CN101863939A

CN101863939A - 一种沙苑子苷a的制备方法

Info

Publication number: CN101863939A
Application number: CN200910057073A
Authority: CN
Inventors: 程萍; 钱勇; 陈多加; 费文静; 何玉琴; 谢天培
Original assignee: SHANGHAI NATURE STANDARD BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: SHANGHAI NATURE STANDARD BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2009-04-15
Filing date: 2009-04-15
Publication date: 2010-10-20

Abstract

本文公开了一种从中药沙苑子中分离提取沙苑子苷A的方法。该方法的步骤是从中药沙苑子中用80％比的乙醇水提取液浓缩后经乙酸乙酯萃取后，再用水饱和的正丁醇萃取，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解，经大孔树脂用10％-30％、50％-70％甲醇水洗脱，收集50％-70％甲醇水洗脱液，浓缩至干，用少量甲醇溶解，上反相C18柱，用30％-50％甲醇水洗脱后，收集含有沙苑子苷A洗脱液，挥干溶剂后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，纯度在98％以上。这种方法成功得到沙苑子苷A满足了市场上对中药对照品沙苑子苷A的需要，方法较为简单。

Description

一种沙苑子苷A的制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种从中药材沙苑子中制备沙苑子苷A(complanatuside A)的方法，属于天然药的有效成分提取分离领域。

二、背景技术

沙苑子是豆科黄芪属植物扁茎黄芪(Astragalus complanatus R.Brown)的种子。沙苑子苷A(complanatuside A)是沙苑子中主要的活性成分，属于黄酮类化合物，其结构为鼠李柠檬素-3，4’-O-β-D-双葡萄糖甙，淡黄色结晶，其结构如图：

根据文献报道，沙苑子中的黄酮类化合物具有较好的保肝、抗纤维化、降血脂等药理作用，并具有显著的抗肿瘤作用。有人研究了从沙苑子中提取总黄酮的工艺，但是我们从总黄酮中进一步纯化分离，得到沙苑子苷A的纯品，含量在98％以上。

三、发明内容

1、发明目的：本发明的目的是提供一种获得沙苑子苷A的确实可行的制备方法。

2、技术方案：本发明所述的沙苑子苷A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)将沙苑子用80％乙醇水的溶剂加热到80℃回流提取。

(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水饱和的正丁醇萃取。

(3)将(2)水饱和的正丁醇萃取液浓缩后用水溶解。

(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱，用10-30％、50％-70％甲醇水以此洗脱。

(5)将(4)50％-70％甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用30％-50％甲醇水洗脱。

收集(5)30％-50％甲醇水洗脱液中含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A。

在步骤(1)中，所用的80％乙醇水溶液，其用量是药材重量的10-15倍，药材热回流提取的时间是6-12小时，热回流次数是3-5次。

在步骤(2)中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，所用水饱和的正丁醇用量是被萃取液体积的1-4倍。萃取2-4遍。

在步骤(3)中，正丁醇萃取液浓缩至固态，加入水的量为药材重量0.4-0.8倍。

在步骤(4)中，所用的吸附树脂是D101和AB-8大孔树脂，所用的溶液是50％-70％甲醇水。

在步骤(5)中，所用的反相柱是C18柱，所用的溶液是30％-50％甲醇水，所用的溶剂是水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。

3、有益效果：采用本发明的沙苑子苷A提取纯化方法，(1)从沙苑子中分离得到的沙苑子苷A得率在48％以上，纯度在99％以上。(2)根据文献报道的高效液相检测条件(《HPLC测定沙苑子中沙苑子苷A的含量》(中国中药杂志，2005，30：600-602))进行测定，结果表明，所得的沙苑子苷A含量在98％以上，表明本工艺可行。

四、具体实施方式

下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。

实施例1：将沙苑子用药材重量10倍的80％乙醇水的溶剂加热到50℃回流提取8小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积1倍的乙酸乙酯萃取3遍，水溶液再用被萃取液体积1倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用50％甲醇水洗脱，将50％甲醇水洗脱液浓缩后用水溶解后过反相C18柱，用30％甲醇水洗脱，合并含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，用60％甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，得率为51.1％，纯度为98.7％。

实施例2：将沙苑子用药材重量15倍的80％乙醇水的溶剂加热到50℃回流提取9小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积2倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用被萃取液体积3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用60％甲醇水洗脱，将60％甲醇水洗脱液浓缩后用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用40％甲醇水洗脱，合并含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后用80％乙醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，得率为49.6％，纯度为98.1％。

实施例3：将沙苑子用药材重量13倍的80％乙醇水的溶剂加热到50℃回流提取10小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积3倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用被萃取液体积3倍的水饱和正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用70％甲醇水洗脱，将70％甲醇水洗脱液浓缩后用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用50％甲醇水洗脱，50％甲醇水洗脱液浓缩后，用90％甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，得率为55.6％，纯度为98.5％。

沙苑子苷A的纯度检测

取上述方法制备得到的沙苑子苷A单体适量，甲醇溶于容量瓶中，微孔滤膜过滤后，采用如下条件进行检测。

色谱条件：Agileng 1100高效液相色谱仪器，Agilengt G1314A紫外检测器；色谱柱：Welch Materials XB-C18，5μm，250×4.6mm；流动相：乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.2)，检测波长：291nm，流速：1ml/min；进样量：20μl。

对照品沙苑子苷A自制，经¹H-NMR、MS、IR和UV等测定，其数据与文献一致，鉴定为沙苑子苷A。TLC图谱为一个斑点，HPLC检测为单峰，归一化含量在98％以上，理论塔板数在5000以上。

以上描述了本发明中的沙苑子苷A的提取方法，但需要理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本发明的范围内。

附图为沙苑子苷A的HPLC分析谱图

表1-1沙苑子苷A对照品纯度检查数据

对照品的波谱数据以及解析

1UV_max(MeOH/H2O 1∶1)：267，319，342nm。

2IR(KRr)V max：3380，1660，1600，1500，1080，1020cm^-1。

3ESIMS：[M+1]＝625。

4¹H-NMR(DMSO-d)：δ：5.41(1H，d，J＝7.0Hz)，4.88(1H，d，J＝7.0Hz)，6.27(1H，d，J＝1Hz，H-6)，6.67(1H，d，J＝1Hz，H-8)，7.04(2H，J＝9.0Hz，H-1’，5’)，8.04(2H，J＝9.0Hz，H-2’，6’)，3.76(3H，s，7-OCH₃)。

Claims

1.一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)将沙苑子用80％乙醇水的溶剂加热到50℃回流提取.

(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水饱和的正丁醇溶液萃取。

(3)将(2)正丁醇提取的提取液浓缩后用水溶解。

(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱用50％-70％甲醇水洗脱

(5)将(4)50％-70％甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用30％-50％甲醇水洗脱

(6)将(5)30％-50％甲醇水洗脱液中含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，纯度在98％以上。

2.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，所用的乙醇水溶液中乙醇比可在30％-95％之间，其用量是药材的6-15倍。

3.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，药材热回流提取的时间是6-12小时，热回流次数是3-5次。

4.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，萃取2-3遍。

5.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所用水饱和的正丁醇用量是被萃取液体积的1-4倍，萃取2-4遍。

6.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，浓缩至固体状态。

7.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，水的用量为药材重量的0.4-0.8倍。

8.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用的吸附树脂是D101和AB-8的大孔树脂。

9.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用的溶液是50％-70％甲醇水。

10.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所用的反相柱是C18柱。

11.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所用的溶液是30％-50％甲醇水。

12.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所用的溶剂是水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。