CN103180334B - 制备芍药内酯苷和芍药苷的方法 - Google Patents

制备芍药内酯苷和芍药苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同时制备高纯度芍药苷和高纯度芍药内酯苷的方法,其包括对芍药采用渗漉或加热回流提取得到芍药提取液,然后将芍药提取液依次进行大孔树脂、氧化铝柱和硅胶柱层析,即得到高纯度的芍药苷和芍药内酯苷。本发明的制备方法可在同一工艺流程中低成本、低能耗地得到高纯度的芍药苷和芍药内酯苷,工艺简单、纯化效率高,精致时间短。

Description

制备芍药内酯苷和芍药苷的方法
技术领域
本发明属医药技术领域,涉及化学领域化合物的分离提取方法,具体涉及植物天然生理活性物质芍药苷和芍药内酯苷的制备工艺。
背景技术
芍药是毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物,常用其干燥根入药。中国药典2010年版中收录2种芍药。一种是白芍(RadixPaeoniaeAlba),为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根;一种是赤芍(RadixPaeoniaeRubra),为毛茛科植物川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根。目前市场上已有多种含芍药的中药制剂,如脑血栓片、益脑复健胶囊、偏瘫复原片、回生再造丸、大活络丸等。主要用于治疗心脑血管疾病、神经痛、高血压、流产、痛经等症。现代化学研究表明:芍药主要含有芍药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiflorin)、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等成分。由于芍药苷在药材中含量高,纯品较易获得,所以对芍药苷的研究报道较多。芍药苷具有镇痛、镇静、保肝、抗炎、免疫调节、扩张血管、改善学习记忆行为等活性,可用于治疗类风湿性关节炎、肝炎和老年性相关疾病等。长期以来,大多数研究认为芍药苷是芍药的主要有效成分,从而以芍药苷作为指标来测量含芍药药物,并以其含量的高低来评价药物的质量性能。
芍药内酯苷(Albiflorin)为单萜类化合物,其分子式为C23H28O11,分子量为480.46,分子结构如式(I)所示,芍药苷(Paeoniflorin)为单萜类化合物,其分子式为C23H28O11,分子量为480.46,分子结构如式(II)所示。
近年来,现代药理研究发现芍药内酯苷具有镇痛、镇静、抗惊厥作用,对免疫系统的作用,对平滑肌的作用,抗炎作用,抗病原微生物,护肝作用,临床上主要用于抗癫痫,镇痛、戒毒,止眩晕,治疗类风湿性关节炎,治疗细菌性痢疾及肠炎,治疗病毒性肝炎,老年性疾病,抗硫酸钡絮凝和溶解粘液的作用。
因此,对芍药内酯苷的药理研究越来越受到重视,芍药内酯苷的研究日益增多,例如:申请号为200510045840.0的发明专利申请公开了一种从白芍(毛茛科芍药属植物芍药(PaeonialactiforaPall)中提取分离得到的含有活性化合物芍药苷和芍药内酯苷的组合物,两组分含量之和在50%-95%之间,并且芍药苷与芍药内酯苷在该组合物中的比例为1∶10~10∶1,该组合物用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物。又如:申请号为200710132810.2的发明专利申请公开了一种含有芍药苷和芍药内酯苷药物组合物,该组合物中芍药苷与芍药内酯苷的重量之比为10∶1-50∶1,该明药物组合物可用于预防和治疗心脑血管疾病。但是上述研究仅仅是对芍药苷、芍药内酯苷的药理用途进行了研究,制备的是芍药苷和芍药内酯苷的组合物。
由于芍药内酯苷的化学特性,制备纯度高的芍药内酯苷的方法困难,现有的研究中还没有一种简便易行的工艺方法,可以低成本、大规模制备得到高纯度的芍药内酯苷。例如申请号为200910100680.3的发明专利申请公开了一种模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法。该方法模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷,采用白芍总苷提取物作为原料,应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷,模拟移动床色谱的固定相采用C18硅胶,流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液,混合溶液中按体积百分计:甲醇或乙腈10%~50%、水50%~90%、甲酸0~1%、异丙醇0~2%,上述的各组分的总和为100%,该方法制备的芍药内酯苷的纯度虽然可以达到90%以上,但因为该技术需要使用大量价格昂贵的反相硅胶(RP-C18),且制备工艺流程复杂,操作工艺控制条件苛刻,导致产品成本高,不适合大规模生产。
