CN103450286A - 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法 - Google Patents
独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，该方法包括以下步骤：⑴粉碎的独一味全草用酒精进行热回流提取，合并得到提取液；⑵提取液经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物；⑶独一味提取物用去离子水溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物；⑷正丁醇萃取物溶于水并上D101大孔树脂柱洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液；⑸洗脱液蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物；⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中进行分离，即可分别得到山栀苷甲酯、phloyosideII、chlorotuberside和penstemonoside。本发明简便、快速、成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及一种山栀苷甲酯、phloyoside II、chlorotuberside和penstemonoside四种环烯醚萜苷类单体化合物的制备方法，尤其涉及独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法。
背景技术
藏药独一味(Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo)为唇形科独一味属植物，生长于海拔3000m以上的碎石滩中，分布在甘肃南部、青海东南部、四川西北部、云南西北及西藏大部，其根及全草入药，是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用药之一。最早收载于1200多年的藏族医学巨著《四部医典》、《晶珠本草》中。《藏药志》记载，独一味有治浮肿后流黄水、关节积黄水、骨松质发炎、跌打损伤、筋骨疼痛和风湿关节痛等症。2005版《中国药典》收载了药材及其制剂独一味胶囊，具有活血止痛、化瘀止血之功效，用于治疗各种外科手术后的刀口疼痛、出血、外伤骨折等。现代药理学研究表明，该药具有镇痛、抗炎、镇静、改善微循环、抗胖瘤和扩张血管的作用，具有良好的利用价值和开发潜力。化学成分研究表明，植物中所含化学成分类型主要有环烯醚萜苷、环烯醚萜苷和黄酮等。
国内外文献报道山栀苷甲酯、phloyoside II、chlorotuberside和penstemonoside四种环烯醚萜苷类单体化合物具有多种生物活性，包括镇痛活性、抗炎活性、抗流感病毒、在体外抗痉挛和体外和体内免疫调节等活性。鉴于其广泛的药理活性，急需大量纯化合物为进一步药理活性研究积累足够的量。许多传统方法，包括硅胶和凝胶过滤层析制备分离纯化环烯醚萜苷需要耗费很长时间，且需要大量的有机溶剂和需要多步分离，回收率较低，成本较高。因此，寻找更有效的方法从植物中分离纯化环烯醚萜好是非常必要的。
高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)是不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，具有应用范围广，适应性好；操作简便，容易掌握；回收率高；重现性好；分离效率高，分离量较大的优点，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。本发明首次采用高速逆流色谱从独一味中成功制备分离山栀苷甲酯、phloyoside II、chlorotuberside和penstemonoside四种环烯醚萜苷类单体化合物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简便、快速、成本低廉的独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法。
为解决上述问题，本发明所述的独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为45%~75%的酒精在50~80℃下进行热回流提取，提取2~4次、每次1~3h，合并得到提取液；
⑵将所述提取液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物；
⑶将所述独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4~6次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为65~75℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物；
⑷将所述正丁醇萃取物溶于其质量20~30倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用2~4倍柱床体积、质量浓度为10~20%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液；
⑸所述含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物；
⑹所述环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为900~1000r/min、流速为1.0~2.0mL/min、温度为35~45℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为96.9~99.2%的山栀苷甲酯、纯度为95.9~98.5%的phloyoside II、纯度为95.5~97.3%的chlorotuberside和纯度为97.2~99.3%的penstemonoside。
所述步骤⑶中独一味提取物与所述去离子水的质量体积比为1：1~3。
所述步骤⑹乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比为4~6：13~15：12。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用高速逆流色谱（HSCCC）分离技术，与传统柱色谱分离技术相比，不但有效地缩短了分离时间，而且减少了工艺过程中的有机溶剂消耗和能耗。
2、本发明一次分离可以同时得到的四种高纯度环烯醚萜苷类单体化合物、性质稳定，纯度高（可达到93%以上），可应用于医药、标准物质、保健食品和保健药物等。
3、本发明采用HSCCC分离技术，该方法重现性高、简单、快速、可以有效地减少传统固液分离中的样品损耗问题。
4、由于本发明采用原料资源量丰富的独一味作为原料，因此，有效地降低了生产成本。
具体实施方式
实施例1 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为45%的酒精在50℃下进行热回流提取，提取2次、每次1h，合并得到提取液。
⑵将提取液在温度为55℃、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物。
⑶将独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为65℃、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物。
其中：独一味提取物与去离子水的质量体积比（kg/mL）为1：1。
⑷将正丁醇萃取物溶于其质量20倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用2倍柱床体积、质量浓度为10%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液。
⑸含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为55℃、压力为0.06MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物。
⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为900r/min、流速为1.0mL/min、温度为35℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为96.9%的山栀苷甲酯、纯度为95.9%的phloyoside II、纯度为95.5%的chlorotuberside和纯度为97.2%的penstemonoside。
其中：乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比（mL/mL）为4：13：12。
实施例2 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为75%的酒精在80℃下进行热回流提取，提取4次、每次3h，合并得到提取液。
⑵将提取液在温度为65℃、压力为0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物。
⑶将独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取6次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为75℃、压力为0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物。
其中：独一味提取物与去离子水的质量体积比（kg/mL）为1：3。
⑷将正丁醇萃取物溶于其质量30倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用4倍柱床体积、质量浓度为10%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液。
