CN102311984A

CN102311984A - 一种从淫羊藿制备宝藿苷ⅰ的方法

Info

Publication number: CN102311984A
Application number: CN201110186207A
Authority: CN
Inventors: 贾晓斌; 张振海; 孙娥; 陈玲玲; 钱浅
Original assignee: 贾晓斌
Priority date: 2011-07-05
Filing date: 2011-07-05
Publication date: 2012-01-11

Abstract

本发明提供了一种从淫羊藿药材高效制备宝藿苷I的方法。

Description

一种从淫羊藿制备宝藿苷Ⅰ的方法

技术领域

本发明涉及一种从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，属于医药技术领域。

背景技术

淫羊藿，药用历史悠久，疗效确切，是临床常用中药。其传统功能是补肾阳，强筋骨，祛风湿。用于阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。现代药理实验研究表明，淫羊藿能增强心脑血管血流量、促进造血功能、调节骨代谢、提高免疫功能，还具有抗衰老、抗肿瘤和抗艾滋病等多种功效，临床被用于治疗骨质疏松、更年期综合征、高血压、冠心病、小儿麻痹症、慢性支气管炎等疾病。淫羊藿由于其丰富的药用植物资源、多样的药理作用和确切的临床疗效，一直是国内外研究的热点，具有巨大的研究和开发潜力。

宝藿苷I，化学名：3，5，7-三羟基-4′-甲氧基-8-异戊烯基黄酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷，是一种多羟基黄酮类单体成分。药理研究表明宝藿苷I具有抗肿瘤、抗骨质疏松等作用。但因其在淫羊藿药材中的含量较低，难以直接分离纯化得到，故无法进行工业化制备。化学结构(I)所示。

发明人研究发现，淫羊藿提取液用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解后，宝藿苷I含量大幅度提高，酶解液分离纯化后宝藿苷I收率大幅度提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种从淫羊藿制备宝藿苷I的方法

针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，其特征在于包括：淫羊藿药材用水提取，提取液加入吐温80，用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解，酶解得到的酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化；或者淫羊藿药材用一定浓度的乙醇提取，提取液回收乙醇，加入吐温80，用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解，酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化。

所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，淫羊藿药材用一定浓度的乙醇提取，乙醇的浓度范围在10～95％之间，优选的乙醇的浓度范围在30～60％之间，更优选的乙醇的浓度是50％。

所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解提取液时，控制酶解温度在30-60℃。

所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解提取液时，进行搅拌。

所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，D101和AB-8二种大孔树脂混合填充色谱柱，D101和AB-8的质量比为9∶1～1∶9，优选为1∶1。

所述的淫羊藿药材提取液酶解得到的酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化的具体步骤包括：D101和AB-8二种大孔树脂均匀混合后装柱，淫羊藿药材提取液酶解得到的酶解液以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品。

宝藿苷I粗品的进一步分离纯化方法是宝藿苷I粗品用有机溶剂反复重结晶或柱层析或制备色谱进一步精制。

本发明中所述的乙醇的百分比，系指20℃容量的比例；各种浓度的乙醇均由乙醇和水组成。

本发明的有益效果主要是：

1、淫羊藿提取液用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解后，宝藿苷I含量大幅度提高，酶解液分离纯化后宝藿苷I收率大幅度提高。

2、淫羊藿提取液酶解后，宝藿苷I大幅度增加，由于难溶于水，会大量沉淀吸附在反应罐上而损失，在提取液中加入吐温80，能够显著增加宝藿苷I在水中的溶解度，避免沉淀损失，增加宝藿苷I的收率；同时由于宝藿苷I被吐温80增溶，也方便了后续的大孔树脂上样，避免了宝藿苷I沉淀堵塞大孔树脂，适于规模化生产。

