CN101298449A

CN101298449A - 杨梅素的制备新方法

Info

Publication number: CN101298449A
Application number: CNA2008100508935A
Authority: CN
Inventors: 赫玉芳; 南敏伦; 赵全成; 刘静月
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2008-06-27
Filing date: 2008-06-27
Publication date: 2008-11-05

Abstract

本发明公开了一种从葡萄科蛇葡萄属Ampelopsis Michx植物蛇葡萄茎叶(Ampelopsis sinica(Miq.)W.T.Wang)或其它葡萄科蛇葡萄属植物中产业化制备杨梅素(myricetin)的新方法。这种制备新方法是利用碱性溶液调节水溶液或含水乙醇、甲醇溶液成碱性，提取药材中的总黄酮，提取液浓缩，用稀酸调pH为2－8，析晶，得粗提物。粗提物用乙醇、甲醇、丙酮加热提取，提取液用活性炭脱色，析晶后可得杨梅素。本方法具有工艺简单、成本低，无污染，先进、安全、适用的特点。

Description

杨梅素的制备新方法

技术领域

本发明是提供一种从葡萄科蛇葡萄属Ampelopsis Michx植物蛇葡萄(Ampelopsis sinica(Miq.)W.T.Wang)茎叶或其它葡萄科蛇葡萄属植物中提取制备药物原料杨梅素的新方法，属于中药、天然药物技术领域。

背景技术

蛇葡萄为葡萄科蛇葡萄属植物的茎叶。别名叫酸藤、山葡萄、爬山虎、野葡萄、烟火藤、山天萝、过山龙、母苦藤、酸古藤、禾黄藤、禾稼子藤、绿葡萄、假葡萄、水葡萄等。在恩施地区尤其是来凤大河镇盛产野生蛇葡萄。据《中草药汇编》、《广西药用植物名录》、《广东药用植物手册》、《上海常用中草药》等记载，该药性味甘淡、功效清热解毒，主治黄疸型肝炎、感冒风热、咽喉肿痛等。民间认为，大凡失音、中暑、口舌生疮、风火牙痛、便秘等症，泡开水饮用，有明显疗效；对马牙疳、脚丫湿疹等外敷也有一定疗效。目前从蛇葡萄中提取杨梅素的报道很少，现在利用的杨梅素大多都从杨梅中获得，用80％丙酮浸提，浸提液减压回收丙酮后过滤，滤液用石油醚萃取，水层以大孔吸附树脂柱层析处理，水冲洗后用甲醇洗脱，回收后得褐黑色浸膏。将甲醇洗脱物溶于水中，用Sephadex HL-20柱层析分离，含水甲醇梯度洗脱。所用的提取溶剂多数属于易燃、易爆危险品，且生产周期较长，成本也较高，对环境也造成污染，不适合大批量生产。本发明的特点在于提取过程使用了价格便宜的碱性溶液，促进二氢杨梅素向杨梅素的转化，提高了产率，生产工艺简单、生产周期短，安全、不污染环境，成本低，收率高，纯度高达95％以上，特别适合产业化大量生产。也为我们寻找新的药用植物资源奠定了基础。

杨梅素(myricetin)的结构

发明内容

本发明的目的之一是解决了天然界植物中杨梅素的含量少，提取分离困难，提供了一种从蛇葡萄及同属植物中提取高纯度杨梅素的方法。

本发明的目的之二是提供了一种不使用大孔树脂，是合理的使用了碱性溶液促进二氢杨梅素向杨梅素结构转化，从而制备杨梅素的方法，减少了对环境的严重污染问题，并且具有操作简单、周期短、纯度高的特点，杨梅素的含量可达95％，如果反复重结晶含量可高达99％。

本发明的目的之三是提供了一种由二氢杨梅素转化杨梅素的制备新方法并适合产业化生产。本发明的积极有益贡献是制备的杨梅素具有较强的抑制黄嘌呤氧化酶的作用(本发明人已申请专利，申请号：200810050747.2)，未经转化的二氢杨梅素不具有这种活性的，根据黄嘌呤氧化酶抑制剂的构效关系：黄烷酮、二氢黄酮和黄烷醇由于缺少C2-C3之间的双键而不具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性(中草药来源的黄嘌呤氧化酶抑制剂的研究进展，中药材，2006，29(12)，1386-1389)，并且杨梅素具有很强的抗氧化活性，明显提高SOD的活性，降低MDA的含量，提高脑系数。开拓了医药新用途，并为蛇葡萄属的进一步开发奠定了基础。