迄今为止,尚未有一种适合产业化生产同时制备高纯度芍药内酯苷和高纯度芍药苷的工艺路线披露。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时制备高纯度芍药苷和芍药内酯苷的方法,本发明方法操作工艺过程简单,生产周期短。运用本发明方法,可在一个工艺流程中,分别制备得到公斤级的芍药苷和芍药内酯苷,且所得到的芍药苷和芍药内酯苷的含量高,纯度可达到90%以上。采取这种制备方法提取纯化芍药苷和芍药内酯苷,显著地降低了生产成本,适宜批量制备和工业化生产。
为实现本发明的目的,本发明一方面提供一种制备芍药内酯苷和芍药苷的方法,该方法包括如下顺序进行的步骤:a)采用渗漉提取法对芍药药材进行渗漉提取,得到芍药渗漉液;b)将芍药渗漉液依次进行大孔树脂柱分离、氧化铝柱层析和硅胶柱层析。
其中,步骤a)中采用水、乙醇或甲醇为渗漉提取溶液进行所述的渗漉提取,优选为水。
特别是,所述渗漉提取溶液的体积与芍药药材的重量之比为5-20∶1,即当芍药药材重量(干重)为1kg时,渗漉提取溶液的体积为5-20L,当芍药药材重量(干重)为1g时,渗漉提取溶液的体积为5-20ml。
尤其是,渗漉提取过程中每小时渗漉液的流量与芍药药材的重量之比为0.5-8∶1,优选为1-5∶1,即当芍药药材重量(干重)为1kg时,渗漉提取过程中每小时渗漉液的流量为0.5-8L,当芍药药材重量(干重)为1g时,渗漉液的流量为0.5-8ml。
特别是,还包括将芍药药材用水浸泡处理后,在进行所述的渗漉提取,其中浸泡芍药药材的水的体积与芍药药材的重量之比为2-3∶1,即当芍药药材重量(干重)为1kg时,渗漉提取溶液的体积为2-3L,当芍药药材重量(干重)为1g时,渗漉提取溶液的体积为2-3ml。
其中,步骤b)中所述的大孔树脂柱分离包括如下顺序进行的步骤:
1)将所述芍药渗漉液加入到大孔树脂柱内;
2)采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱,除杂;
3)采用乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,干燥后,得到大孔树脂柱分离混合物。
特别是,步骤1)中所述的大孔树脂选择D101、D-201、AB-8或HP-20型非极性大孔吸附树脂中的一种。
尤其是,大孔树脂柱内所述的大孔吸附树脂的体积与芍药药材的重量之比为0.5-5∶1,即当芍药药材重量(干重)为1kg时,大孔吸附树脂的体积为0.5-5L,当芍药药材重量(干重)为1g时,大孔吸附树脂的体积为0.5-5ml,优选为1-2∶1。
特别是,大孔树脂柱分离过程中洗脱液流速为0.5-5倍柱床体积/h,即每小时洗脱液的流量为大孔树脂柱内大孔吸附树脂的体积的0.5-5倍。
特别是,步骤2)中洗脱剂水与大孔树脂的体积之比为3-5∶1;步骤3)中所述的乙醇溶液的质量百分比浓度为30-70%,优选为40-60%;步骤3)中所述乙醇溶液与大孔树脂的体积之比为3-5∶1。
其中,步骤b)中所述的氧化铝柱层析包括如下顺序进行的步骤:
1)将大孔树脂柱分离混合物溶解后,拌入氧化铝,干燥得到氧化铝层析样品;
2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行氧化铝层析,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,得到氧化铝层析洗脱液;
3)将氧化铝层析洗脱液蒸干后,得到氧化铝层析混合物。
特别是,步骤1)中大孔树脂柱分离混合物与氧化铝拌合的比例为1∶0.5-5;步骤2)中所述氧化铝柱内的氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为5-30∶1,优选为8-25∶1,进一步优选为10-25∶1。
尤其是,氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝的高度之比为1∶6-10。
其中,步骤b)中所述的硅胶柱层析包括如下顺序进行的步骤:
1)将氧化铝层析提取物溶解后,拌入硅胶,干燥得到硅胶层析样品;
2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行硅胶层析,收集洗脱液,分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液流份;
3)将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别蒸干后,得到芍药苷或芍药内酯苷。
特别是,步骤1)中氧化铝层析提取物与硅胶拌合的比例为1∶0.5-5;步骤2)中硅胶柱内的硅胶与氧化铝层析混合物的重量之比为5-30∶1,优选为12-30∶1。
尤其是,硅胶柱的柱直径与柱内硅胶的高度之比为1∶6-10,优选为1∶8-10。
本发明另一方面提供一种制备芍药内酯苷和芍药苷的方法,包括如下顺序进行的步骤:
a)以乙醇或甲醇溶液为提取溶剂,对芍药药材进行加热回流提取,得到芍药提取液;
b)浓缩芍药提取液,去除乙醇或甲醇后,加水稀释得到芍药醇提稀释液;
c)将芍药醇提稀释液依次进行大孔树脂柱分离、氧化铝柱层析和硅胶柱层析。
其中,步骤a)中所述的乙醇溶液的质量百分比浓度为30-100%;所述的甲醇醇溶液的质量百分比浓度为30-100%。
特别是,步骤a)中所述的提取溶剂的体积与药材的重量(干重)之比为5-12∶1(即如果药材的重量(干重)为1公斤,则提取溶剂的体积为5-12升;如果药材的重量(干重)为1克,则提取溶剂的体积为5-12毫升);提取次数为2-3次,提取时间为2-4小时/次。
特别是,步骤b)中所述芍药醇提稀释液体积与芍药药材重量(干重)之比为1-8∶1,优选为2-8∶1,即当药材的重量(干重)为1公斤时,芍药醇提稀释液的体积为1-8L,当药材的重量(干重)为1克时,芍药醇提稀释液的体积为1-8ml。
特别是,步骤c)中所述的大孔树脂柱分离包括如下顺序进行的步骤:
1)将所述芍药醇提稀释液加入到大孔树脂柱内;
2)采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱,除杂;
3)采用乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,干燥后,得到大孔树脂柱分离混合物。
特别是,步骤c)中所述的氧化铝柱层析包括如下顺序进行的步骤:
1)将大孔树脂柱分离混合物溶解后,拌入氧化铝,干燥得到氧化铝层析样品;
2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行氧化铝层析,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,得到氧化铝层析洗脱液;
3)将氧化铝层析洗脱液蒸干后,得到氧化铝层析混合物。
特别是,步骤c)中所述的硅胶柱层析包括如下顺序进行的步骤:
1)将氧化铝层析提取物溶解后,拌入硅胶,干燥得到硅胶层析样品;
2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行硅胶层析,收集洗脱液,分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液流份;
3)将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别蒸干后,得到芍药苷或芍药内酯苷。
本发明具有如下优点:
1、应用本发明方法,可在同一个工艺流程中,制备得到芍药苷和芍药内酯苷,并且可以分别得到公斤级的芍药苷和公斤级的芍药内酯苷,充分利用药材资源的综合使用价值,适宜工业化生产。
2、应用本发明方法,制备的芍药苷和芍药内酯苷纯度高,采用硅胶柱层析法纯化处理后的芍药苷和芍药内酯苷含量达到90%以上。
3、本发明制备方法采用水为芍药苷和芍药内酯苷的提取液,以无毒、无害的乙醇、乙酸乙酯为纯化洗脱溶剂,既节约了成本,而且还对环境友好,符合绿色经济、环境保护的发展要求。
4、本发明制备工艺方法简单,精制效率高,耗能低,环保,操作工艺条件容易控制,质量可控性强。
5、本发明所述的高纯度芍药苷和芍药内酯苷,可以单独用于制备药物和功能性保健食品,也可以与其它任何中西药物或食物,尤其是与某些具有活血化淤和保护心脑血管疾病的中药或是与镇静安神和抗抑郁抗焦虑的中药配伍,起到协同或者增效之目的,用于制备药物和功能性保健食品。
附图说明
图1为本发明芍药苷、芍药内酯苷制备工艺流程图;
图2为实施例1制备所得芍药苷的HPLC检测图谱;
图3为实施例1制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱;
