CN109999069A - 一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,涉及黄酮提取技术领域。本发明所述方法以新鲜软枣猕猴桃为原料,经匀浆、酶解、离心、微波、离心、微滤后超滤,得黄酮化合物,最终得率可达0.58~0.61mg/g。本发明所述方法在提取过程中不利用有毒有机溶剂,不产生二次污染,流程简单。
Description
技术领域
本发明属于黄酮提取技术领域,具体涉及一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法。
背景技术
软枣猕猴桃(Actinidia arguta Sieb.et Zucc)又名软枣子、猕猴梨、藤瓜和藤枣,为猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)多年生落叶藤本植物,分布于东北、华北、山东、西北及长江流域,其中东北南部山区较多见。果实可食用,多汁,酸甜适口,风味独特。营养价值很高,含大量维生素C、B族维生素、氨基酸、类胡萝卜素、多糖、黄酮等多种营养成分。黄酮类化合物是一类植物中分布很广而且重要的多酚类天然产物,具有广泛的药理活性,如抗氧化作用、抗菌抗病毒作用、消炎作用、提高机体免疫力、抗肿瘤、降血压、降血脂、防治心脑血管疾病和保肝护肝等生理功能。
但是目前针对软枣猕猴桃中的黄酮成分,多以有机溶剂进行萃取,如石油醚、正丁醇等,使得得到的黄酮中存在有机溶剂污染,而且经萃取后,还包括色谱柱层析或树脂柱吸附洗脱等纯化步骤,操作复杂,需要特定装置。目前并没有一种几乎不适用有机溶剂的黄酮提取方法。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,不使用有机溶剂,且步需要特定装置,操作简单,黄酮得率高。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,包括以下步骤:(1)将新鲜软枣猕猴桃粉碎至匀浆,酶解预处理2~3h,得酶消化液;所述酶包括纤维素酶和果胶酶;
(2)将所述酶消化液离心后,取上清液与乙醇溶液混合,微波处理3~5min后离心,收集上清液,得总黄酮液;
(3)将所述总黄酮液过微滤膜后得到的滤液超滤,得黄酮溶液;所述微滤膜的孔径为0.22μm;所述超滤用膜的截留分子量为5000u~8000u。
优选的,步骤(1)所述酶解预处理的温度为45~60℃。
优选的,所述酶中纤维素酶和果胶酶的质量比为(1~5)∶2。
优选的,在所述酶解预处理前,还包括将所述酶溶解于磷酸缓冲液中,所述酶占所述磷酸缓冲液的质量百分比为0.4~1%。
优选的,步骤(2)所述乙醇溶液的体积浓度为70~85%。
优选的,步骤(2)所述微波处理的功率为250~400W。
优选的,步骤(3)所述过微滤膜后还包括将得到的滤渣重新溶解后再过微滤膜,将得到的滤液合并。
优选的,所述微滤膜的种类包括醋酸纤维素膜。
优选的,所述超滤用膜的种类包括改性聚醚砜膜。
优选的,所述超滤的压力为0.2~0.6MPa。
本发明提供了一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,以新鲜软枣猕猴桃为原料,经酶解消化、微波处理、微滤和超滤后得到黄酮溶液。在本发明实施例中,经测定黄酮提取率可达0.61mg/g。
具体实施方式
本发明提供了一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,包括以下步骤:(1)将新鲜软枣猕猴桃粉碎至匀浆,酶解预处理2~3h,得酶消化液;所述酶包括纤维素酶和果胶酶;
(2)将所述酶消化液离心后,取上清液与乙醇溶液混合,微波处理3~5min后离心,收集上清液,得总黄酮液;
(3)将所述总黄酮液过微滤膜后得到的滤液超滤,得黄酮溶液;所述微滤膜的孔径为0.22μm;所述超滤用膜的截留分子量为5000u~8000u。
