CN105193880A - 一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，包括如下步骤：将软枣猕猴桃新鲜果实清洗干净、粉碎成匀浆，用石油醚封闭浸泡除去小分子杂质，用酶解法将软枣猕猴桃叶的有效成分分离出来，然后通过碱提酸沉得粗提物，再用HPD600大孔树脂柱吸附洗脱，回收试剂，得到软枣猕猴桃黄酮。本发明的提取方法采用酶解法及碱提酸沉的提取方法，减少在提取过程中有机试剂的使用，环保且容易操作，适用于工业生产，还可有效缩短提取时间；同时使用石油醚先除去杂质成分，有效地减少试剂消耗，降低生产成本。本研究方法可有效提高黄酮的提取率。

Description

一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法

技术领域

本发明涉及黄酮的提取。更具体地，涉及一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法。

背景技术

软枣猕猴桃(拉丁名：Actinidiaarguta)别名：软枣子，圆枣子，圆枣，奇异莓，为猕猴桃科猕猴桃属多年生木质藤本植物，有“水果之王”的美称，在我国分布范围广泛，主要分布于东北、华北、山东、西北及长江流域等地区，其中东北三省最为显著。软枣猕猴桃因处于开发阶段，基本为野生状态，多呈零星分布，很少成片。果圆球形至柱状长圆形，长2-3cm，有喙或喙不显著，无毛，无斑点，不具宿存萼片，成熟时绿黄色或紫红色。种子纵径约2.5mm。该植物果实多汁，酸甜适口，口感独特，富含多种营养物质，其中含有糖类、黄酮类、维生素、氨基酸、矿质元素等功能活性成分，具有滋补强身、生津润肺等作用，对高血压、心绞痛、高血脂等症有一定的疗效。据文献报道，软枣猕猴桃还具有提高机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、防治心脑血管疾病和保肝护肝等生理功能，十分具有开发研究的意义。

黄酮类化合物是植物中分布很广且重要的天然产物，具有2-苯基色原酮结构的化合物。黄酮类化合物具有广泛的生物活性，有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒，防治心血管疾病及增强人体免疫能力等多种生物活性。现有的国内外文献研究中，对软枣猕猴桃的研究多集中在其人工驯化及栽培条件的研究及功能性饮品的研究上，而对于其有效成分尤其是黄酮类物质的工业化提取方面少有涉猎。

本发明主要研究一种适用于工业化生产的关于软枣哦猕猴桃黄酮的提取方法，对猕猴桃的综合开发利用奠定理论基础，具有重要的科研价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法。此软枣猕猴桃黄酮的提取方法简单，提取时间短，有机试剂的消耗量低，且黄酮提取率高。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，包括如下提取步骤：

1)将新鲜软枣猕猴桃果实洗净、粉碎成匀浆，用石油醚密闭浸泡、过滤干燥，得残渣；

2)将步骤1)所得残渣进行酶解，抽滤，取可溶部分，减压浓缩，得粗提物；

3)将步骤2)所得粗提物溶于蒸馏水中，进行加热、搅拌、PH调节，静置后抽滤，留不溶物，并用蒸馏水冲洗至中性，干燥；

4)将步骤3)所得物经HPD600大孔树脂柱吸附洗脱，回收试剂，保留浓缩物即为提取的黄酮化合物。

优选地，步骤1)中，所述匀浆与石油醚的体积比为1:3-1:5；所述浸泡时间为25-30min。

优选地，步骤2)中，所述酶解包括：向所得残渣中加入纤维素酶溶液，在45-50℃水浴中加热1-1.5h；

优选地，步骤2)中，所述纤维素酶溶液是指将纤维素酶溶解于磷酸缓冲盐溶液中，纤维素酶的质量分数为0.7％；所述纤维素酶的与残渣的质量比为1:5-1:6。

优选地，步骤3)中，所述粗提物与蒸馏水的质量比为1:6-1:8；所述加热温度为50-55℃。

优选地，步骤3)中，所述PH调节包括：向搅拌后混合均匀的溶液中加入石灰乳，至溶液PH值为8-9，抽滤后，将残留物如前重复操作一次，合并两次所得滤液；再向滤液中加入HCl，至滤液PH值为5-6。