图4为实施例4制备所得芍药苷的HPLC检测图谱;
图5为实施例4制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱;
图6为实施例5制备所得芍药苷的HPLC检测图谱;
图7为实施例5制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行进一步说明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
1、药材的提取
1)干燥的白芍药材3公斤,粉碎成粗粉后,装入不锈钢中药渗漉罐(容积为12L)中,加入6L纯净水浸泡2小时;
2)加入纯净水,对芍药粗粉进行渗漉提取,获得芍药渗漉液,其中,渗漉液的流速为6L/h,渗漉提取液纯净水的体积与药材白芍的重量之比为10∶1,即当白芍的重量(干重)为1公斤时,纯净水的体积为10L;白芍的重量(干重)为1克时,纯净水的体积为10ml。
2、大孔树脂柱粗分离
1)将渗漉液直接采用大孔吸附树脂柱进行分离处理,其中,大孔吸附树脂选择D101型大孔吸附树脂,大孔吸附树脂柱内的D101型大孔吸附树脂的柱体积为4L(层析柱的直径8cm,高1.5m),树脂体积与药材重量(干重)之比为4∶3,即如果药材(干重)3公斤,大孔树脂的体积是4L;如果药材(干重)30克,则大孔树脂的体积为40毫升,待渗漉液以8L/h的流速完全流入树脂柱后,先用12L的纯净水洗涤至流出液澄清后,弃去水洗脱的流出液;然后再用12L质量百分比浓度为50%的乙醇洗脱,洗脱流速为8L/h,收集乙醇洗脱的流出液,每3L流出液收集为一流份;
2)采用薄层色谱法(TLC法)检测收集的大孔树脂柱乙醇洗脱流份中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况,将含有芍药苷或/和芍药内酯苷的洗脱液流份合并,得到树脂柱洗脱液,其中,TLC法使用的薄层板为硅胶G板,展开剂为氯仿、甲醇的混合液,氯仿与甲醇的体积比为4∶1,上行展开后,喷以5%的硫酸乙醇溶液,150℃加热5分钟后显色;
3)将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱洗脱液置于真空减压浓缩罐内进行减压浓缩,浓缩后水浴蒸干、粉碎,得到大孔树脂柱分离混合物210g,其中,减压浓缩的温度为70℃,相对压力为-0.09~-0.075MPa。
3、氧化铝柱层析
1)将大孔树脂柱分离混合物用适量甲醇全部溶解后加入210g氧化铝粉(100-200目),搅拌均匀,干燥,磨碎,得到氧化铝柱层析样品;
2)将氧化铝柱层析样品置于氧化铝柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行氧化铝柱层析,其中,氧化铝柱内的吸附剂氧化铝的粒度为100-200目,氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比1∶10;吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为20∶1,洗脱剂为乙酸乙酯,用量100L,每1L洗脱液收集一流份;
3)采用薄层色谱法(TLC法)检测氧化铝柱洗脱流份中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况,将含有芍药苷、芍药内酯苷的流份合并,制得氧化铝层析洗脱液,其中,TLC法使用的薄层板为硅胶G板,展开剂为氯仿、甲醇的混合液,氯仿与甲醇的体积比为4∶1,上行展开后,喷以5%的硫酸乙醇溶液,150℃加热5分钟后显色;
4)将氧化铝层析洗脱液蒸干,得到氧化铝层析混合物121g。
4、硅胶柱层析
1)将氧化铝层析混合物用质量百分比浓度为95%的乙醇溶解后加入120g层析用硅胶粉(200-300目),搅拌均匀,干燥,磨碎,得到硅胶层析样品;
2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行硅胶柱层析,其中,硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目,硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为1∶8;吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比为24∶1,流速为10L/h。洗脱剂乙酸乙酯的用量为96L,每1L洗脱液收集为一流份;