在本发明所述提取方法中,将新鲜软枣猕猴桃粉碎至匀浆,酶解预处理2~3h,得酶消化液;所述酶包括纤维素酶和果胶酶。本发明对所述新鲜软枣猕猴桃的来源并没有特殊限定,优选成熟且表皮干净的软枣猕猴桃。本发明将所述软枣猕猴桃粉碎至匀浆后酶解预处理2~3h,本发明所述酶为纤维素酶和果胶酶的混合酶,所述混合酶中,所述纤维素酶和果胶酶的质量比优选为(1~5)∶2,更优选为(2~4)∶2,最优选为3∶2。本发明在所述酶解预处理时,优选还包括将所述混合酶溶解于磷酸缓冲液中,所述酶占所述磷酸缓冲液的质量百分比为0.4~1%,更优选为0.5~0.8%,最优选为0.7%。本发明将所述匀浆与含所述酶的磷酸缓冲液进行预处理2~3h,所述匀浆与含所述酶的磷酸缓冲液的体积比优选为(5~8)∶1,更优选为(5.4~7.2)∶1,最优选为6.5∶1。本发明所述混合酶中,纤维素酶可对细胞壁进行分解,促进黄酮的进一步析出;且果胶酶可降解果胶成水溶性糖,可提高黄酮的提取率。本发明所述酶解预处理的温度优选为45~60℃,更优选为50~58℃,最优选为52℃。本发明对所述果胶酶和纤维素酶的来源并没有特殊限定,利用本领域的常规市售酶即可。
得酶消化液后,本发明将所述酶消化液离心后,取上清液与乙醇溶液混合,微波处理3~5min后离心,收集上清液,得总黄酮液。本发明所述离心优选4℃下离心,所述离心的转速优选为8500~12000rpm,更优选为9000~11000rpm,最优选为10000rpm。本发明所述离心的时间优选为10~20min,更优选为12~16min,最优选为15min。本发明收集离心后的上清液与乙醇溶液混合后进行微波处理,所述乙醇溶液与所述软枣猕猴桃的匀浆体积质量比优选为(3~5)mL∶1g,更优选为4mL∶1g。本发明所述乙醇溶液的体积浓度优选为70~85%,更优选的为72~80%,最优选为75%。本发明所述微波处理的功率优选为250~400W,更优选为300~380W,最优选为360W。本发明所述微波处理时的温度优选为40~60℃,更优选为45~56℃,最优选为48℃。本发明将所述微波后的液体离心,收集上清液,所述离心优选的为在4℃下进行,所述离心的转速优选为5500~8000rpm,更优选为6000~7600rpm,最优选为7200rpm。本发明所述离心的时间优选为5~10min,更优选为6~9min,最优选为8min。本发明所述微波处理可促进黄酮类化合物的释放,同时还可以灭活酶。
得总黄酮液后,本发明将所述总黄酮液过微滤膜后得到的滤液超滤,得黄酮溶液;所述微滤膜的孔径为0.22μm;所述超滤用膜的截留分子量为5000~8000u。本发明所述微滤膜的种类优选包括醋酸纤维素膜,以0.22μm的孔径可截留部分悬浮颗粒、蛋白质和固形物等杂质,同时还能保证黄酮损失较小。本发明所述过微滤膜时的压力优选为0.2~0.4MPa,更优选为0.3MPa。本发明在所述过微滤膜后优选还包括将得到的滤渣重新溶解后再过微滤膜,将得到的滤液合并。本发明将通过微滤膜后的液体超滤,所述超滤用膜的种类优选包括改性聚醚砜膜(PES),所述PES的截留分子量优选为5500u~7500u,更优选为6000u~7000u,最优选为6500u。本发明将所述超滤膜可截留大部分蛋白质、多糖、鞣质等杂质。本发明对所述微滤膜和超滤膜的来源并没有特殊限定,利用本领域的常规市售产品即可。本发明所述超滤的压力优选为0.2~0.6MPa,更优选为0.3~0.5MPa,最优选为0.4MPa。
下面结合实施例对本发明提供的微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将清洗好的软枣猕猴桃鲜果粉碎至匀浆后,准确量取100g匀浆与15.4mL磷酸缓冲液(含0.7%的混合酶,纤维素酶和果胶酶的质量比为3∶2)混合后于50℃下预处理2h;
收集酶解液4℃条件下离心,10000rpm 15min,取上清液与400mL 75%乙醇混合后微波(功率为360W,48℃,3min),继续于4℃下离心,7200rpm 8min;
滤液于0.3MPa下过0.2μm醋酸纤维素膜,滤渣重新溶解于乙醇后再过0.2μm醋酸纤维素膜,合并过滤液后,再于0.4MPa下过6500u的PES膜。
