CN102526127B - 蛹虫草中有效成分的闪式提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种蛹虫草中有效成分的闪式提取方法。采用的技术方案是：将样品于60℃下干燥3～5小时；选择水或醇或二者的混合物为溶剂，调节溶剂的pH为3～8；将预处理后的原料和调配好的提取溶剂混合后，于闪式提取器中，提取2～15分钟，混悬液过滤，得滤液；将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液；将洗脱液浓缩，得浓缩液。本发明的方法操作简单，提取时间短，提取时间为传统加热回流提取用时的4%以下，样品后处理方便，节约能源，生产成本低，周期短，适合应用于大规模生产。以虫草素为考核指标，采用本发明的闪式提取法，每100g干燥的蛹虫草子实体可以提取出虫草素0.100-0.300g。

Description

蛹虫草中有效成分的闪式提取方法

技术领域

本发明属于从中草药中提取有效成分的方法领域，具体地涉及一种从蛹虫草中提取有效成分的方法。

背景技术

虫生菌统称为虫草属，属子囊菌纲，肉座菌目,麦角菌科，是一种虫生真菌，虫草具有多种药理作用，用于肺结核、老人虚弱、贫血虚弱等，具有重要的医药经济价值。它含有虫草多糖、甘露醇（也称虫草酸）、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、B-谷甾醇、麦古甾醇、生物碱、多种氨基酸、无机盐和维生素等。其中虫草素是蛹虫草的重要组成部分。全世界有350多种，我国有近60种，主要分布在东北、华北、西北等省区。但据报道，云南、贵州、四川、重庆等南方省区也有分布。蛹虫草又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草、东北虫草，《新华本草纲要》记载“性平，味甘，有益肾，补精髓，止血化痰。”寄生在鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫蛹体上，菌性属中温型，生长在低海拔的平原地。

在20世纪70年代国外就发现虫草素有抑制肿瘤作用，但虫草素在体内的快速代谢和虫草素昂贵的生产成本限制了进一步的研究和开发利用。20世纪90年代，国外研究发现添加腺苷脱氨酶(ADA)抑制剂对虫草素抗肿瘤活性的表达起着重要作用；同时，国内外在虫草素生产技术方面取得了一定的进步，从而使虫草素的研究获得突破性进展。目前虫草素的研究现正成为药物化学中一个极其活跃的领域。

目前，随着生活节奏的加快和思想观念的转变，人们越来越注重自身保健，虫草多糖具有抗肿瘤、降糖、抗肝纤维化及提高免疫功能，虫草素具有抗菌，消炎、抗氧化、调节人体内分泌和增强人体免疫功能等显著作用，虫草素、虫草多糖等蛹虫草成份提取物在医药市场的前景良好。

传统提取方法如煎煮法、回流法、连续回流法、浸渍法、渗漉法等已被人们熟知，传统方法提取时间过长，从1小时至3小时不等，致使生产效率低，生产周期长，液固比均在10：1以上，生产成本大，耗能大，收率低，而且加热易破坏原有的活性成分，成本大，不适合大规模生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛹虫草提取物的生产方法，克服了现有提取方法的提取时间长，耗能大的缺点，以达到提高生产效率，缩短生产周期，降低生产成本的目的。

本发明采用的技术方案是：蛹虫草中有效成分的闪式提取方法，步骤如下：

1)      原料的预处理：将样品于60℃下干燥3～5小时；所述的样品为蛹虫草、蛹虫草子实体，蛹虫草子实体菌块、或蛹虫草菌丝体；

2)      提取溶剂的调配：选择水或醇或二者的混合物为溶剂，调节溶剂的pH为3～8； 

3)      闪式提取：将预处理后的原料和调配好的提取溶剂混合后，于闪式提取器中，提取2～15分钟，混悬液过滤，得滤液；

4)      将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液；

5)      浓缩：将洗脱液浓缩，得浓缩液；

6)      喷雾干燥：将浓缩液通过喷雾干燥制成蛹虫草提取物的固体制剂。

本发明的有益效果是：本发明的方法操作简单，提取时间短，提取时间为传统加热回流提取用时的4%以下，样品后处理方便，节约能源，生产成本低，周期短，适合应用于大规模生产。蛹虫草中含有虫草多糖、甘露醇（也称虫草酸）、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、B-谷甾醇、麦古甾醇、生物碱、多种氨基酸、无机盐和维生素等成分，以虫草素为考核指标，采用本发明的闪式提取法，每100g干燥的蛹虫草子实体可以提取出虫草素0.100-0.300g。

