CN102503996A - 一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,该方法包括以下步骤:(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用乙醇溶液回流提取,经过滤,合并提取液并回收溶剂;(2)将所述提取液稀释得到混浊液,该混浊液静置后,过滤,得到澄清溶液;(3)将非极性大孔吸附树脂用乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将所述湿树脂转入层析柱中形成树脂柱;(4)将所述步骤(2)所得的澄清溶液流过所述步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附1~4h;(5)将所述步骤(4)所得的树脂柱依次用水、乙醇溶液洗脱,收集洗脱液;(6)将所述洗脱液经浓缩、干燥后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。本发明工艺简单、重复性良好,适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种中草药有效成分的提取方法,尤其涉及一种从川西獐芽菜植物中提取高纯度利胆、抗炎有效成分(龙胆苦苷、獐芽菜苦苷)的方法。
背景技术
川西獐芽菜(Swertia mussotii Franch)属龙胆科獐芽菜属植物,是藏医药治疗肝胆系统疾病的常用药材,泛称“藏茵陈”的一种。研究资料表明,川西獐芽菜中主要化学成分为含三萜类(如齐墩果酸)、酮类、芒果苷、龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、当要素等成分【<中华本草>藏药卷(M)2002,68-69】。龙胆苦苷、獐芽菜苦苷具有促进胃液分泌、抗菌、利胆及抗炎等作用【梁向艳、田琼等,中成药,2006,28(4):548-552】;同时对各种原因导致的肝损伤、胆囊炎、胆管阻塞具有良好的治疗作用。
目前,提取龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的方法主要有微波提取,回流提取,超声提取,冷浸提取等方法,提取溶剂有甲醇以及乙醇水等。微波提取、超声提取法及溶剂甲醇多使用于有效成分含量分析方面【张兴旺,陶燕铎等,中国野生植物资源,2010,29(2):38-40;孙菁,陈桂琛等,分析试验室,2006,25(5):28-30】,不适合大生产。在分离纯化方面,多使用乙醇水系统提取【才谦,刘涛等,中成药,2003,25(4):271-272;王良贵,时珍国医国药,2007,18(11):2723-2724】,大孔树脂法分离。综合考虑生产实际,本发明采用回流提取、大孔树脂分离、乙醇水作为提取和洗脱溶剂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、安全性良好的从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法。
为解决上述问题,本发明所述的一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用质量浓度为50~80%的乙醇溶液按1∶5~1∶20的固液质量比在60~85℃下回流提取2~4次,每次1~4小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂;
(2)将所述提取液稀释至质量浓度为10~30%,得到混浊液,该混浊液静置6~48小时后,过滤,得到澄清溶液;
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为85~95%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将所述100g~50kg湿树脂转入内径为1.0~32.5cm的层析柱中形成树脂柱;所述大孔吸附树脂与所述乙醇的质量体积比为1∶5~1∶15;
(4)将所述步骤(2)所得的澄清溶液以0.5~1.0BV/h的流速流过所述步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附1~4h;
(5)将所述步骤(4)所得的树脂柱依次用水、质量浓度为10~75%的乙醇溶液洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液经浓缩、干燥后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
所述步骤(1)中的干燥川西獐芽菜植物粉末是指长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段,或将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm的粉末。
所述步骤(2)中混浊液静置是指采用室温条件下静置或采用1~4℃冷藏静置。
所述步骤(5)中乙醇溶液洗脱的流速为0.5~1.0BV/h。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明以川西獐芽菜植物全草为原料,以亲水性溶剂——乙醇溶液回流提取,并利用对水溶性成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集,从而得到含量大于70%的有效成分——龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
2、由于本发明所用溶剂为亲水性溶剂,因此,具有良好的安全性。
3、由于本发明采用回流提取、大孔树脂分离、乙醇水作为提取和洗脱溶剂,因此,工艺简单、重复性良好,适于工业化生产。
4、本发明设备投资小、操作方便,且成本低廉。
具体实施方式
实施例1一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用质量浓度为50%的乙醇溶液按1∶5的固液质量比(kg/kg)在60℃下采用TN-100提取回流浓缩机组(浙江华联制药机械股份有限公司)回流提取2次,每次1小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为10%,得到混浊液,该混浊液在室温条件下静置6小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为95%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将100g湿树脂转入内径为1.0cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶15(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.5BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附1h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为10%的乙醇溶液以0.5BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪(上海慧析精密仪器有限公司)浓缩后,在85℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为73.89%和2.14%。
实施例2一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用质量浓度为80%的乙醇溶液按1∶20的固液质量比(kg/kg)在85℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次,每次4小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为30%,得到混浊液,该混浊液在室温条件下静置48小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为90%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将10kg湿树脂转入内径为10cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶8(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以1.0BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附4h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为20%的乙醇溶液以1.0BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为74.95%和2.31%。
实施例3一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用质量浓度为60%的乙醇溶液按1∶10的固液质量比(kg/kg)在75℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取3次,每次2小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为15%,得到混浊液,该混浊液在室温条件下静置12小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为92%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将20kg湿树脂转入内径为10cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶5(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.8BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附2h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为30%的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为79.76%和2.39%。