3)采用薄层色谱法(TLC法)检测硅胶柱洗脱流份中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况,将只含有芍药苷单一成分的洗脱流份合并为第一部分(即芍药苷部分);将只含有芍药内酯苷单一成分的洗脱流份合并为第二部分(即芍药内酯苷部分),其中,TLC法使用的薄层板为硅胶G板,展开剂为氯仿、甲醇的混合液,氯仿与甲醇的体积比为4∶1,上行展开后,喷以5%的硫酸乙醇溶液,150℃加热5分钟后显色;
4)将合并后的2部分分别蒸干,重量为83.9g芍药苷;重量为25.3g的芍药内酯苷。
采用HPLC法检查制得的芍药苷、芍药内酯苷的含量,HPLC检测条件为:仪器:Water515泵,2487检测器;色谱柱:HyperODS2C18;流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液(14:86);检测波长:230nm;流速:1.0ml/min。
经HPLC检测芍药苷含量为96.7%,见附图2;芍药内酯苷的含量为98.6%,见附图3。
实施例2
药材的渗漉提取步骤,除了渗漉提取液纯净水的体积与药材白芍的重量之比为5∶1,渗漉液的流速为4L/h之外,其余与实施例1相同;
大孔树脂柱粗分离步骤,除了选用HP-20型大孔吸附树脂,树脂体积与药材重量(干重)之比为1∶1,洗脱液乙醇的质量百分比浓度为30%,洗脱液乙醇的用量为20L;粗分离得到的大孔树脂柱分化混合物为189g之外,其余与实施例1相同;
氧化铝柱层析步骤,除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为10∶1;氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比1∶6;乙酸乙酯的用量为53L;洗脱流速为8L/h;得到的氧化铝柱层析混合物为105g之外,其余与实施例1相同;
硅胶柱层析步骤,除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比为15∶1,洗脱剂乙酸乙酯的用量为62L,洗脱流速为6L/h;硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为1∶10;得到重量为74.3g的芍药苷;重量为23.6g的芍药内酯苷之外,其余与实施例1相同。
经HPLC检测芍药苷含量为92.7%;芍药内酯苷的含量为93.6%。
实施例3
药材的渗漉提取步骤,除了渗漉提取液纯净水的体积与药材白芍的重量之比为15∶1,渗漉液的流速为3L/h之外,其余与实施例1相同;
大孔树脂柱粗分离步骤,除了选用D-201型大孔吸附树脂,树脂体积与药材重量(干重)之比为5∶3,洗脱液乙醇的质量百分比浓度为70%,洗脱液乙醇的用量为12L,洗脱流速为4L/h;粗分离得到的大孔树脂柱分化混合物为243g之外,其余与实施例1相同;
氧化铝柱层析步骤,除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为25∶1;乙酸乙酯的用量为168L,洗脱流速为8L/h;得到的氧化铝柱层析混合物为124g之外,其余与实施例1相同;
硅胶柱层析步骤,除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比为30∶1,洗脱剂乙酸乙酯的用量为120L,洗脱流速为6L/h,得到重量为84.3g的芍药苷;重量为27.9g的芍药内酯苷之外,其余与实施例1相同。
经HPLC检测芍药苷含量为97.5%;芍药内酯苷的含量为96.7%。
实施例4
1、药材的提取
1)干燥的白芍药材1公斤,粉碎成粗粉后,装入10L圆底烧瓶中,加热进行乙醇热回流提取,共提起三次,其中提取溶剂乙醇的质量百分比浓度50%,三次提取溶剂乙醇的用量为5L,5L,5L,三次提取时间为3h,3h,2h;
2)将三次提取液合并后,采用真空减压浓缩罐(无锡市华新药化设备有限公司产)进行减压浓缩,去除乙醇,浓缩至无醇味,制得芍药浓缩液,其中减压浓缩的温度为70℃,相对真空度为-0.09~-0.075MPa;
3)向芍药浓缩液中加入纯净水至总体积为2L,制成芍药醇提稀释液,备用,其中,芍药醇提稀释液的体积与芍药药材的重量之比为2∶1。
本发明对药材进行加热回流提取处理时的提取溶剂除了选用质量百分比浓度为50%的乙醇溶液之外,其他质量百分比浓度范围为30-100%的乙醇溶液均适用于本发明。
2、大孔树脂柱粗分离