优选地，步骤3)中，所述静置的时间为12-15h。

优选地，步骤4)中，所述洗脱是指先用体积分数为35％的乙醇作为洗脱剂，进行洗脱，接取馏分；再使用体积分数为85％的乙醇作为洗脱剂，对馏分继续洗脱。

优选地，步骤4)中，所述洗脱时洗脱剂流速为2-2.5mL/min。

优选地，步骤4)中，黄酮化合物的提取率大于97％。

本发明一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，选用特定的提取方法及提取条件，可有效的提高黄酮的提取率。首先选用石油醚浸泡磨成匀浆的软枣猕猴桃果实，萃取出其中的叶绿素等小极性的物质，再通过酶解法，加入纤维素酶来对细胞壁进行分解。先用石油醚进行萃取可有效的促进纤维素酶的分解作用，除去极性较小的杂质成分，从而可以更好的分离出软枣猕猴桃果实的有效成分。再选用碱提酸沉得粗提物，本方法为物理反应，可避免与所提取的有效成分发生化学反应导致其成分改变。最后经过大孔树脂柱进行吸附洗脱，吸附洗脱依次选用两种不同浓度的乙醇进行，可有效的去除杂质，起到对总黄酮纯化的作用。

本发明的有益效果如下：

本发明软枣猕猴桃黄酮的提取方法，采用酶解法及碱提酸沉的方法进行提取，可有效的减少提取过程中有机试剂的消耗量，使得提取成本降低。

本发明黄酮的提取选用了特定的提取方法及提取条件，使得黄酮的提取率高。

本发明方法简单，易于操作，适用于工业生产。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1

一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，提取方法如下：

将新鲜软枣猕猴桃果实洗净、粉碎磨成匀浆后，加入其3倍体积量的石油醚，密闭浸泡25min后，快速过滤，去掉滤液，得到残渣；

向所得残渣中加入纤维素酶溶液，纤维素酶溶液是指将纤维素酶溶解于磷酸缓冲盐溶液中，纤维素酶的质量分数为0.7％，纤维素酶的添加量与残渣的质量比为1:5。并在45℃水浴中加热1h,抽滤，取溶液部分，减压浓缩得浓缩物粗提物为软枣猕猴桃含黄酮化合物的有效成分；

将上述所得粗提物溶解于其6倍质量的蒸馏水中，加热至50℃，搅拌均匀后加入石灰乳，至溶液PH值为8，抽滤后，将残留物如前重复操作一次，合并两次所得滤液；再向滤液中加入HCl，至滤液PH值为5，静置12h后，抽滤，保留不溶物，并将其用蒸馏水冲洗至中性，干燥；

将上述所得提取物经HPD600大孔树脂柱吸附，并先用体积分数为35％的乙醇作为洗脱剂，进行洗脱，流速为2mL/min，接取馏分；再使用体积分数为85％的乙醇作为洗脱剂，对馏分继续洗脱，流速为2mL/min。回收吸附洗脱后的试剂，得到浓缩物软枣猕猴桃黄酮化合物。

经测定，所得黄酮化合物的提取率达98.3％。

实施例2

一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，提取方法如下：

将新鲜软枣猕猴桃果实洗净、粉碎磨成匀浆后，加入其5倍体积量的石油醚，密闭浸泡30min后，快速过滤，去掉滤液，得到残渣；

向所得残渣中加入纤维素酶溶液，纤维素酶溶液是指将纤维素酶溶解于磷酸缓冲盐溶液中，纤维素酶的质量分数为0.7％，纤维素酶的添加量与残渣的质量比为1:6。并在50℃水浴中加热1.5h,抽滤，取溶液部分，减压浓缩得浓缩物粗提物为软枣猕猴桃含黄酮化合物的有效成分；

将上述所得粗提物溶解于其8倍质量的蒸馏水中，加热至55℃，搅拌均匀后加入石灰乳，至溶液PH值为9，抽滤后，将残留物如前重复操作一次，合并两次所得滤液；再向滤液中加入HCl，至滤液PH值为6，静置15h后，抽滤，保留不溶物，并将其用蒸馏水冲洗至中性，干燥；