3、采用D101和AB-8二种大孔树脂混合装柱，宝藿苷I基本上都在60％乙醇洗脱液中，宝藿苷I收率较高；采用D101或AB-8大孔树脂单独装柱，30％乙醇洗脱液中含有较多的宝藿苷I，并且由于30％乙醇洗脱液中成分复杂，其中的宝藿苷I难于分离纯化，只能放弃，最终宝藿苷I的收率较低。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但应注意本发明的范围并不受这些实例的任何限制。

实施例1

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加水煎煮2次，每次1小时，每次加水20kg，提取液真空浓缩至比重为1.05(60℃)，加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，测定酶解液含有宝藿苷I 4.1g。

D101和AB-8二种大孔树脂按质量比为1∶1均匀混合后装柱，酶解得到的酶解液取三分之一，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品2.0g，宝藿苷I含量为52％；将宝藿苷I粗品用无水乙醇加热溶解，过滤，滤液室温放置，析出的沉淀用50％的乙醇洗涤，干燥，即得宝藿苷I精制品0.8g，宝藿苷I含量为95％。

D101大孔树脂装柱，酶解得到的酶解液取三分之一，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品1.6g，宝藿苷I含量为31％；将宝藿苷I粗品用无水乙醇加热溶解，过滤，滤液室温放置，析出的沉淀用50％的乙醇洗涤，干燥，即得宝藿苷I精制品0.6g，宝藿苷I含量为63％。

AB-8大孔树脂装柱，酶解得到的酶解液取三分之一，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品1.9g，宝藿苷I含量为45％；将宝藿苷I粗品用无水乙醇加热溶解，过滤，滤液室温放置，析出的沉淀用50％的乙醇洗涤，干燥，即得宝藿苷I精制品0.7g，宝藿苷I含量为82％。

实施例2

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加50％乙醇回流提取2次，每次1小时，每次加50％乙醇10kg，提取液回收乙醇，真空浓缩至比重为1.05(60℃)，加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，测定酶解液含有宝藿苷I 5.3g。

D101和AB-8二种大孔树脂按质量比为1∶1均匀混合后装柱，酶解得到的酶解液，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品8.2g，宝藿苷I含量为54％；将宝藿苷I粗品用无水乙醇加热溶解，过滤，滤液室温放置，析出的沉淀用50％的乙醇洗涤，干燥，即得宝藿苷I精制品3.5g，宝藿苷I含量为93％。

实施例3

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加50％乙醇回流提取2次，每次1小时，每次加50％乙醇10kg，提取液回收乙醇，调节pH至5.0，加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，测定酶解液含有宝藿苷I 5.2g。

D101和AB-8二种大孔树脂按质量比为1∶2均匀混合后装柱，酶解得到的酶解液，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品7.1g，宝藿苷I含量为52％；将宝藿苷I粗品用无水乙醇加热溶解，过滤，滤液室温放置，析出的沉淀用50％的乙醇洗涤，干燥，即得宝藿苷I精制品3.1g，宝藿苷I含量为91％。

实施例4

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加50％乙醇回流提取2次，每次1小时，每次加50％乙醇10kg，提取液回收乙醇，真空浓缩至比重为1.05(60℃)，加入5g吐温80和3gβ-葡萄糖苷酶，50℃下搅拌酶解24小时，测定酶解液含有宝藿苷I 5.4g。

D101和AB-8二种大孔树脂按质量比为1∶1均匀混合后装柱，酶解得到的酶解液，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品8.5g，宝藿苷I含量为53％；用硅胶柱分离，无水乙醇重结晶，得纯度98.8％的宝藿苷I 2.6g。

将最终产物进行核磁共振分析，¹H NMR、¹³C NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO，400MHz，30℃)，δ1.2(3H，s，CH3-4″)，1.6(3H，s，CH3-5″)，2.5(2H，s，OH)，3.4(2H，d，J＝6.8Hz，H-11)，3.8(3H，s，4′-OCH₃)，5.1(1H，t，J＝6.8Hz，H-2″)，6.3(1H，s，H-6)，7.1(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，H-5′)，8.1(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，H-6′)，9.4(1H，s，OH-3)，10.7(1H，s，OH-7)，12.3(1H，s，OH-5)；