1)将芍药醇提稀释液采用大孔吸附树脂柱进行分离处理,其中,大孔吸附树脂选择D-201型大孔吸附树脂,大孔吸附树脂柱内的D-201型大孔吸附树脂的柱体积为1.5L(层析柱的直径5.5cm,高1200cm),树脂体积与药材重量(干重)之比为1.5∶1,即药材(干重)1公斤,大孔树脂的体积是1.5L,待芍药醇提稀释液以1L/h的流速完全流入树脂柱后,先用5L的纯净水洗涤至流出液清澈透明后,弃去水流出液,再用5L质量百分比浓度为50%的乙醇洗脱,洗脱流速为1.5L/h,收集乙醇洗脱液;
2)将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱乙醇洗脱液置于真空减压浓缩罐内进行减压浓缩,浓缩后水浴蒸干、粉碎,得到大孔树脂柱分离混合物71g,其中,减压浓缩的温度为70℃,相对压力为-0.09~-0.075MPa。
3、氧化铝柱层析
除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为8∶1;氧化铝层析柱的直径5.5cm,氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比1∶10;乙酸乙酯的用量为48L;洗脱流速为4L/h;得到的氧化铝柱层析混合物为41g之外,其余与实施例1相同。
4、硅胶柱层析
除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比为12∶1,层析柱的直径7.6cm,硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为1∶10;洗脱剂乙酸乙酯的用量为36L,洗脱流速为3L/h,得到重量为26.13g的芍药苷;重量为9.12g的芍药内酯苷之外,其余与实施例1相同。
经HPLC检测芍药苷含量为94.05%,见附图4;芍药内酯苷的含量为92.25%,见附图5。
实施例5
药材的热回流提取步骤,除了提取溶剂选用质量百分比浓度为70%的乙醇溶液,热回流提取2次,2次提取溶剂乙醇的用量为12L,10L,2次提取时间为4h,3h,减压回收乙醇至无醇味,加水稀释制得总体积为8L的芍药醇提稀释液之外,其余与实施例4相同;
大孔树脂柱粗分离步骤,除了选用AB-8型大孔吸附树脂,树脂体积与药材重量(干重)之比为2∶1,芍药醇提稀释液以2L/h的流速完全流入树脂柱,纯净水洗脱时,水的用量为8L;乙醇洗脱时乙醇溶液的质量百分比浓度为70%,用量为6L,洗脱流速为2L/h;粗分离得到的大孔树脂柱分化混合物为83g之外,其余与实施例1相同;
氧化铝柱层析步骤,除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为20∶1;氧化铝层析柱的直径7.6cm,氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比1∶10;乙酸乙酯的用量为66L;洗脱流速为4L/h;得到的氧化铝柱层析混合物为37.2g之外,其余与实施例1相同;
硅胶柱层析步骤,除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比为28∶1,硅胶层析柱的直径10cm,硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为1∶10;洗脱剂乙酸乙酯的用量为86L,洗脱流速为3L/h,得到重量为25.12g的芍药苷;重量为8.38g的芍药内酯苷之外,其余与实施例1相同。
经HPLC检测芍药苷含量为98.5%,见附图6;芍药内酯苷的含量为94.1%,见附图7。

Claims (6)

1.一种制备芍药内酯苷和芍药苷的方法,其中,所述芍药内酯苷、芍药苷为单体化合物,包括如下顺序进行的步骤:
a)采用渗漉提取法对芍药药材进行渗漉提取,得到芍药提取液,其中,渗漉提取溶液采用水、乙醇或甲醇;渗漉提取溶液的体积与芍药药材的重量之比为5-15:1;
b)将芍药提取液按照如下步骤进行进行大孔树脂柱分离:
b1)将所述芍药提取液加入到大孔树脂柱内,其中,所述大孔树脂选择D101、D-201、AB-8或HP-20型非极性大孔吸附树脂中的一种;大孔树脂柱内所述的大孔吸附树脂的体积与芍药药材的重量之比为0.5-5:1;
b2)采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱,除杂;
b3)采用质量百分比浓度为30-70%的乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,干燥后,得到大孔树脂柱分离混合物;