⑸含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为65℃、压力为0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物。
⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为1000r/min、流速为2.0mL/min、温度为45℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为97.3%的山栀苷甲酯、纯度为96.5%的phloyoside II、纯度为96.1%的chlorotuberside和纯度为97.9%的penstemonoside。
其中：乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比（mL/mL）为6：15：12。
实施例3 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为65%的酒精在65℃下进行热回流提取，提取3次、每次2h，合并得到提取液。
⑵将提取液在温度为60℃、压力为0.07MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物。
⑶将独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取5次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为70℃、压力为0.07MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物。
其中：独一味提取物与去离子水的质量体积比（kg/mL）为1：2。
⑷将正丁醇萃取物溶于其质量25倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用3倍柱床体积、质量浓度为15%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液。
⑸含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为60℃、压力为0.07MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物。
⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为950r/min、流速为1.5mL/min、温度为40℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为99.2%的山栀苷甲酯、纯度为98.5%的phloyoside II、纯度为97.3%的chlorotuberside和纯度为99.3%的penstemonoside。
其中：乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比（mL/mL）为5：14：12。
实施例4 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为55%的酒精在60℃下进行热回流提取，提取3次、每次2h，合并得到提取液。
⑵将提取液在温度为55℃、压力为0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物。
⑶将独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为65℃、压力为0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物。
其中：独一味提取物与去离子水的质量体积比（kg/mL）为1：1。
⑷将正丁醇萃取物溶于其质量20倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用2倍柱床体积、质量浓度为15%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液。
⑸含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为55℃、压力为0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物。
⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为950r/min、流速为1.5mL/min、温度为40℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为98.1%的山栀苷甲酯、纯度为97.3%的phloyoside II、纯度为96.9%的chlorotuberside和纯度为98.7%的penstemonoside。
其中：乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比（mL/mL）为4：13：12。
实施例5 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为65%的酒精在70℃下进行热回流提取，提取4次、每次1h，合并得到提取液。
⑵将提取液在温度为65℃、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物。
⑶将独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取6次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为75℃、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物。
其中：独一味提取物与去离子水的质量体积比（kg/mL）为1：2。
⑷将正丁醇萃取物溶于其质量20倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用3倍柱床体积、质量浓度为20%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液。
⑸含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为65℃、压力为0.06MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物。
⑹环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为800r/min、流速为15mL/min、温度为40℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为98.5%的山栀苷甲酯、纯度为97.6%的phloyoside II、纯度为96.7%的chlorotuberside和纯度为98.9%的penstemonoside。
其中：乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比（mL/mL）为4：13：12。
Claims (3)
1.独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：
⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为45%~75%的酒精在50~80℃下进行热回流提取，提取2~4次、每次1~3h，合并得到提取液；
⑵将所述提取液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物；
⑶将所述独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4~6次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为65~75℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物；
⑷将所述正丁醇萃取物溶于其质量20~30倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用2~4倍柱床体积、质量浓度为10~20%乙醇水溶液洗脱，得到含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液；
⑸所述含有环烯醚萜苷类物质的洗脱液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得环烯醚萜苷粗提物；
⑹所述环烯醚萜苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为900~1000r/min、流速为1.0~2.0mL/min、温度为35~45℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为96.9~99.2%的山栀苷甲酯、纯度为95.9~98.5%的phloyoside II、纯度为95.5~97.3%的chlorotuberside和纯度为97.2~99.3%的penstemonoside。
2.如权利要求1所述的独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中独一味提取物与所述去离子水的质量体积比为1：1~3。
3.如权利要求1所述的独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法，其特征在于：所述步骤⑹乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比为4~6：13~15：12。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20131218 |