County, Shangrao City, Jiangxi Province Patentee after: JIANGXI YOUMEI PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Address before: No. 701 Jupu Road, Economic and Technological Development Zone, Nanchang City, Jiangxi Province, 330013 Patentee before: JIANGXI YOUMEI PHARMACEUTICAL CO.,LTD. |
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