本发明是通过以下方法实施的：将蛇葡萄或其它葡萄科蛇葡萄属植物原料药材用水溶液或含水的乙醇、甲醇溶液(碱性溶液调解PH7.5-14)提取一次或多次，趁热过滤，合并提取液，浓缩，用稀酸调PH为2-8，析晶，得粗提物；粗提物用乙醇、甲醇或丙酮提取一次或多次，过滤，合并滤液，用0.5-2％(W/V)的活性炭脱色，回收溶剂，析晶，得杨梅素晶体。

本文所指蛇葡萄为葡萄科蛇葡萄属植物，其嫩叶经过杀青、揉捻、烘干而成。提取溶剂为水或乙醇、甲醇的水溶液；所述加入的碱性溶液的目的为了促进结构转化，优化杨梅素的提取效果、减少杂质、提高纯度，其加入的方法可以是直接加入也可以是水溶液加入，使PH值为7.5-14之间。提取一次或多次，合并提取液，浓缩，用盐酸、硫酸或磷酸调PH值为2-8之间，析晶，用甲醇、乙醇或丙酮加热溶解，过滤，合并滤液，用0.5-2％(W/V)的活性炭脱色，回收溶剂，放置，析晶，得杨梅素晶体。

杨梅素粗提物提取时溶剂浓度为10％-95％；可以是乙醇也可以是甲醇或丙酮。

本发明的有益效果在于：在制备过程中以水、乙醇、甲醇或丙酮为溶剂，加入的碱性溶液、用的盐酸或硫酸均为医用试剂，成本低，污染小，提取工艺简单，生产周期短，收率高达5％以上，杨梅素的纯度可达95％以上。

本发明的上述方法可以用于产业化大量制备单体杨梅素。通过高效液相色谱和液-质联用进行分析，验证本发明方法制备的结晶物就是杨梅素。

1、高效液相(HPLC)分析

仪器：美国Agillent1100型高效液相色谱仪(配四元泵、二级管阵列检测器、自动进样器、柱温箱、软件为Agillent1100型多种数自动处理系统)。

条件：色谱柱为Zorbax C₁₈反相硅胶柱(4.6mmX150mm)，进样量为10ul，流动相为甲醇∶0.05％磷酸水＝47∶53，流速为1.0ml/min，检测波长为372nm。

保留时间为7.65min，为对称峰。

2、液-质联用(LC/MSD)分析

仪器：美国Agillent液-质联用仪(配四元泵、补偿单元泵、二级管阵列检测器、自动进样器、柱温箱、软件为Agillent1100型多种数据处理系统)。

条件：色谱柱为ZOBAX EXTEND C₁₈柱，流动相为甲醇∶0.05％磷酸水＝47∶53。流速为0.9ml/min，柱后补偿促离子化试剂氨水溶液(0.1ml/min)，质谱条件为负离子模式(NEG)电喷雾(API-ESI)扫描。

经液-质联用和高效液相分析，并结合文献资料证明本发明提取的化合物是杨梅素。

在本发明完成以前没有关于该工艺的报道。

具体实施方式

实施例1

蛇葡萄1kg，加15000ml水，加入碳酸钾或碳酸氢钾调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热煎煮1.5h，过滤，滤渣加10000ml水，煎煮1h，过滤，滤渣再加水10000ml，煎煮1h，过滤，合并三次滤液，浓缩至2000ml，用稀盐酸调PH为6.5，放置过夜，离心，残渣加95％乙醇5000ml加热溶解，加入25g活性炭搅拌，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水至1000ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得黄绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于95.0％。

实施例2

蛇葡萄1kg，加15000ml水，加入磷酸钾或磷酸氢二钾或磷酸钠或磷酸氢二钠调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热煎煮2h，过滤，滤渣加10000ml水，煎煮1h，过滤，滤渣再加水10000ml，煎煮1h，过滤，合并三次滤液，浓缩至2000ml，用稀盐酸调PH为4.5，放置过夜，离心，残渣加95％乙醇5000ml加热溶解，加入25g活性炭搅拌，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水至1000ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得黄绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于96.0％。