c)对大孔树脂柱分离混合物按照如下步骤进行氧化铝柱层析:
c1)将大孔树脂柱分离混合物溶解后,拌入氧化铝,干燥得到氧化铝层析样品;
c2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行氧化铝层析,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,得到氧化铝层析洗脱液,其中氧化铝柱内的氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为5-30:1;
c3)将氧化铝层析洗脱液蒸干后,得到氧化铝层析混合物;
d)对氧化铝层析混合物按照如下步骤进行硅胶柱层析:
d1)将氧化铝层析混合物溶解后,拌入硅胶,干燥得到硅胶层析样品;
d2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行硅胶层析,收集洗脱液,分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液流份,其中硅胶柱内的硅胶与氧化铝层析混合物的重量之比为5-30:1;
d3)将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别蒸干后,得到芍药苷或芍药内酯苷。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征是步骤b1)中大孔树脂柱内所述的大孔吸附树脂的体积与芍药药材的重量之比为1-2:1。
3.如权利要求1或2所述的制备方法,其特征是步骤b3)中所述的乙醇溶液的质量百分比浓度为40-60%。
4.如权利要求1或2所述的制备方法,其特征是步骤c2)中氧化铝柱内的氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为8-25:1。
5.如权利要求1或2所述的制备方法,其特征是步骤d2)中硅胶柱内的硅胶与氧化铝层析混合物的重量之比为12-30:1。
6.一种制备芍药内酯苷和芍药苷的方法,其中,所述芍药内酯苷、芍药苷为单体化合物,包括如下顺序进行的步骤:
a)以乙醇或甲醇为提取溶剂,对芍药药材进行加热回流提取,得到芍药提取液;b)浓缩芍药提取液去除乙醇或甲醇后,加水稀释得到芍药醇提稀释液,其中芍药醇提稀释液体积与芍药药材重量之比为1-8:1;
c)将芍药醇提稀释液按照如下步骤进行大孔树脂柱分离:
c1)将所述芍药醇提稀释液加入到大孔树脂柱内,其中,所述大孔树脂选择D101、D-201、AB-8或HP-20型非极性大孔吸附树脂中的一种;大孔树脂柱内所述的大孔吸附树脂的体积与芍药药材的重量之比为0.5-5:1;
c2)采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱,除杂;
c3)采用质量百分比浓度为30-70%的乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,干燥后,得到大孔树脂柱分离混合物;
d)对大孔树脂柱分离混合物按照如下步骤进行氧化铝柱层析:
d1)将大孔树脂柱分离混合物溶解后,拌入氧化铝,干燥得到氧化铝层析样品;
d2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行氧化铝层析,收集洗脱液,合并洗脱液中含有芍药苷和/或芍药内酯苷的流份,得到氧化铝层析洗脱液,其中氧化铝柱内的氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量之比为5-30:1;
d3)将氧化铝层析洗脱液蒸干后,得到氧化铝层析混合物;
e)对氧化铝层析混合物按照如下步骤进行硅胶柱层析:
e1)将氧化铝层析混合物溶解后,拌入硅胶,干燥得到硅胶层析样品;
e2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部,以乙酸乙酯为洗脱剂,进行硅胶层析,收集洗脱液,分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液流份,其中硅胶柱内的硅胶与氧化铝层析混合物的重量之比为5-30:1;
e3)将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别蒸干后,得到芍药苷或芍药内酯苷。
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