CN103739648A - 一种玉叶金花苷u的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种玉叶金花苷U的制备方法，该方法包括如下操作步骤：⑴将玉叶金花粗粉加入到乙醇溶液中加热回流提取，回收乙醇得粗提物；⑵上述粗提物加入蒸馏水混溶，再加入水饱和正丁醇萃取多次，浓缩后得浸膏状物质；⑶上述浸膏加入蒸馏水溶解过滤，滤液经大孔树脂柱层析初步纯化，再经HPLC制备色谱分离得到高纯度mussaendoside U。本发明方法工艺简单合理，操作方便，收率高，纯度高，可以做成标准品。
Description
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，尤其是涉及一种mussaendoside U的制备方法。
背景技术
mussaendoside U为四环三萜皂苷，分子式C72H115NO32，分子量1505，分子结构为：
mussaendoside U为茜草科植物玉叶金花的主要成分。玉叶金花具有清热解暑，凉血解毒的功效。玉叶金花富含萜类及三萜皂苷类成分。目前，玉叶金花在中成药方面已得到广泛的应用，我国治疗甲流首个中成药-金花清感方中含有玉叶金花；同时在玉叶解毒颗粒、玉叶清火片中玉叶金花均作为君药使用。
现有分离mussaendoside U的方法一般采用反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析，所得产品纯度低于90%，收率较低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种mussaendoside U的制备方法，采用HPLC制备色谱，操作简单，所得产品纯度较高，产率比一般色谱柱分离纯化方法的产率有所提高。
本发明以如下技术方案解决上述技术问题：
本发明一种mussaendoside U的制备方法，包括以下步骤：
（1）将玉叶金花粗粉加入到乙醇溶液中，加热回流提取至少3次，将提取液真空浓缩得粗提物，并回收溶剂，玉叶金花粗粉与乙醇溶液的重量比为1：6～10，乙醇溶液的浓度为60～95%；
（2）将所得粗提物加水混溶后，再加入等量水饱和正丁醇萃取至少3次，收集有机层并真空浓缩，得浸膏状物质；
（3）将上述浸膏状物质加水溶解，过滤，滤液过大孔树脂柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干，即得总皂苷粗品；
（4）将皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离，紫外检测器在线监测，收集mussaendoside Q，浓缩蒸干，即得成品。
所述步骤（3）中，大孔树脂柱选用DA201大孔树脂柱或D101大孔树脂柱。
所述步骤（4）中，HPLC制备色谱的条件为：洗脱液是体积比为25:75～40:60的乙腈：水或乙腈：0.01%磷酸溶液的混合液；体积流量：10～20ml/min； 检测波长：265nm；柱温：25℃。
所述步骤（4）中，收集mussaendoside Q的时间段为18～56.5min。
本发明的优点在于：工艺简单合理，操作方便，所得产品纯度高。
具体实施方式
下面将结合具体实施例进一步说明本发明方法，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
实施例1
将原料粉为5kg玉叶金花粗粉与原料粉重量8倍的体积浓度为60%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上D101大孔树脂层析柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%-95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为15%，，即总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：水（35:65）；体积流量：20ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于45.449min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末210mg，纯度为95%，产率为0.042mg/g。
实施例2
将原料粉为5kg玉叶金花粗粉与原料粉重量10倍的体积浓度为95%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上D101大孔树脂层 析柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为14%，即总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：水（35:65）；体积流量：20ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于45.767min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末185mg，纯度为96%，产率为0.037mg/g。
实施例3
将原料粉5kg玉叶金花粗粉与原料粉重量8倍的95%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上DA201大孔树脂层析柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为13%，即得总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：0.01%磷酸溶液（30:70）；体积流量：10ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于56.265min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末160mg，纯度为95%，产率为0.032mg/g。
实施例4
将原料粉5kg玉叶金花粗粉加入与原料粉重量6倍的85%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上DA201大孔树脂层析柱， 依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为15%，即总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：0.01%磷酸溶液（32:68）；体积流量：15ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于49.312min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末155mg，纯度为96%，产率为0.031mg/g。
实施例5
将原料药5kg玉叶金花粗粉与原料粉重量8倍的75%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上DA201大孔树脂层析柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为14%，即总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：0.01%磷酸溶液（40:60）；体积流量：10ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于18.305min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末165mg，纯度为94%，产率为0.033mg/g。
实施例6
将原料粉5kg玉叶金花粗粉与原料粉重量8倍的95%乙醇混合，加热回流提取3次，每次2h，将提取液真空浓缩回收溶剂得粗提物浸膏。将所得浸膏加水混溶后再加入等量水饱和正丁醇萃取3次，将有机层合并后真空浓缩，浓缩得浸膏状物质，加水溶解过滤，滤液上D101大孔树脂层析柱，依次采用 蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干至含水率为15%，即总皂苷粗品；将总皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离（HPLC制备色谱的条件为：流动相为乙腈：水（38:62）；体积流量：10ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃），紫外检测器在线监测，于20.299min收集mussaendoside U，浓缩蒸干得粉末175mg，纯度为96%，产率为0.035mg/g。
Claims (4)
1.一种mussaendoside U的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将玉叶金花粗粉加入到乙醇溶液中，加热回流提取至少3次，将提取液真空浓缩得粗提物，并回收溶剂，玉叶金花粗粉与乙醇溶液的重量比为1：6～10，乙醇溶液的浓度为60～95%；
（2）将所得粗提物加水混溶后，再加入等量水饱和正丁醇萃取至少3次，收集有机层并真空浓缩，得浸膏状物质；
（3）将上述浸膏状物质加水溶解，过滤，滤液过大孔树脂柱，依次采用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和95%乙醇溶液洗脱，收集60%～95%乙醇洗脱液，回收乙醇，蒸干，即得总皂苷粗品；
（4）将皂苷粗品溶于甲醇中，采用HPLC制备色谱分离，紫外检测器在线监测，收集mussaendoside Q，浓缩蒸干，即得成品。
2.根据权利要求1所述的mussaendoside U的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，大孔树脂柱选用DA201大孔树脂柱或D101大孔树脂柱。
3.根据权利要求1所述的mussaendoside U的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，HPLC制备色谱的条件为：洗脱液是体积比为25:75～40:60的乙腈：水或乙腈：0.01%磷酸溶液的混合液；体积流量：10～20ml/min；检测波长：265nm；柱温：25℃。
4.根据权利要求1所述的mussaendoside U的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述收集mussaendoside U的时间段为18～56.5min。
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