实施例3

蛇葡萄1kg，加15000ml水，加入氨水或碳酸铵或碳酸氢铵调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热煎煮1h，过滤，滤渣加10000ml水，煎煮1h，过滤，滤渣再加水10000ml，煎煮1h，过滤，合并三次滤液，浓缩至2000ml，用稀盐酸调PH为5.5，放置过夜，离心，残渣加95％乙醇5000ml加热溶解，加入25g活性炭搅拌，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水至1000ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得黄绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于96.0％。

实施例4

蛇葡萄1kg，加15000ml水，加入氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化镁调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热煎煮1h，过滤，滤渣加10000ml水，煎煮1h，过滤，滤渣再加水10000ml，煎煮1h，过滤，合并三次滤液，浓缩至2000ml，用稀盐酸调PH为5.5，放置过夜，离心，残渣加95％乙醇5000ml加热溶解，加入25g活性炭搅拌，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水至1000ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得黄绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于95.0％。

实施例5

蛇葡萄100g，加甲醇(或95％乙醇)500ml，加入碳酸钾或碳酸氢钾调pH值为8-11(优选pH为10)，加热提取1h，过滤，滤渣加甲醇(或95％乙醇)500ml，提取1h，过滤，滤渣再加甲醇(或95％乙醇)500ml，提取0.5h，过滤，合并三次滤液，浓缩至200ml，用稀盐酸调PH为5.0，放置过夜，离心，残渣加50％甲醇(或50％乙醇)500ml加热溶解，加入2.5g活性炭搅拌，过滤，滤液回收溶剂至100ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于95.0％。

实施例6

蛇葡萄100g，加甲醇(或95％乙醇)500ml，加入氨水或碳酸铵或碳酸氢铵调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热提取1h，过滤，滤渣加甲醇(或95％乙醇)500ml，提取1h，过滤，滤渣再加甲醇(或95％乙醇)500ml，提取0.5h，过滤，合并三次滤液，浓缩至200ml，用稀盐酸调PH为5.0，放置过夜，离心，残渣加50％甲醇(或50％乙醇)500ml加热溶解，加入2.5g活性炭搅拌，过滤，滤液回收溶剂至100ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于95.0％。

实施例7

蛇葡萄1kg，加15000ml水，加碳酸钾、氨水、氢氧化钠混合溶液调pH值为7.5-14(优选pH为10)，加热煎煮1.5h，过滤，滤渣加10000ml水，煎煮1h，过滤，滤渣再加水10000ml，煎煮1h，过滤，合并三次滤液，浓缩至2000ml，用稀盐酸调PH为3.5，放置过夜，离心，残渣加50％乙醇5000ml加热溶解，加入2.5g活性炭搅拌，过滤，滤液回收乙醇至1000ml，放置过夜，滤过，滤渣干燥得黄绿色杨梅素晶体，收率大于5.0％，含量大于96.0％。

Claims

1、一种杨梅素的制备方法，其特征为：将蛇葡萄或其它葡萄科蛇葡萄属植物原料药材用水溶液或含水的乙醇、甲醇溶液(碱性溶液调节PH为7.5-14)提取一次或多次，趁热过滤，合并提取液，浓缩，用稀酸调PH为2-8，析晶，得粗提物；粗提物用乙醇、甲醇或丙酮提取一次或多次，过滤，合并滤液，用0.5-2％(W/V)的活性炭脱色，回收溶剂，析晶，得杨梅素晶体。

2、根据权利1所述的方法，其特征在于水、乙醇或甲醇水溶液提取时用量为药材重的5-50倍；提取时间为1h-3h；

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于加入的碱性溶液可以为碱溶液或碱性盐溶液。其中包括氨水、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、氧化镁、氢氧化镁、醋酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铵、碳酸氢铵及可以满足pH的有机碱和有机盐。

4、根据权利要求1、3所述的方法，其特征在于加入的碱性溶液可为以上一种或几种。

5、根据权利要求3所述的加入碱性溶液的量为可将提取时溶液的PH值调为7.5-14；加入方式可以是水溶液也可以是直接加入。

6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于粗提物提取时提取液浓度为10％-95％。提取液可以是甲醇、乙醇、丙酮。活性炭加入量为提取液0.5-5％，调PH值的稀酸是盐酸、硫酸或磷酸。