将上述所得提取物经HPD600大孔树脂柱吸附，并先用体积分数为35％的乙醇作为洗脱剂，进行洗脱，流速为2mL/min，接取馏分；再使用体积分数为85％的乙醇作为洗脱剂，对馏分继续洗脱，流速为2.5mL/min。回收吸附洗脱后的试剂，得到浓缩物软枣猕猴桃黄酮化合物。

经测定，所得黄酮化合物的提取率达98.8％。

实施例3

一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，提取方法如下：

将新鲜软枣猕猴桃果实洗净、粉碎磨成匀浆后，加入其5倍体积量的石油醚，密闭浸泡30min后，快速过滤，去掉滤液，得到残渣；

向所得残渣中加入纤维素酶溶液，纤维素酶溶液是指将纤维素酶溶解于磷酸缓冲盐溶液中，纤维素酶的质量分数为0.7％，纤维素酶的添加量与残渣的质量比为1:6。并在50℃水浴中加热1h,抽滤，取溶液部分，减压浓缩得浓缩物粗提物为软枣猕猴桃含黄酮化合物的有效成分；

将上述所得粗提物溶解于其7倍质量的蒸馏水中，加热至55℃，搅拌均匀后加入石灰乳，至溶液PH值为9，抽滤后，将残留物如前重复操作一次，合并两次所得滤液；再向滤液中加入HCl，至滤液PH值为5，静置15h后，抽滤，保留不溶物，并将其用蒸馏水冲洗至中性，干燥；

将上述所得提取物经HPD600大孔树脂柱吸附，并先用体积分数为35％的乙醇作为洗脱剂，进行洗脱，流速为2mL/min，接取馏分；再使用体积分数为85％的乙醇作为洗脱剂，对馏分继续洗脱，流速为2.5mL/min。回收吸附洗脱后的试剂，得到浓缩物软枣猕猴桃黄酮化合物。

经测定，所得黄酮化合物的提取率达98.1％。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (10)

1.一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：包括如下提取步骤：

1)将新鲜软枣猕猴桃果实洗净、粉碎成匀浆，用石油醚密闭浸泡、过滤干燥，得残渣；

2)将步骤1)所得残渣进行酶解，抽滤，取可溶部分，减压浓缩，得粗提物；

3)将步骤2)所得粗提物溶于蒸馏水中，进行加热、搅拌、PH调节，静置后抽滤，留不溶物，并用蒸馏水冲洗至中性，干燥；

4)将步骤3)所得物经HPD600大孔树脂柱吸附洗脱，回收试剂，保留浓缩物即为提取的黄酮化合物。

2.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤1)中，所述匀浆与石油醚的体积比为1:3-1:5；所述浸泡时间为25-30min。

3.根据权利要求2所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤2)中，所述酶解包括：向所得残渣中加入纤维素酶溶液，在45-50℃水浴中加热1-1.5h。

4.根据权利要求3所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤2)中，所述纤维素酶溶液是指将纤维素酶溶解于磷酸缓冲盐溶液中，纤维素酶的质量分数为0.7％；所述纤维素酶与残渣的质量比为1:5-1:6。

5.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤3)中，所述粗提物与蒸馏水的质量比为1:6-1:8；所述加热温度为50-55℃。

6.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤3)中，所述PH调节包括：向搅拌后混合均匀的溶液中加入石灰乳，至溶液PH值为8-9，抽滤后，将残留物如前重复操作一次，合并两次所得滤液；再向滤液中加入HCl，至滤液PH值为5-6。

7.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤3)中，所述静置的时间为12-15h。

8.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤4)中，所述洗脱是指先用体积分数为35％的乙醇作为洗脱剂，进行洗脱，接取馏分；再使用体积分数为85％的乙醇作为洗脱剂，对馏分继续洗脱。

9.根据权利要求1或8所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤4)中，所述洗脱时洗脱剂流速为2-2.5mL/min。

10.根据权利要求1所述的一种软枣猕猴桃黄酮的提取方法，其特征在于：优选地，步骤4)中，黄酮化合物的提取率大于97％。