¹³C NMR(DMSO，100MHz，30℃)，δ153.9(C-2)，136.3(C-3)，176.7(C-4)，160.9(C-5)，98.3(C-6)，161.7(C-7)，103.5(C-8)，146.6(C-9)，106.0(C-10) 122.9(C-1′)，129.6(C-2′，6′)，114.5(C-3′，5′)，158.7(C-4′)，21.6(C-1″)，124.0(C-2″)，131.4(C-3″)，25.9(C-4″)，18.3(C-5″)，55.8(4′-OCH₃)。

与文献提供的宝藿苷I数据一致。

实施例5

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加50％乙醇回流提取2次，每次1小时，每次加50％乙醇10kg，提取液回收乙醇，调节pH至5.0，加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，测定酶解液含有宝藿苷I 5.0g。

D101和AB-8二种大孔树脂按质量比为1∶1均匀混合后装柱，酶解得到的酶解液，以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品7.3g，宝藿苷I含量为53％；用制备色谱继续分离宝藿苷I，得纯度99.5％的宝藿苷I 2.5g。

高效液相色谱分析：制备得到的样品与中检所提供的宝藿苷I对照品的保留时间一致。

紫外分析：200～400nm扫描，制备得到的样品与中国药品生物制品检定所提供的宝藿苷I对照品图谱一致。

实施例6

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加水煎煮2次，每次1小时，每次加水20kg，提取液真空浓缩至比重为1.05(60℃)，平均分为2份。

一份提取液加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，酶解液从酶解罐中放出，测定酶解液含有宝藿苷I 2.2g。

一份提取液加入5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，酶解液从酶解罐中放出，测定酶解液含有宝藿苷I 0.7g。

实施例7

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加50％乙醇回流提取2次，每次1小时，每次加50％乙醇10kg，提取液回收乙醇，调节pH至5.0，平均分为2份。

一份提取液加入5g吐温80和5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，酶解液从酶解罐中放出，测定酶解液含有宝藿苷I2.5g。

实施例8

取淫羊藿药材1kg，高效液相法测定宝藿苷I含量为0.08％，加水煎煮2次，每次1小时，每次加水20kg，提取液平均分为2份。

一份提取液加入5g纤维素酶，50℃下搅拌酶解24小时，酶解液从酶解罐中放出，测定酶解液含有宝藿苷I 0.9g。

Claims

1.一种从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，其特征在于包括：淫羊藿药材用水提取，提取液加入吐温80，用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解，酶解得到的酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化；或者淫羊藿药材用一定浓度的乙醇提取，提取液回收乙醇，加入吐温80，用β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解，酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化。

2.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，淫羊藿药材用一定浓度的乙醇提取，乙醇的浓度范围在10～95％之间，优选的乙醇的浓度范围在30～60％之间，更优选的乙醇的浓度是50％。

3.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解提取液时，控制酶解温度在30-60℃。

4.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，β-葡萄糖苷酶或纤维素酶酶解提取液时，进行搅拌。

5.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，D101和AB-8二种大孔树脂混合填充色谱柱，D101和AB-8的质量比为9∶1～1∶9，优选为1∶1。

6.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，淫羊藿药材提取液酶解得到的酶解液通过D101和AB-8二种大孔树脂混合填充的色谱柱进行分离纯化的具体步骤包括：D101和AB-8二种大孔树脂均匀混合后装柱，淫羊藿药材提取液酶解得到的酶解液以一定的流速通过大孔树脂柱，先用水洗，再依次用30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集60％乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得宝藿苷I粗品。

7.根据权利要求1所述的从淫羊藿制备宝藿苷I的方法，还包括宝藿苷I粗品的进一步分离纯化，分离纯化方法是宝藿苷I粗品用有机溶剂反复重结晶或柱层析或制备色谱进一步精制。