附图说明

图1 虫草素标准品液相检测图。

图2 实例1得到的浓缩液的液相谱图。

图3 实例2得到的浓缩液的液相谱图。

图4 实例3得到的浓缩液的液相谱图。

具体实施方式

实施例1  

（一） 制备方法

1)      原料的预处理：将蛹虫草子实体于60℃下干燥4小时，取10g于烧杯中；

2)      提取溶剂：量取250ml蒸馏水，用稀盐酸将其pH值调为3.0； 

3)      闪式提取：将提取溶剂置于1）步骤的烧杯中，使用闪式提取器对其进行机械粉碎式提取3min，混悬液过滤，得滤液；

4)      离子交换树脂提纯：将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液；5)      浓缩：将洗脱液浓缩，得浓缩液。

（二） 检测

1．高效液相色法测定虫草素含量

1）试剂和材料

甲醇（色谱纯），纯净水，虫草素标准品。

2）色谱条件： Diamonsil 反相C18柱（250×4.6mm,5μm）；waters高效液相，1525泵；2478紫外可见光检测器；流动相：甲醇:水=15:85（v/v）；流速为1ml/min；260nm紫外检测波长；进样量20μl。

3）虫草素标准溶液的配制

准确秤取虫草素标准品5mg,甲醇溶解定容至10ml，配置成500mg/ml的标准储备液。再将其稀释成10、20、30、50、70/100μg/ml虫草素标准液，分别取上述溶液20μl，按色谱条件分进样，测定峰面积。得到回归方程为y=58011.3x-58391.8相关系数r=0.9997。图1为虫草素标准品高效液相色检测图。

2．样品检测

将浓缩液定容至100ml，从中取少量使用孔径为0.45μm的微孔滤膜将其过滤，使用高效液相色普法进行有效物的含量分析，使用提取物中主要物质虫草素作为评价指标，高效液相色检测图如图2所示，测得每100g干燥的蛹虫草子实体样品中，提取出虫草素0.247g。

实施例2

（一） 制备方法

1)      原料的预处理：将蛹虫草子实体于60℃下干燥4小时，取10g于烧杯中；

2)      提取溶剂：量取350ml蒸馏水，用稀盐酸将其pH值调为7.0； 

3)      闪式提取：将提取溶剂置于1）步骤的烧杯中，使用闪式提取器对其进行机械粉碎式提取1min，混悬液过滤，得滤液；

4)      离子交换树脂提纯：将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液；

5)      浓缩：将洗脱液浓缩，得浓缩液。

（二）检测

将浓缩液定容至100ml，从中取少量使用孔径为0.45μm的微孔滤膜将其过滤，使用高效液相色普法进行有效物的含量分析，使用高效液相色普法进行有效物的含量分析，使用提取物中主要物质虫草素作为评价指标，高效液相色检测图如图3所示。测得每100g干燥的虫草样品中可以提取出虫草素0.216g。

实施例3

（一） 制备方法

1)      原料的预处理：将蛹虫草子实体于60℃下干燥4小时，取10g于烧杯中；

2)      提取溶剂：量取150ml蒸馏水，用稀盐酸将其pH值调为8.0； 

3)      闪式提取：将提取溶剂置于1）步骤的烧杯中，使用闪式提取器对其进行机械粉碎式提取2min，混悬液过滤，得滤液；

4)      离子交换树脂提纯：将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液；

5)      浓缩：将洗脱液浓缩，得浓缩液；

6)      喷雾干燥：通过喷雾干燥制成虫草提取物的固体制剂。

（二）检测

将浓缩液定容至100ml，从中取少量使用孔径为0.45μm的微孔滤膜将其过滤，使用高效液相色普法进行有效物的含量分析，使用提取物中主要物质虫草素作为评价指标，高效液相色检测图如图4所示。测得每100g干燥的虫草样品中可以提取出虫草素0.203g。

Claims (1)

1.蛹虫草中有效成分的闪式提取方法，其特征在于步骤如下：

1）原料的预处理：将蛹虫草子实体于60℃下干燥4小时，取10g于烧杯中；

2) 提取溶剂：量取250ml蒸馏水，用稀盐酸将其pH值调为3.0； 

3)  闪式提取：将提取溶剂置于1）步骤的烧杯中，使用闪式提取器对其进行机械粉碎式提取3min，混悬液过滤，得滤液；

4)  离子交换树脂提纯：将滤液过离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱，得洗脱液。

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