实施例4一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为70%的乙醇溶液按1∶15的固液质量比(kg/kg)在80℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取2次,每次3小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为22%,得到混浊液,该混浊液在4℃冷藏静置24小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为91%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将5kg湿树脂转入内径为5cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶9(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.6BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附3h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为40%的乙醇溶液以0.6BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为78.62%和2.35%。
实施例5一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为50%的乙醇溶液按1∶12的固液质量比(kg/kg)在65℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次,每次1小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为28%,得到混浊液,该混浊液在4℃冷藏静置36小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为94%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将35kg湿树脂转入内径为18cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶14(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.9BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附4h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为50%的乙醇溶液以0.9BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为78.23%和2.30%%。
实施例6一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为75%的乙醇溶液按1∶18的固液质量比(kg/kg)在70℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取3次,每次3小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为26%,得到混浊液,该混浊液在3℃冷藏静置30小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为88%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将15kg湿树脂转入内径为10cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶9(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.7BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附4h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为60%的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为76.91%和2.14%。
实施例7一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用质量浓度为83%的乙醇溶液按1∶8的固液质量比(kg/kg)在72℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次,每次1小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为20%,得到混浊液,该混浊液在1℃冷藏静置20小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为85%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将12kg湿树脂转入内径为10cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶13(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.5BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附1h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为70%的乙醇溶液以0.5BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为74.26%和2.37%。
实施例8一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用质量浓度为65%的乙醇溶液按1∶10的固液质量比(kg/kg)在80℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取2次,每次4小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂。
(2)将提取液稀释至质量浓度为18%,得到混浊液,该混浊液在2℃冷藏静置40小时后,过滤,得到澄清溶液。
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为89%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将50kg湿树脂转入内径为32.5cm的层析柱中形成树脂柱;大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶7(g/ml)。
(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以1.0BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附4h。
(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱,然后用质量浓度为75%的乙醇溶液以1.0BV/h的流速洗脱,收集洗脱液。
(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后,在60℃温度下干燥至恒重后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定,含量分别为75.98%和2.32%。
Claims (4)
1.一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用质量浓度为50~80%的乙醇溶液按1∶5~1∶20的固液质量比在60~85℃下回流提取2~4次,每次1~4小时,经过滤后,合并提取液并回收溶剂;
(2)将所述提取液稀释至质量浓度为10~30%,得到混浊液,该混浊液静置6~48小时后,过滤,得到澄清溶液;
(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为85~95%的乙醇溶液溶胀后经水洗脱,使其逐渐过渡至水相,得到湿树脂;将所述100g~50kg湿树脂转入内径为1.0~32.5cm的层析柱中形成树脂柱;所述大孔吸附树脂与所述乙醇的质量体积比为1∶5~1∶15;
(4)将所述步骤(2)所得的澄清溶液以0.5~1.0BV/h的流速流过所述步骤(3)所得的树脂柱,并保留吸附1~4h;
(5)将所述步骤(4)所得的树脂柱依次用水、质量浓度为10~75%的乙醇溶液洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液经浓缩、干燥后,即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。
2.如权利要求1所述的一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的干燥川西獐芽菜植物粉末是指长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段,或将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm的粉末。
3.如权利要求1所述的一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,其特征在于:所述步骤(2)中混浊液静置是指采用室温条件下静置或采用1~4℃冷藏静置。
4.如权利要求1所述的一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法,其特征在于:所述步骤(5)中乙醇溶液洗脱的流速为0.5~1.0BV/h。
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