经测定后,黄酮提取率达0.61mg/g。
实施例2
将清洗好的软枣猕猴桃鲜果粉碎至匀浆后,准确量取100g匀浆与20mL磷酸缓冲液(含0.5%的混合酶,纤维素酶和果胶酶的质量比为2∶2)混合后于48℃下预处理3h;
收集酶解液4℃条件下离心,8500rpm 20min,取上清液与500mL 70%乙醇混合后微波(功率为320W,58℃,3min),继续于4℃下离心,6000rpm 10min;
滤液于0.4MPa下过0.2μm醋酸纤维素膜,滤渣重新溶解于乙醇后再过0.2μm醋酸纤维素膜,合并过滤液后,再于0.6MPa下过6000u的PES膜。
经测定后,黄酮提取率达0.58mg/g。
实施例3
将清洗好的软枣猕猴桃鲜果粉碎至匀浆后,准确量取100g匀浆与12.5mL磷酸缓冲液(含0.8%的混合酶,纤维素酶和果胶酶的质量比为4∶2)混合后于60℃下预处理2.5h;
收集酶解液4℃条件下离心,12000rpm 10min,取上清液与350mL 80%乙醇混合后微波(功率为400W,40℃,5min),继续于4℃下离心,8000rpm 6min;
滤液于0.2MPa下过0.2μm醋酸纤维素膜,滤渣重新溶解于乙醇后再过0.2μm醋酸纤维素膜,合并过滤液后,再于0.3MPa下过7000u的PES膜。
经测定后,黄酮提取率达0.6mg/g。
本发明提供了一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,以新鲜软枣猕猴桃为原料,经匀浆、酶解、离心、微波、离心、微滤后超滤,得黄酮化合物,最终得率可达0.58~0.61mg/g。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种微波辅助提取软枣猕猴桃中黄酮的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将新鲜猕猴桃粉碎至匀浆,酶解预处理2~3h,得酶消化液;所述酶包括纤维素酶和果胶酶;
(2)将所述酶消化液离心后,取上清液与乙醇溶液混合,微波处理3~5min后离心,收集上清液,得总黄酮液;
(3)将所述总黄酮液过微滤膜后得到的滤液超滤,得黄酮溶液;所述微滤膜的孔径为0.22μm;所述超滤用膜的截留分子量为5000~8000u。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤(1)所述酶解预处理的温度为45~60℃。
3.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述酶中纤维素酶和果胶酶的质量比为(1~5)∶2。
4.根据权利要求2所述方法,其特征在于,在所述酶解预处理前,还包括将所述酶溶解于磷酸缓冲液中,所述酶占所述磷酸缓冲液的质量百分比为0.4~1%。
5.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤(2)所述乙醇溶液中乙醇的体积浓度为70~85%。
6.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤(2)所述微波处理的功率为250~400W。
7.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤(3)所述过微滤膜后还包括将得到的滤渣重新溶解后再过微滤膜,将得到的滤液合并。
8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述微滤膜的种类包括醋酸纤维素膜。
9.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述超滤用膜的种类包括改性聚醚砜膜。
10.根据权利要求9所述方法,其特征在于,所述超滤的压力为0.2~0.6MPa。
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