CN102924416A

CN102924416A - 从中药秦皮中分离纯化单体化合物的方法

Info

Publication number: CN102924416A
Application number: CN2012104340681A
Authority: CN
Inventors: 白风沙; 柳仁民; 孙爱玲
Original assignee: Liaocheng University
Current assignee: Liaocheng University
Priority date: 2012-11-05
Filing date: 2012-11-05
Publication date: 2013-02-13
Anticipated expiration: 2032-11-05
Also published as: CN102924416B

Abstract

本发明涉及从秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，是以秦皮为原料，经过下述步骤：（1）秦皮提取物的制备：取粉碎好的秦皮药材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液经回收溶剂后得到提取物粗粉；（2）柱层析纯化：以Superose12为分离介质层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液，得到高纯度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的单体化合物。工艺过程绿色环保，对环境无严重危害。

Description

从中药秦皮中分离纯化单体化合物的方法

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从中药秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法。

背景技术

秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树 Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树 Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白蜡树 Fraxinus szaboana Lingelsh. 或宿柱白蜡树 Fraxinus stylosa Lingelsh. 的干燥枝皮或干皮，性味苦、寒，具有清热燥湿、清肝明目、平喘止咳功效。用于热毒泻痢、目赤肿痛、目生翳障。秦皮中的主要有效成分为香豆素类成分，主要有秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素。

现已有文献报道从秦皮中提取、制备香豆素成分的方法。《秦皮香豆素提取方法》（中国专利，申请号200610137703.4）将秦皮水提醇沉后，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，浓缩液吸附到大孔树脂吸附法上、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，获得秦皮香豆素的方法。所得物为秦皮总香豆素混合物。《一种秦皮提取物的制备方法和用途》（中国专利，申请号200510098808.9）采用水煎煮提取，大孔树脂分离纯化制备秦皮香豆素组合物。该秦皮香豆素组合物是由一定比例的秦皮甲素 (aesculin)、秦皮乙素(aesculetin)、秦皮苷(fraxin)、秦皮亭(fraxetin)等组成的总香豆素混合物。《高纯度秦皮甲素及其制备方法》（中国专利，申请号200510030722.2）提供了一种秦皮甲素的制备方法，包括提取、柱层析、浓缩和结晶步骤，可得到秦皮甲素单体成分。王晶[秦皮中秦皮乙素分离纯化的工艺研究，中成药，2009年02期]利用柱层析，建立了从秦皮中纯化秦皮乙素的方法，可得到秦皮乙素单体成分。

上述方法或主要是进行秦皮混合香豆素的提取，或是进行单一成分的纯化，不能得到多种高纯度秦皮香豆素成分。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、绿色环保、分离量大、综合成本低、生产周期短的快速从中药秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，以满足对秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的需要。

本发明的方案如下：

从秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，步骤为：

（1）秦皮提取物的制备：取粉碎好的秦皮药材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液经回收溶剂得到提取物；

（2）柱层析纯化：将秦皮提取物用甲醇溶解，上Superose 12柱进行层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时1-10倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，得到高纯度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的单体化合物。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）回流提取时介质温度为50-90℃，液固比为3-20，回流提取时间0.5-3小时，回流提取次数1-6次。更加优选的是，介质温度为60-80℃（优选75℃），液固比为5-10（优选7），回流提取时间0.5-2小时（优选1小时），回流提取次数2-5（优选3次）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）提取时所用乙醇或甲醇的质量浓度为50%-100%（优选70%-95%，更优选85%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（2）洗脱液为10%-80%的甲醇-水洗脱液（优选20%-60%，更优选30%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（2）用洗脱液进行洗脱时，洗脱液流速为每小时1-6倍柱体积（优选每小时3倍柱体积）。

本发明从秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，所得提取物目标化合物含量高，杂质低，这一优点从提取物HPLC图（图1）可清楚看出。除此之外，还具有如下优势：

（1）提取物经过一步分离纯化就可以同时得到秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素等多种高纯度单体化合物。不像已有技术一样只能得到混合香豆素或经过多个步骤才能得到一种单体成分。本发明只需要一个分离步骤即可得到多种高纯度化合物，方法操作简单，效率高，工艺周期短，节省试剂，降低了生产成本。

（2）纯化过程中不使用对环境危害大的氯仿等有机溶剂，绿色环保。

（3）优化了层析方法的条件（洗脱液组成），使纯度和效率都大为提高。

附图说明

图1是秦皮提取物的高效液相色谱图。

图2是实施例3层析色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原料皆可从市场获得。所用Superose 12购自通用电气（中国）医疗集团，所用试剂均购自天津试剂四厂，所用水为去离子水。

实施例：秦皮药材经粉碎后，装入回流装置系统，以85%乙醇为提取溶剂，液固比为7，介质温度为75℃，每次回流提取时间为1小时，回流次数3次。提取液经回收溶剂后得到秦皮药材提取物。

将秦皮药材提取物粗粉用30%甲醇溶解，上Superose 12层析，用甲醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时3倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。

发明人通过使用不同浓度的甲醇，采用不同洗脱方式，优选出了实现本发明目的的纯化条件，有关实验结果如下：

表一柱层析条件

	洗脱液条件
		实施例1	65%甲醇-水等度洗脱
实施例2	40%甲醇-水等度洗脱
		实施例3	30%甲醇-水等度洗脱
实施例4	20%和65%甲醇-水梯度洗脱

在实施例1中，采用65%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，各成分洗脱时间较短，但相互之间分离效果不够理想，所得成分纯度较低。实施例2中采用40%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，秦皮素、秦皮苷分离良好，秦皮甲素、秦皮乙素分离效果不好。实施例3中采用30%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，各成分分离良好。实施例4采用20%甲醇-水和65甲醇-水梯度洗脱，各成分分离良好，但洗脱液由于浓度变化回收利用存在较大困难。

图2是当选用实施例3体系时层析色谱图，由图2可见，各成分分离良好。根据色谱图收集各峰组分，回收溶剂后，即可得到相应高纯度化合物。根据¹H-NMR和¹³C-NMR的测试，对所得峰组分进行鉴定，得到秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素。

图1是本发明所得秦皮提取物的高效液相色谱图。经HPLC面积归一化法分析测试，实施例3所得到的各个组分的纯度很高，均在98%以上。经现代波谱数据证实所提取纯化得到的秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的结构式如下：

应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较有代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例。还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，从此文件中所公开提到或是联想到的，均应认为是本专利所要保护的范围。

Claims

1.从中药秦皮中分离纯化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，其特征是，步骤为：

（2）柱层析纯化：将秦皮提取物用甲醇溶解，上Superose 12柱进行层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时1-10倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，得到高纯度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素单体化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）回流提取时介质温度为50-90℃，液固比为3-20，回流提取时间0.5-3小时，回流提取次数1-6次。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，介质温度为60-80℃，液固比为5-10，回流提取时间0.5-2小时，回流提取次数2-5次。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，介质温度为75℃，液固比为7，回流提取时间1小时，回流提取次数3次。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）提取时所用乙醇或甲醇的质量浓度为50%-100%（优选70%-95%，更优选85%）。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（2）洗脱液为10%-80%的甲醇-水洗脱液（优选20%-60%，更优选30%）。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（2）用洗脱液进行洗脱时，洗脱液流速为每小时1-6倍柱体积（优选每小时3倍柱体积）。